Kapsamlı hedeflenmiş metabolomik teknolojisi ve yüksek verimli dizileme teknolojisine dayalı olarak kurutulmuş mandalina kabuğunun yaşlanma mekanizmasının araştırılması
Chenpi, Rutaceae familyasından Citrus reticulata Blanco ve kültür çeşitlerinin kurutulmuş ve olgunlaşmış meyve kabuğudur. Qi'yi düzenleme ve dalağı güçlendirme, nemi kurutma ve balgamı çözme etkilerine sahiptir ve yaşlı geleneksel Çin tıbbının tipik bir temsilcisidir. Chenpi adı ilk olarak "Dietary Therapy Materia Medica "da ortaya çıkmıştır ve literatür yaşlanma süresinin değiştiğini kaydetmektedir. "Lei Gong Pao Zhi Lun" şöyle der: "En yaşlısı en harikasıdır; "Daily Materia Medica", "yıllanmış mandalina kabuğunun daha da iyi olduğunu" kaydeder. "Lei Gong'un Top Yakmasının Tıbbi Özelliklerinin Açıklanması" kitabında şöyle yazar: "Eğer toplanır ve uzun süre bekletilirse, birçok erik çiçeği yazdan geçecek ve güçlü qi tamamen ortadan kalkacak, sıcaklık kuruluk ve dağılma riski olmadan ılımlı olacak ve qi keskin kesilme tehlikesi olmadan akacaktır; "Tıbbi Ayna" kaydeder: "Chenpi iki yılda bir yaşlandırılmalıdır; "Yitang Sanshi" kayıtları: "Yeni portakal kabuğu güçlü bir auraya sahiptir ve kapsamlı bir üretim gerektirir. Üstün olarak kabul edilmesi için iki ila üç yıl geçmesi gerekir.
Geleneksel Çin tıbbının yaşlandırılması, geleneksel Çin tıbbının klinik ihtiyaçlarını daha iyi karşılamak için Çin tıbbının uygun saklama yöntemlerinden sonra yeni bir ilaçtan yaşlı bir ilaca dönüşmesi, performansında ve etkinliğinde değişikliklerle sonuçlanması anlamına gelir. Tarih boyunca geleneksel Çin tıbbının yaşlandırılması üzerine tartışmalar olmuştur. "Shennong Bencao Jing", "doğru ve yanlış ilaçların yanı sıra yeni ve eski ilaçlar da vardır ve her birinin kendi yöntemi vardır" diyerek "yeni" ve "eski" ilaçların her birinin kendine has özellikleri ve etki kuralları olduğunu belirtmektedir. Bu Jing portakal kabuğunu kaydetmekte ancak yıllanıp yıllanmadığından bahsetmemektedir. "Shennong Materia Medica Klasiği Üzerine Açıklamalar" ilk olarak altı ana yıllanmış ilaç önermiştir: "Uzun süreli yaşlandırma gerektiren her türlü kurt üzümü, turunçgil, portakal kabuğu, pinellia ternata, efedra ve wuzhuyu iyidir. Daha sonraki nesillerde tıp uzmanları geleneksel Çin tıbbının kapsamını genişletmeye devam etti. Compendium of Materia Medica'da şöyle denmektedir: "Ravent, odun hırsızları, kedi nanesi, kişniş çiçekleri, keçiboynuzu çiçekleri vb. sadece altı tür için değil, uzun süre yaşlandırmak için de uygundur; Qing Hanedanlığına kadar, "Bencao Congxin" kitabında belirtilmiştir: "Ya güçlerini azaltmak ya da ateş enerjilerini gidermek için yıllanmış otları kullanmak en iyisidir." Yaklaşık 40 çeşit yıllanmış bitki içerir. Günümüzde geleneksel Çin tıbbı da bazı Çin ilaçlarının optimum kullanım için yıllandırılması gerektiğini vurgulamaktadır. Geleneksel Çin tıbbının yaşlandırılmasının klinik uygulamaların özetine dayandığı görülebilir. Ancak literatür kayıtlarında yaşlandırma mekanizmasına ilişkin derinlemesine bir açıklama bulunmamaktadır.

