Platycodon grandiflorus'tan elde edilen toplam flavonoidlerin SIRT6/NF - κ B sinyal yolağına dayalı akut karaciğer hasarlı sıçanlar üzerindeki koruyucu etkisi üzerine çalışma
Akut karaciğer hasarı (ALI), kısa vadede çeşitli nedenlerden kaynaklanan ani anormal karaciğer fonksiyonu ile karakterize bir hastalığı ifade eder. Birçok karaciğer hastalığının ilk aşamasıdır ve patogenezi karmaşıktır; ilaç zehirlenmesi, bağışıklık yanıtı, viral enfeksiyon, iskemi-reperfüzyon vb. nedenlerle oluşan akut karaciğer hasarı oksidatif serbest radikaller, enflamatuar faktörler ve hücre apoptozu ile yakından ilişkilidir. Hem yurt içinde hem de yurt dışında akut karaciğer hasarının tedavisine yönelik mevcut araştırma durumuna dayanarak, Batı tıbbı genellikle karaciğer hastalığını klinik belirtiler ve patolojik değişiklikler yoluyla teşhis etmektedir. Bununla birlikte, klinik uygulamadan hala belirli bir sapma vardır ve klinik uygulamada çeşitli nedenlerden kaynaklanan karaciğer hasarı için hala etkili çok hedefli hepatoprotektif ilaç eksikliği vardır. Geleneksel Çin tıbbının temel teorisinin ve karaciğer hastalığı üzerine klinik araştırmaların sürekli derinleşmesiyle, karaciğer hastalığının önlenmesi ve tedavisinde giderek avantajlar göstermiştir. Geleneksel Çin tıbbı teorisinde akut karaciğer hasarı üzerine yapılan araştırmalar, patogenezinin çoğunlukla pozitif eksikliğin dış patojenlere direnememesinden kaynaklandığını, bunun da nemli ısı ve toksik patojenlerin kan dolaşımına girmesine, kan stazına ve karaciğer depresyonu ve qi durgunluğuna yol açtığını bulmuştur. Bu nedenle, akut karaciğer hasarını tedavi etmek için ilaçların araştırılması ve etki mekanizmalarının incelenmesi büyük önem taşımaktadır.

İnflamatuar yanıt, akut karaciğer hasarı ve diğer hastalıkların tedavisinde yaygın bir ilgi görmüştür; bunlar arasında nükleer transkripsiyon faktörü - κ B (NF - κ B) önemli bir inflamatuar transkripsiyon faktörüdür. Karaciğer enflamatuar bir tepkiye maruz kaldığında, NF - κ B'nin asetilasyonunu uyarır, TNF - α, IL-1 β, IL-6 gibi aşağı akış enflamatuar faktörlerin transkripsiyonunu başlatır ve düzenleme için VCAM-1 ve MCP-1 gen promotör bölgelerine bağlanır, enflamatuar faktörlerin salınımını ve enflamatuar mediatörlerin sentezini arttırır. Susturucu bilgi düzenleyici faktör 2 (SIR2), canlı organizmalarda yaygın olarak bulunan nikotinamid adenin dinükleotid (NAD+) bağımlı bir deasetilazdır. İnsanlarda SIRT2'ye homolog olan yedi protein vardır: SIRT1~SIRT7. SIRT6, 19. kromozomun 13.3 ucunda yer alır ve sırasıyla 8 ve 7 ekzon tarafından 355 ve 328 amino asit uzunluğunda proteinleri kodlar. Kromatin üzerinde NF - κ B dahil olmak üzere birçok genomik proteinin H3K9 bölgesini deasetile ederek ve değiştirerek gen transkripsiyonu üzerinde inhibe edici bir etki gösterir, böylece enflamatuar faktörlerin ekspresyonunu aşağı doğru düzenler ve anti-enflamatuar etkiler gösterir.

