Sophora alopecuroides'in RAW264.7 hücrelerinde lipopolisakkarit kaynaklı enflamasyon üzerindeki anti-enflamatuar etkisi ve mekanizması üzerine çalışma
Enflamasyon, vücut patojenler gibi zararlı iç ve dış uyaranlar tarafından saldırıya uğradığında veya enfekte olduğunda ortaya çıkan bir savunma tepkisidir. Vücudu korumak için bir bağışıklık tepkisini tetikler. Bağışıklık sistemi aşırı veya sürekli olarak aktive olduğunda, romatoid artrit, inflamatuar bağırsak hastalığı, tümörler gibi inflamasyonla ilgili bir dizi hastalığa yol açabilir ve sonuçta kalıcı veya geçici inflamasyonla sonuçlanabilir. Makrofajlar, enflamatuar yanıtların başlatılması, sürdürülmesi ve hafifletilmesinde merkezi bir rol oynar ve sürekli birikimleri ve aktivasyonları kronik enflamasyonun göstergesidir. Lipopolisakkarit (LPS) makrofajları aktive edebilir ve tümör nekroz faktörü alfa (TNF - α), interlökin-1 β (IL-1 β), interlökin-6 (IL-6), nitrik oksit (NO) gibi inflamatuar aracıların salgılanmasını teşvik edebilir. Bu enflamatuar aracıların aşırı salınımı organ hasarına ve kronik hastalıklara yol açabilir. NF - κ B, hücre apoptozu ve enflamatuar yanıt gibi süreçlerin düzenlenmesinde önemli bir rol oynar ve anti-enflamatuar tedavi için önemli bir hedeftir.

Sophora alopecuroides olarak da bilinen Sophora alopecuroides L, Sophora cinsinin Leguminosae familyasına ait bir bitkidir. Kuzeybatı Çin ve Orta Asya ülkelerinin çeşitli eyaletlerinde dağılım gösterir ve ısıyı temizleme ve detoksifiye etme, ağrı ve iltihabı hafifletme, rutubeti kurutma ve dizanteriyi durdurma işlevlerine sahiptir. Çin'in kuzeybatı bölgesinde önemli bir tıbbi bitkidir. Sophora alopecuroides esas olarak alkaloidler, flavonoidler, organik asitler, polisakkaritler, uçucu yağlar, steroidler, fenoller ve diğer bileşenleri içerir. Alkaloidlerin anti-enflamatuar, antikanser, antibakteriyel ve bağışıklık düzenleyici etkileri vardır, flavonoidlerin anti-enflamatuar, antiviral, antioksidan etkileri vardır ve polisakkaritlerin bağışıklık düzenleyici ve anti-tümör fonksiyonları vardır, bu da vücudun bağışıklığını etkili bir şekilde artırabilir ve anti-tümör ve bağışıklık tanıtımında önemli bir rol oynayabilir. Yukarıdaki çalışmaların hepsi Sophora alopecuroides'in belirli bir kimyasal bileşim grubuna dayanmaktadır ve geleneksel Çin tıbbı, etkili parça uyumluluğu ve etkili bileşen uyumluluğu dahil olmak üzere daha düşük ilaç dozlarıyla aynı veya daha iyi terapötik etkiyi elde edebilen çok bileşenli, çok hedefli ve çok yollu kombine etkilerin özelliklerine sahiptir. Bu nedenle, Sophora alopecuroides'in farklı kimyasal bileşim gruplarının etkinliği artırıp artıramayacağının araştırılması gerekmektedir. Bu makalede, LPS ile indüklenmiş RAW 264.7 hücrelerini Sophora alopecuroides'teki anti-enflamatuar ilaçların taranması için enflamatuar bir model olarak kullanmakta ve geleneksel su kaynatma ekstresi (WDE), su ultrasonik ekstresi (WUE), 75% etanol reflü ekstresi (ERE) araştırmaktadır, 75% etanol ultrasonik ekstraktının (EUE) yanı sıra Sophora alopecuroides'in toplam alkaloid ekstraktı (TAE), toplam flavonoid ekstraktı (TFE), toplam polisakkarit ekstraktı (TPE) ve bunların farklı etkili kısımlarının dokuz kombinasyonu. (1:1:1, 1:2:2, 1:3:3, 2:1:2, 2:2:3, 2:3:1, 3:1:3, 3:2:1, 3:3:2) anti-enflamatuar etkisi ve etki mekanizması.

Makrofajlar vücudun bağışıklık tepkisine katılır. LPS tarafından uyarıldıklarında, makrofajlar NO, TNF - α, IL-1 β, IL-6, vb. gibi pro-inflamatuar aracıların üretimini teşvik etmek için sinyal yollarını (NF - κ B gibi) tetikler. Aşırı NO üretimi, enflamasyonun ortaya çıkmasıyla yakından ilişkilidir. TNF - α ve IL-6 seviyelerindeki bir artış, hücreler tarafından daha fazla pro-inflamatuar sitokin salgılanmasını teşvik edebilir. IL-6, B hücrelerinin ve T hücrelerinin aktivasyonunu indükleyebilen ve vücudun bağışıklık tepkisine katılan önemli bir pro-enflamatuar sitokindir. IL-1 β akut veya kronik enflamasyonda yukarı doğru düzenlenir. Bu çalışmanın sonuçları, RAW 264.7'nin LPS tedavisinden sonra NO, TNF - α, IL-6 ve IL-1 β salınımının önemli ölçüde arttığını ve bir in vitro inflamasyon modelinin başarılı bir şekilde kurulduğunu göstermiştir. Sophora alopecuroides WDE, WUE, EUE, ERE ve bunların TAE, TFE, TPE'si, LPS ile uyarılan RAW 264.7 hücrelerinde NO, TNF - α, IL-6 ve IL-1 β üretimini inhibe edebilir, bunların arasında TFE, EUE, ERE TAE'nin inhibitör etkisi daha belirgindir TFE ve TPE farklı oranlarda karıştırıldıktan sonra, TNF - α salınımını değişen derecelerde inhibe edebildikleri bulunmuştur. Bunlar arasında, 1:1:1 ve 1:1:2 kombinasyonları hariç, diğer yedi kombinasyon TNF - α salınımı üzerinde tek başına hareket ettiklerinden daha iyi inhibitör etkilere sahipti. 2:1:2 kombinasyonu, önemli bir sinerjik etki göstererek en iyi inhibitör etkiye sahip olmuştur.

