Oleuropeinin tirozinaz üzerindeki inhibitör etkisi üzerine çalışma
Tirozinaz (EC. 1.14.18.1) mikroorganizmalarda, hayvanlarda, bitkilerde ve insanlarda yaygın olarak bulunur ve melanin sentezi sürecinde yer alan önemli bir hız sınırlayıcı enzimdir. İfade düzeyi ve aktivitesi melanin sentezinin hızını ve verimini belirler. Tirozinaz aktivitesinin inhibe edilmesi, ciltteki pigment hücrelerinin tirozinaz metabolizmasını iyileştirebilir, pigmentasyon oluşumunu önleyebilir ve çil, melazma, yaşlılık lekeleri ve beyazlaşma oluşumunun önlenmesinde rol oynayabilir. Quercetin ve hidrokinon gibi yaygın olarak kullanılan tirozinaz inhibitörleri iyi inhibitör yeteneklere sahiptir, ancak dermatit, cilt alerjileri ve hatta cilt kanseri gibi yan etkilere neden olabilir. Bu nedenle, güvenli, etkili ve toksik olmayan tirozinaz inhibitörleri arayışı şu anda sıcak bir araştırma konusudur. Şu anda, araştırmalar fenollerin, flavonoidlerin ve türevlerinin, polisakkaritlerin, uçucu yağların, organik asitlerin, kumarinlerin ve birçok bitki özündeki diğer bileşiklerin iyi tirozinaz inhibitörü kaynakları olduğunu göstermiştir.
Oleuropein, hidroksitirosol ve zeytin iskeletinden oluşan, zeytin ağacı boyunca dağılmış, en yüksek içeriği zeytin yapraklarında ve ardından zeytin meyvesinde bulunan bir iridoid glikozit bileşiğidir. Son yıllarda, yerli ve yabancı akademisyenler tarafından oleuropein üzerine yapılan araştırmaların sürekli derinleşmesiyle, antiviral, anti-tümör, antibakteriyel, antioksidan, hipoglisemik, hipotansif, anti Alzheimer hastalığı, cilt yarası koruması vb. gibi çeşitli biyolojik aktivitelere sahip olduğu bulunmuştur. Bununla birlikte, oleuropeinin tirozinaz aktivitesi üzerindeki etkisi hakkında çok az rapor bulunmaktadır. Bu makale, tirozinaz aktivitesi ve etki mekanizması üzerindeki etkisini inceleyerek oleuropeinin beyazlatıcı bir bileşen olarak geliştirilmesi ve kullanılması için teorik temel sağlamayı amaçlamaktadır.

Enzimatik reaksiyonlarda, enzimatik reaksiyon hızı, birim zamanda ürün artışının ölçülmesiyle ifade edilir. Başlangıç hızı, enzimatik reaksiyonun başlangıcında, eğimin neredeyse değişmeden kaldığı belirli bir süre içindeki hızı ifade eder. Belirli bir substrat konsantrasyonunda, ürün zaman ilişkisi eğrisinin sıfır geçiş teğetinin eğiminden elde edilir. Enzimatik reaksiyonun başlangıç hızını ölçme yöntemi genellikle daha az müdahale faktörü ile enzim aktivitesini belirlemek için kullanılır. Bu deneyde, A475nm Zaman eğrisi 0 ila 5,3 dakikalık reaksiyon arasında yaklaşık doğrusal bir ilişki göstermiştir. Zaman arttıkça eğri kademeli olarak düzleşti, eğim azaldı ve reaksiyon hızı da azaldı. Bu sırada, ölçülen enzim aktivitesi gerçek enzim aktivitesini temsil edemediğinden, reaksiyonun 5,3 dakikasındaki reaksiyon hızı başlangıç hızı olarak alınmıştır.
Tirozinaz aktivitesini in vitro olarak inhibe etme deneyi, hücre deneyleri ve biyokimyasal deneyler olarak ikiye ayrılır. Chan ve arkadaşları, hücrelerin gerçek fizyolojik ortamları simüle edebileceğine ve tirozinaz aktivitesini hücre deneyleri yoluyla ölçmenin, tirozinaz aktivitesini doğrudan ölçmekten daha güvenilir olduğuna ve inhibitör aktivitesini daha iyi yansıtabileceğine inanmaktadır. Bu çalışmada, oleuropeinin B16 hücre tirozinazı ve mantar tirozinazı üzerindeki inhibitör aktivitesinde farklılıklar vardı. Hücresel düzeyde, oleuropein tirozinaz aktivitesini pozitif kontrol kuersetinden daha iyi inhibe etmiştir. Bu, Li ve arkadaşlarının araştırma sonuçlarıyla tutarlıdır.
İnsan cildi ultraviyole radyasyona maruz kaldığında, cildin yaşlanmasını, pigmentasyonunu ve kırışıklıkların derinleşmesini hızlandıran büyük miktarda reaktif oksijen türleri (ROS) ve serbest radikaller üretir. Araştırmalar, yüksek ROS'un epidermiste alfa melanosit uyarıcı hormonu harekete geçirerek tirozinazı aktive ettiğini ve sonuçta melanositleri melanin üretmeleri için uyardığını göstermiştir. Antioksidanlar, reaktif oksijen türlerini ve serbest radikalleri temizleyerek, cildin durumunu iyileştirerek, pigmentleri kademeli olarak dağıtarak ve böylece beyazlatıcı bir rol oynayarak vücudun normal metabolizmasını destekler. Wang ve arkadaşları glisirizik asit, resveratrol, oksitlenmiş resveratrol ve fenetil resorsinol gibi antioksidanların, substrat olarak L-dopa kullanıldığında antioksidan aktivite ve tirozinaz inhibisyonu arasında sinerjik bir etkiye sahip olduğunu ve tirozinaz aktivitesini büyük ölçüde inhibe ettiğini bulmuştur. Zeytin acı glikozidi güçlü antioksidan aktiviteye sahiptir. Tirozinaz aktivitesinin inhibisyonunun antioksidan aktivite ile ilişkili olup olmadığı ve zeytin acı glikozidi ile antioksidanlar arasında sinerjik bir etki olup olmadığı daha fazla araştırmayı hak etmektedir.
Tirozinaz, melanin sentezinde anahtar bir enzimdir. Tirozinaz aktivitesini inhibe ederek, melanin üretimi baskılanabilir ve böylece beyazlatma etkisi elde edilebilir. Bu çalışmanın sonuçları, oleuropeinin B16 hücrelerinde ve mantar tirozinazında tirozinaz üzerinde önemli bir inhibitör etkiye sahip olduğunu ve doza bağlı iyi bir ilişki gösterdiğini göstermektedir. Kinetik analiz yoluyla, oleuropeinin mantar tirozinazı üzerindeki inhibitör etkisinin türü tersine çevrilebilir rekabetçi olmayan inhibisyondur, yani oleuropeinin tirozinaza bağlanması substrat bağlanma bölgesinin dışındaki temel bir grup üzerindedir. Oleuropein tirozinazın substrata (L-dopa) afinitesini azaltmaz, bunun yerine enzimin katalitik etkisini bloke ederek enzim aktivitesini inhibe eder ve Vm'yi azaltır. Zeytin acı glikozidi geniş bir kaynak yelpazesine, yüksek güvenliğe ve iyi antioksidan aktiviteye sahiptir. Beyazlatıcı ürünler için potansiyel bir hammadde olarak, geniş uygulama olanaklarına sahiptir.