Polygonaceae familyasına ve Polygonum cinsine ait bir bitki olan Polygonum perfoliatum L., sarılık, nefrit ödemi, mastit, boğmaca, kronik egzama, zehirli yılan ısırıkları ve nemli sıcak sarılığı gibi durumların tedavisinde kullanılan bütün bir bitkidir. Antibakteriyel, antiviral, anti mutajenik, kan basıncını düşürücü, anti-tümör ve hemostatik etkileri vardır. Guangxi Zhuang halkı bunu yaygın olarak karaciğer hastalıklarının önlenmesi ve tedavisi için kullanmaktadır. Son yıllarda araştırma grubumuz, "Gangbangui" şifalı bitkisini kullanarak karaciğer hastalıklarının önlenmesi ve tedavisi için farmakolojik madde temelini belirlemek amacıyla hepatoprotektif ve anti karaciğer hasarı özelliklerine sahip aktif bileşen toplam flavonoidler üzerinde sistematik farmakolojik, patolojik ve kimyasal bileşen ekstraksiyonu, ayırma ve içerik belirleme çalışmaları yürütmüştür. Deneyler, TFP'nin alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) aktivitesini azaltabildiğini, total süperoksit dismutaz (T-SOD) ve glutatyon peroksidaz (GSH Px) gibi antioksidan enzimlerin aktivitesini artırabildiğini ve mekanizmasının antioksidan serbest radikal, lipid peroksidasyon inhibisyonu, immün güçlendirme ve inflamatuar mediatör seviyelerinin azaltılması ile ilgili olabileceğini göstermiştir.

Bu deney, TFP'nin yukarıdaki patogenez ve özelliklere dayanarak sıçanlarda karbon tetraklorür (CCl4) ile indüklenen akut karaciğer hasarı üzerindeki koruyucu etkisini araştırmayı ve TFP'nin geliştirilmesi ve uygulanması için deneysel temel sağlayarak oksidatif stres ve inflamasyon yönlerinden hepatoprotektif mekanizmasını araştırmayı amaçlamaktadır.

Yetmiş dişi SD sıçan vücut ağırlığına göre rastgele yedi gruba ayrılmıştır: normal grup, TFP kontrol grubu (200 mg/kg), CCl4 model grubu, CCl4+silimarin grubu (120 mg/kg) ve CCl4+TFP yüksek, orta ve düşük doz grupları (200, 100, 50 mg/kg), her grupta 10 sıçan olacak şekilde. Normal gruba ve CCl4 model grubuna gavaj yoluyla distile su (8 mL/kg) verilirken, diğer gruplara birbirini takip eden 10 gün boyunca günde bir kez gavaj yoluyla ilacın ilgili dozları verilmiştir. Son uygulamadan sonra, normal grup ve TFP kontrol grubu hariç, diğer tüm gruplara akut karaciğer hasarı modeli oluşturmak için intraperitoneal olarak 12% CCl4 zeytinyağı çözeltisi (5 mL/kg) enjekte edilmiştir. Göz küresinden kan alındıktan sonra 16 saat boyunca susuz aç bırakılmış ve karaciğer dokusu toplanmıştır. Serumda karaciğer fonksiyonu ve oksidatif stres göstergelerini tespit etmek için biyokimyasal yöntemler; karaciğer dokusunda enflamatuar faktörlerin seviyelerini tespit etmek için Enzim bağlantılı immünosorbent testi (ELISA); karaciğer dokusunda SIRT6/NF - κ B yolağı ile ilgili proteinlerin ekspresyon seviyelerini tespit etmek için Western blot; karaciğer dokusu lezyonlarının derecesini incelemek için HE boyama ve karaciğer dokusunda p-NF - κ B p65 ekspresyon seviyesini gözlemlemek için immünohistokimya kullanılmıştır.

