Diyabet nefropatisi (DN), diyabetin en yaygın mikrovasküler komplikasyonu ve son dönem böbrek hastalığının (SDBH) en yaygın nedenidir. Diyabetik nefropatinin mevcut patogenezi karmaşıktır; böbrek hemodinamiğindeki değişiklikler, iskemi, oksidatif stres, enflamatuar aktivasyon ve renin anjiyotensin aldosteron sisteminin (RAAS) aktivasyonunu içerir, böbrek fibrozuna yol açar ve sonuçta böbrek fonksiyonunu etkiler. Renal fibrozisin zamanında bloke edilmesi, DN'nin SDBY'ye ilerlemesini etkili bir şekilde önleyebilir.

RhoA/ROCK sinyal yolunun aşırı aktivasyonu, diyabetik nefropati de dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarda fibroz süreçlerine aracılık eder ve fasudil tarafından temsil edilen ROCK inhibitörleri iyi anti DN renal fibroz etkileri göstermiştir. Naringenin (NRG), anti aritmi, anti ateroskleroz, anti-inflamatuar, anti fibroz, anti-virüs, anti-tümör ve benzeri gibi çeşitli etkilere sahip olan narenciye bitkilerinden saflaştırılmış bir tür flavonoid bileşiktir. İn vivo ve in vitro araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, naringinin diyabetik nefropatideki (DN) rolü hakkında şu anda sınırlı araştırma bulunmaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada, bir DN fare modeli çoğaltılmış ve DN renal fibrozisin ilerlemesini gözlemlemek için naringin ile tedavi edilmiştir. Aynı zamanda, naringinin RhoA/ROCK sinyal yolu üzerindeki etkisini daha fazla araştırmak için fasudili pozitif kontrol grubu olarak belirledik.

32 C57BL/6 fare rastgele bir şekilde normal grup, model grup, naringin grubu ve fasudil grubuna ayrılmıştır. DN modelinin başarılı bir şekilde çoğaltılmasından sonra, fareler naringin ve fasudil ile tedavi edilirken, normal grup ve model grup fizyolojik tuzlu su kontrolü ile tedavi edildi. Fareler, serum kreatinin (Scr), 24 saatlik idrar protein ölçümü (24 saatlik Upro), kan glukozu ve vücut ağırlığındaki değişiklikleri gözlemlemek için 12 ardışık hafta boyunca ötenazi edildi; böbreklerdeki morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için HE ve Masson boyama kullanıldı; Böbreklerde RhoA, ROCK1, ROCK2, Tip-I kolajen (Col1) ve Tip-III kolajen (Col3) seviyelerini gözlemlemek için immünohistokimya kullanılmıştır; Renal RhoA ROCK1、ROCK2、p-MYPT1'in Western blot analizi, Laminin (LN) ve fibronektin (FN) seviyeleri

DN nefropatisinin erken patolojik değişiklikleri esas olarak glomerüloskleroz, renal arteriyol hasarı ve tübüler dejenerasyondur ve yavaş yavaş renal fibrozise yol açar. Geç aşamada, büyük miktarda proteinüri ve böbrek yetmezliği vardır. Naringin, flavonoidlerin temsili ilaçlarından biridir. Wenli ve arkadaşları, naringinin TGF - β 1/smad sinyal yolunu aşağı doğru düzenleyerek DN sıçanlarında böbrek fibrozunu hafifletebileceğini ve böbrek fonksiyonunu koruyabileceğini bulmuşlardır. Ning ve arkadaşları tarafından yapılan bir başka araştırma, naringinin, dönüştürücü büyüme faktörü - β 1 reseptör 1'i (TGFBR1) negatif olarak düzenleyen let-7a'nın ifadesini yukarı doğru düzenlediğini, böylece TGF - β 1/smad sinyal yolunu inhibe ettiğini ve diyabetik nefropatiyi tedavi ettiğini bulmuştur. Ayrıca naringin, oksidatif stres seviyelerini düşürerek, enflamatuar faktörlerin ekspresyonunu inhibe ederek ve hücre apoptozunu teşvik ederek diyabetik nefropatinin ilerlemesini yavaşlatabilir ve böbrek fonksiyonunu koruyabilir. Bu çalışmada, STZ'nin intraperitoneal enjeksiyonu ile tip 1 diyabet fare modeli oluşturulmuş ve daha sonra 4 hafta boyunca beslenmeye devam edilmiştir ve 24 saat Upro, DN modelinin başarılı bir şekilde çoğaltılması olarak kabul edilen modelleme öncesine göre iki kat daha büyük olmuştur. Modellemeden sonra, naringenin 50 mg/(kg - d FN ekspresyonu azaldı, renal fibroz azaldı, proteinüri ve böbrek fonksiyonu iyileşti ve kan şekeri ve vücut ağırlığında model gruba kıyasla önemli bir değişiklik olmadı, bu da naringenin ve fasudilin vücut ağırlığını ve kan şekerini etkilemeden DN renal fibrozunu iyileştirebileceğini gösterdi.