Sophora alopecuroides'in anti-enflamatuar aktivitesinin moleküler mekanizmasını keşfetmek için bu çalışmada, NF - κ B sinyal yolundaki anahtar proteinler IkB α, NF - κ B p65 ve p-IkB α, p-NF - κ B p65'in ekspresyonunu tespit etmek için WB kullanılmıştır. NF - κ B, IL-1 β, IL-6, TNF - α, vb. gibi birçok önemli enflamatuar aracının transkripsiyonunu düzenleyebilen enflamasyonda önemli bir düzenleyici faktördür. LPS, TLR4 reseptörlerine bağlanarak NF - κ B sinyal yolunu aktive eder, bu da makrofajların enflamatuar aracıları salgılamasına neden olan önemli bir bağlantıdır. Hücreler uyarıldığında, NF - κ B'ye bağlanan inhibitör protein IkBa, IkB α kinazın etkisi altında hızla p-IkB α'ya fosforile olur, aktif p-NF - κ B p65'i çekirdeğe salar ve böylece inflamasyonla ilgili faktörlerin sentezini ve salgılanmasını teşvik eder. Son yıllarda, alkaloidlerin, flavonoidlerin ve polisakkaritlerin anti-enflamatuar etkileri hakkında kapsamlı raporlar bulunmaktadır. Örneğin, çalışmalar Sophora flavescens alkaloidlerinin IkB α fosforilasyonunu ve p-NF - κ B p65 nükleer translokasyonunu inhibe ederek RAW 264.7 makrofajlarında LPS kaynaklı inflamasyonu hafifletebileceğini bulmuştur. Zhao ve arkadaşları Sophora flavescens total alkaloidlerinin NF - κ B aktivasyonunu inhibe ederek dekstran sülfat kaynaklı koliti hafifletebileceğini bulmuşlardır. Çalışmalar, geleneksel Çin tıbbındaki flavonoidlerin, anti-enflamatuar etkiler göstermek için NF - κ B sinyal yolundaki IkB α ve p65 proteinlerinin fosforilasyon seviyelerini azaltabileceğini göstermiştir. Li ve arkadaşları, Sophora flavescens toplam flavonoidlerinin JAK2/STAT3 sinyal yolunun aktivasyonunu inhibe ederek ülseratif kolit üzerinde immünomodülatör etkiler gösterebileceğini ve Cistanche polisakkaritlerinin JAK2/STAT3 sinyal yolunun aktivasyonunu inhibe edebileceğini bulmuştur. NF - κ B MAPK ve STAT3 aktivasyonu, RAW 264.7 makrofajlarında LPS kaynaklı enflamasyonu inhibe etmek için kullanılırken, Qu ve arkadaşlarının çalışması Pinus koraiensis'ten elde edilen polisakkaritlerin Nrf2/HO-1 sinyal yolunu düzenleyerek LPS kaynaklı enflamasyonu inhibe edebileceğini göstermiştir. Şu anda, alkaloidler, flavonoidler ve polisakkaritlerin kombinasyonunun inflamasyon üzerindeki etkileri konusunda nispeten az araştırma bulunmaktadır. Bu çalışmada, Sophora alopecuroides'teki TAE, TFE ve TPE kombinasyonu kullanıldığında, NF - κ B p65 ve IkB α proteinlerinin fosforilasyonunun önemli ölçüde azaldığı ve p-IkB α ve p-NF - κ B p65 proteinlerinin ekspresyonunun inhibe edildiği bulunmuştur. Bu durum, Sophora alopecuroides toplam biyokütle, toplam flavonoidler ve toplam polisakkarit kombinasyonunun NF - κ B yolağının aktivasyonunu inhibe ederek RAW 264.7 makrofajlarında LPS kaynaklı enflamasyonu hafifletebileceğini göstermektedir.

Özet olarak, bu çalışmada Sophora alopecuroides'in geleneksel WDE, WUE, EUE, ERE ve bunların farklı etkili kısımları TAE, TFE, TPE ve dokuz kombinasyonunun (1:1:1, 1:2:2, 1:3:3, 2:1:2, 2:2:3, 2:3:1, 3:1:3, 3:2:1, 3:3:2) anti-enflamatuar aktivitesi in vitro olarak karşılaştırılmıştır. TAE, TFE, TPE (2:1:2) kombinasyonunun RAW 264.7 hücrelerinde LPS kaynaklı enflamasyon üzerinde en iyi inhibitör etkiye sahip olduğu ve NF - κ B enflamatuar yolunun aktivasyonunu inhibe ederek in vitro anti-enflamatuar etkiler gösterdiği bulunmuştur. Bu deney sadece hücresel düzeyde anti-enflamatuar ilaçların taranmasını tamamlamış ve sadece Sophora alopecuroides'in farklı farmakolojik kısımlarının uyumluluk kombinasyonlarını taramıştır. Bununla birlikte, karmaşık kimyasal bileşim, net olmayan farmakolojik bileşenler ve etkilerinin maddi temeli gibi daha fazla araştırma gerektiren sorunlar hala mevcuttur.