Bu deneyde, CCl4 ile indüklenen akut karaciğer hasarının sıçan modeli oluşturulmuş ve Scutellaria baicalensis'ten elde edilen toplam flavonoidler (TFP) ile müdahale edilmiştir. Karaciğer fonksiyon göstergeleri, patolojik bölümler ve ilgili enflamatuar faktörlerin ekspresyonu açısından, TFP'nin sıçanlarda akut karaciğer hasarı üzerindeki hafifletici etkisi bulunmuştur. Araştırmalarda, başarılı bir karaciğer hasarı hayvan modeli oluşturmak, hepatoprotektif ilaçların taranmasında kilit adımlardan biridir. CCl4 esas olarak serbest radikal metabolizmasını indükleyerek karaciğer dokusunun hücre zarı yapısını bozan, hücre zarı geçirgenliğini artıran ve nötrofillerin inflamatuar infiltrasyonuna neden olan oksidatif strese yol açar. Sitoplazmada ALT, AST, ALP, TBIL ve γ - glutamil transpeptidaz (γ - GT) seviyeleri artar ve lipid peroksit malondialdehit (MDA) üretimi hücre zarı yapısına zarar vermeye devam ederek kısır bir döngü oluşturur. Ayrıca CCl4, antioksidan enzimler olan total süperoksit dismutaz (T-SOD) ve glutatyon peroksidaz (GSH Px) aktivitesinde de azalmaya neden olarak enzim antioksidan sisteminde dengesizliğe yol açabilir, bu da oksidatif stres kısır döngüsü oluşturabilir ve enflamatuar reaksiyonları şiddetlendirebilir. Bu nedenle, ALT, AST, ALP, TBIL, γ - GT, MDA içeriği gibi ilgili göstergelerdeki artış ve T-SOD ve GSH Px aktivitesindeki azalma, akut karaciğer hasarının ciddiyetini belirlemek için önemli kriterler olarak kabul edilebilir. Bu deneyde, CCl4 modelleme tedavisinden sonra, normal grupla karşılaştırıldığında, model grup sıçanlarda ALT, AST, ALP, TBIL, γ - GT ve MDA serum seviyeleri önemli ölçüde artarken, T-SOD ve GSH Px aktiviteleri önemli ölçüde azalmıştır. Patolojik kesitler incelendiğinde, HE boyaması karaciğer doku yapısında ciddi hasar olduğunu, karaciğer hücrelerinin ciddi vakuolar deformasyon sergilediğini ve çok sayıda enflamatuar hücre tarafından infiltre edildiğini göstermiştir. Karaciğer lobüler yapısı ciddi şekilde hasar görerek akut karaciğer hasarı modelinin başarılı bir şekilde kurulduğunu göstermiştir.

Raporlara göre SIRT6, telomer kromatininin ve NF - κ B sinyal yolundaki aşağı akış genlerinin ekspresyonunu düzenlemektedir. NF - κ B transkripsiyon faktörü, proliferasyon, apoptoz, farklılaşma, inflamasyon ve bağışıklık sistemi düzenlemesi ile ilgili genleri düzenleyerek çevresel stres yanıtında önemli bir rol oynar. Stres olmayan koşullar altında, NF - κ B, inhibitörü I κ B α tarafından sitoplazmada izole edilir. Stres koşulları altında, I κ B α bozunarak NF - κ B transkripsiyon faktörlerinin çekirdeğe göç etmesine ve anahtar genlerin transkripsiyonunu aktive etmesine izin verir. Bu hedef genlerin önemi ve doku özgüllüğü göz önüne alındığında, NF - κ B yolunun aktivasyonu, biri NAD + bağımlı deasetilaz ve ADP riboziltransferaz SIRT6'yı içeren çeşitli mekanizmalar tarafından sıkı bir şekilde düzenlenir. Yol aktive edildikten sonra SIRT6, NF - κ B hedef geninin promotör bölgesine bağlanır ve H3 histonunun lizin 9'unu deasetile ederek gen susturmasını destekler. Mononükleer makrofajlar tarafından salgılanan TNF - α, enflamatuar yanıtı teşvik etme ve makrofajları aktive etme, enflamatuar aracıların üretimini ve salgılanmasını kontrol etme etkisine sahiptir. IL-1 β esas olarak mononükleer makrofajlar ve lenfositler tarafından salgılanır. Patojenik enflamatuar reaksiyonları tetiklemenin yanı sıra, çeşitli enflamatuar faktörlerin ekspresyonunu da teşvik eder ve akut faz enflamatuar yanıtlara katılır. IL-6, mononükleer makrofajlar tarafından salgılanan ve çeşitli biyolojik aktivitelere sahip bir enflamatuar faktördür. Karaciğer hasar gördüğünde, mononükleer makrofajlar aşırı IL-6 salgılar, bu da karaciğer hücrelerinin masif nekrozuna yol açar ve uzun vadede karaciğer fibrozuna ve hatta siroza dönüşebilir. Aynı zamanda, büyük miktarda IL-6 agregatları, VCAM-1 aracılığıyla beyaz kan hücreleri ve endotel hücreleri arasındaki teması hızlandırır ve MCP-1 aracılığıyla hasarlı karaciğer bölgesine daha fazla monosit ulaşarak enflamatuar yanıtı şiddetlendirir.