RhoA, küçük moleküllü guanozin trifosfat (GTP) bağlayıcı proteinlerde Ras süper ailesinin bir üyesidir. Tirozin kinazlar ve G proteinine bağlı reseptörler, RhoA'nın guanin nükleotid değişim faktörlerini (GEF) işe alabilir ve aktive edebilir, böylece RhoA'yı GDP bağlamanın inaktif durumundan GTP bağlamanın aktif durumuna dönüştürebilir. RhoA, iki durum arasındaki geçişi sağlamak için moleküler bir anahtar rolü oynar ve biyolojik etkiler üretmek için aşağı akış sinyal molekülleri üzerinde etkili olur. Rho ilişkili protein kinaz (ROCK), RhoA'nın keşfedilen ilk aşağı akış efektör molekülüdür ve şu anda işlevsel olarak en çok çalışılanıdır. ROCK'un göreceli moleküler ağırlığı yaklaşık 160 kDa olup serin/treonin protein kinaz ailesi sistemine aittir. ROCK'un iki alt tipi vardır: ROCK1 ve ROCK2, her ikisi de üç ana yapısal alana sahiptir: N-terminalinde bir katalitik kinaz alanı, ortada bir Rho bağlanma alanı (RBD) içeren bir sarmal sarmal alanı ve C-terminalinde sistein bakımından zengin bir pH alanı (CRD). ROCK1 ve ROCK2'nin 65% amino asit dizileri aynıdır ve kinaz domainlerinin homolojisi 92%'ye ulaşabilir. ROCK çoğu dokuda eksprese edilir, ancak farklı dokular arasında heterojenlik vardır. ROCK1 esas olarak karaciğer, testisler, dalak, böbrekler, akciğerler vb. dokularda ifade edilirken, ROCK2 esas olarak beyin, iskelet kası, kalp vb. dokularda ifade edilir. RhoA/ROCK'tan oluşan sinyal yolu, miyozin hafif zinciri (MLC), MYPT-1, CPI-17, ERM gibi aşağı akış substratları ile etkileşimler yoluyla hücre proliferasyonu, adezyon, göç ve apoptoz gibi fizyolojik aktivitelerin düzenlenmesine katılır. Patolojik durumlarda, RhoA/ROCK sinyal yolu trombosit kaynaklı büyüme faktörü (PDGF), anjiyotensin II (AngII), endotelin-1 (ET-1), monosit kemoatraktan faktör (MCP-1), interlökin-6 (IL-6), dönüştürücü büyüme faktörü - β 1 (TGF - β 1), bağ dokusu büyüme faktörü (CTGF) gibi çeşitli pro-fibrotik faktörlerin salgılanmasını düzenler. ROCK ayrıca nükleer faktör kappa B'nin (NF - κ B) aktivasyonunu indükleyebilir, bu da tümör nekroz faktörü (TNF - α) ve IL-1 β gibi pro fibrotik faktörlerin salgılanmasını artırır. Fasudil şu anda klinik kullanım için onaylanmış ilk ve tek ROCK inhibitörüdür. Güçlü vazodilatör etkisi nedeniyle subaraknoid kanama ve iskemik kalp hastalığı gibi vasküler spazm hastalıklarında yaygın olarak kullanılmaktadır. ROCK'u bloke etmek ve RhoA/ROCK sinyal yolunun sinyal iletimini inhibe etmek için ATP bağımlı kinaz alanlarına etkili bir şekilde bağlanabilir. Diyabetik nefropati alanında, fasudil de yaygın olarak çalışılmıştır ve aşağıdakiler de dahil olmak üzere birden fazla yolu etkileyerek DN'yi iyileştirir: (1) NF - κ B, FN ve TGF - β aktivasyonunu inhibe etmek, enflamatuar yanıtı azaltmak ve glomerülosklerozu hafifletmek; (2) Podosit hücrelerinin oluşumunu teşvik etmek, anormal kasılma hareketini düzeltmek, glomerüler filtrasyon membran geçirgenliğini ve proteinüri oluşumunu azaltmak; (3) Renal tübüler epitel hücrelerinin epitelyal mezenkimal geçiş (EMT) sürecini inhibe etmek ve renal interstisyel fibrozu zayıflatmak; (4) Renal vasküler ağı genişletmek, renal hemodinamiği iyileştirmek ve renal hasarı azaltmak. Bu çalışmada, normal grupla karşılaştırıldığında, model grup farelerin böbrek dokusunda RhoA, ROCK1 ve ROCK2 ekspresyonu önemli ölçüde artmış, MYPT1 Thr853 fosforilasyon seviyesi yükselmiş ve ROCK aktivitesi artmıştır; Model grupla karşılaştırıldığında, Fasudil grubunda böbrek dokusunda RhoA, ROCK1 ve ROCK2 ekspresyonu önemli ölçüde azalmış, MYPT1 Thr853 fosforilasyon seviyesi düşmüş, ROCK aktivitesi zayıflamış ve idrar proteininde azalma ve böbrek fonksiyonunda iyileşme olmuştur; Fasudil grubuna benzer şekilde, naringin grubu model gruba kıyasla böbrek dokusunda RhoA, ROCK1 ve ROCK2 ekspresyonunda önemli bir azalma göstermiştir. MYPT1 Thr853 fosforilasyon seviyesi azaldı ve ROCK aktivitesi zayıfladı, buna idrar proteininde azalma ve böbrek fonksiyonunda iyileşme eşlik etti. Ancak, fasudil grubu ile naringin grubu arasında çeşitli göstergeler açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır. Bu deneysel sonuç, RhoA/ROCK1 sinyal yolunun DN farelerde renal fibrozis oluşumunda rol oynadığını ve naringinin DN farelerde renal fibrozisi iyileştirmesinin RhoA/ROCK1 sinyal yolunun aşağı regülasyonu ile ilişkili olabileceğini düşündürmektedir.

Özetle, hayvan deneysel çalışmaları naringinin DN farelerde renal fibrozis derecesini önemli ölçüde azaltabileceğini ve mekanizmasının RhoA/ROCK sinyal yolunun aşağı regülasyonu ile ilişkili olabileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, spesifik mekanizması ve etki alanı, hücresel ve moleküler seviyelerde daha derinlemesine araştırma gerektirmektedir.