Modern araştırmalar Kangban Gui'nin öksürük ve balgam giderici, antioksidan ve antienflamatuar ve antiviral gibi zengin farmakolojik etkilere sahip olduğunu göstermiştir. Bu deneyin sonuçları, yanıklar, öksürük, herpes zoster, akut nefrit ve bakteriyel dizanteri gibi çeşitli hastalıkları tedavi etmek için klinik uygulamada yaygın olarak kullanıldığını ve bunların hepsinin iyi terapötik etkilere sahip olduğunu göstermektedir. Aynı zamanda, Kangban Gui de çeşitli dozaj formları halinde geliştirilmiş ve klinik uygulamada yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu deneyde, karaciğer fonksiyonunu belirlemek için klinik uygulamada yaygın olarak kullanılan çeşitli göstergeler test edilmiştir. Sonuçlar, TFP uygulamasından sonra, normal grupla karşılaştırıldığında, TFP kontrol grubu sıçanlarının serumundaki ana transaminaz ve karaciğer fonksiyon göstergelerinin istatistiksel olarak anlamlı bir etkisi olmadığını göstermiştir, bu da TFP'nin karaciğer fonksiyonu üzerinde olumsuz etkileri olmadığını göstermektedir; Model grupla karşılaştırıldığında, CCl4+TFP'nin her doz grubundaki sıçanların serumundaki transaminaz seviyeleri azalırken, antioksidan faktörlerin seviyeleri artmıştır, bu da TFP'nin karaciğer fonksiyon göstergelerini etkili bir şekilde iyileştirebileceğini ve vücudun antioksidan kapasitesini artırabileceğini göstermektedir. Etkili ve düşük toksisiteli bir hepatoprotektif preparat olarak geliştirilmesi beklenmektedir. Mikroskobik gözlem, tedaviden sonra sıçanlarda karaciğer doku yapısının, vakuolar boyutun ve deformasyon derecesinin model gruba kıyasla önemli ölçüde iyileştiğini ortaya koymuştur. İnflamatuar hücre infiltrasyonu önemli ölçüde azalmış ve p-NF - κ B p65 ekspresyonu zayıflamıştır. SIRT6, p-NF - κ B p65, MCP-1 ve VCAM-1 proteinlerinin ekspresyonunu tespit etmek için Western blot kullanılmıştır. Sonuçlar, TFP'nin her doz grubunda SIRT6 ekspresyonunun arttığını ve p-NF - κ B p65 ekspresyonunun azaldığını göstermiştir. Temel pro-enflamatuar faktörler MCP-1, VCAM-1, TNF - α, IL-6 ve IL-1 β'nın ekspresyonu azalmıştır, bu da TFP'nin karaciğer enflamasyonunu azaltarak ve antioksidan kapasiteyi artırarak sıçanlarda akut karaciğer hasarını etkili bir şekilde iyileştirebileceğini düşündürmektedir. Bu sonuç, TFP'nin SIRT6 ekspresyonunu teşvik ederek ve aşağı akış enflamatuar faktörlerin salınımını azaltmak için NF - κ B transkripsiyonunu inhibe ederek anti akut karaciğer hasarı etkileri gösterebileceğini düşündürmektedir.

Özetle, TFP karaciğer hasarını etkili bir şekilde hafifletebilir ve mekanizması SIRT6/NF - κ B yolunun aracılık ettiği enflamatuar yanıt ve antioksidan ile ilişkili olabilir. Bu makalenin araştırma sonuçları, karaciğer hasarını hafifletmek için TFP'nin klinik kullanımı için yeni yöntemler ve stratejiler sağlayabilir.