Wu Zhu Yu, Qi Ai Ye, Ma Huang, Chen Pi, vb. gibi geleneksel Çin tıbbının yaşlanma mekanizması üzerine, esas olarak kimyasal bileşim ve farmakolojik etkilerin farklı yaşlanma zamanlarında karşılaştırılmasına odaklanan birçok araştırma raporu bulunmaktadır. Kaliteli araştırma derinlemesine değildir ve sonuçlar tutarsızdır. Araştırma ekibi referans olarak baca ile kürlenmiş tütün, çay ve Baijiu'daki yaşlanma ve kalite ile ilgili mikroorganizmalar fikrini kullanmıştır. Önceki araştırmalar, yaşlanma sırasında mandalina kabuğuna bağlı mikroorganizmaların büyümesi ve metabolizmasının flavonoidler ve diğer aktif bileşenlerin değişimiyle yakından ilişkili olduğunu ortaya koymuştur. Mandalina kabuğuna bağlı baskın mikroorganizma olan Aspergillus niger'in metabolizmasının flavonoidlerin artışını desteklediğine inanılıyordu. Liu, mikrobiyal metabolizma mekanizmasını ve yaşlanmış mandalina kabuğundaki aktif bileşenlerin dönüşümünü incelemiş ve sonuçlar, mikroorganizmaların mandalina kabuğunun yaşlanma sürecine dahil olduğunu ve aktif maddelerin içeriğini artırmak için mandalina kabuğundaki bileşikleri dönüştürebildiğini göstermiştir. Ayrıca, yaşlandırılmış mandalina kabuğunun yüzeyindeki bakteri ve mantar çeşitliliği farklı yaşlandırma sürelerine göre değişmektedir. Mandalina kabuğunun yaşlanma süreci sırasında mikroorganizmaların farmakolojik madde bazında değişikliklere neden olabileceğine inanılmaktadır. Çok sayıda çalışma, mandalina kabuğunun yaşlanma sürecinde mikroorganizmalar ve kimyasal bileşenler arasındaki korelasyonu doğrulamıştır, ancak metabolomik ve yüksek verimli sekanslamaya dayalı olarak mandalina kabuğundaki bağlı mikroorganizmalar ve ikincil metabolitler arasındaki etkileşimin genel analizi hakkında bir rapor yoktur. Bu makale, 1 yıl ve 3 yıl depolamadan sonra yaşlandırılmış mandalina kabuğunun ikincil metabolitlerini analiz etmek için UPLC-ESI-MS/MS yaygın hedefli metabolomik teknolojisini kullanan ve karşılaştırmalı grup örneklerindeki ikincil metabolitleri, ortak metabolitleri ve diferansiyel metabolitleri kapsamlı bir şekilde ortaya koyan ilk makaledir; Yüksek verimli dizileme teknolojisine dayanarak, örnek karşılaştırma grubundaki bağlı mikroorganizmaların topluluk yapısı ve değişiklikleri kapsamlı bir şekilde ortaya çıkarılmış ve diferansiyel mikroorganizmalar taranmıştır; Metabolomik ile tespit edilen diferansiyel metabolitler ile yüksek verimli dizileme karşılaştırması ile belirlenen diferansiyel mikroorganizmalar arasında korelasyon analizi gerçekleştirilmiştir. Araştırma sonuçları, mandalina kabuğunun yaşlanma mekanizmasının derinlemesine incelenmesi için teorik bir temel sağlamaktadır.

Örneklerin toplanması. Bu deneyde kullanılan deney numuneleri, aynı menşe, parti ve farklı depolama yıllarına ait standart depolanmış mandalina kabuğudur. Standart depolama, düzenli mevsimsel yönetim ve sıcaklık ve nem değişikliklerinin kaydedilmesi ile menşe yerinde yerinde depolamadır. Numune izlenebilirliği ve toplanması için iyi bir yöntemdir ve hatalı ortam ve yıl etkisinden kaçınabilir.

İkincil metabolitlerin analizi. Metabolomik teknolojisi, geleneksel Çin tıbbının genel kimyasal bileşimini kapsamlı ve bilimsel olarak analiz edebilir ve ginseng, Scutellaria baicalensis, Angelica dahurica, Paeonia lactiflora ve Paeonia lactiflora gibi Çin tıbbı çeşitlerinin kalite değerlendirmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu makalede, 1 yıl ve 3 yıl depolamadan sonra yaşlandırılmış mandalina kabuğundaki ikincil metabolitleri kapsamlı bir şekilde tespit etmek için kapsamlı hedefli metabolomik teknikler kullanılmaktadır. PCA analizi, OPLS-DA analizi ve ısı haritası analizi, farklı yıllara ait örnekleri net bir şekilde ayırt edebilmektedir. Bileşik alıkonma süresi ve karakteristik iyonlar (Q1 ve Q3) entegre edilerek, veri tabanından 79 fenolik asit, 143 flavonoid, 4 antrakinon, 17 lignan ve kumarin, 3 tanen, 47 alkaloid, 6 terpen ve 87 diğer sınıf dahil olmak üzere toplam 386 ikincil metabolit elde edilmiştir. Geleneksel yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ve sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (LC-MS) teknikleriyle karşılaştırıldığında, çok sayıda bileşiği tanımlama avantajına sahiptir ve kurutulmuş mandalina kabuğundaki ikincil metabolitlerin genel spektrumunu yansıtabilir. Her bir bileşiğin göreceli içeriğinin doğruluğunu sağlamak için, bu deneyde farklı örneklerden metabolit kütle spektrometresi analiz verileri elde edilmiş, tüm madde kütle spektrometresi piklerinin pik alanı entegre edilmiş ve aynı metabolitin farklı örneklerdeki kütle spektrometresi pikleri entegre edilmiş ve düzeltilmiştir. Bu deney, klinik ve farmakolojik deneylerin tasarım yöntemlerini ifade etmektedir. Kurutulmuş mandalina kabuğunun bir yıl saklanması kontrol grubu olarak, kurutulmuş mandalina kabuğu örneklerinin üç yıl saklanması ise deney grubu olarak kullanılmıştır. Kat değişimi ≥ 2 veya kat değişimi ≤ 0,5 ve VIP ≥ 1 olan diferansiyel metabolitler seçilmiştir. Gruplar arasında metabolitlerdeki fark 2 kattan fazla veya 0,5 kattan az ve VIP ≥ 1 ise, fark anlamlı olarak kabul edilir. Sonuç olarak, toplam 79 diferansiyel metabolit taranmıştır; bunlar arasında yukarı doğru düzenlenmiş farklılıklara ve yüksek bağıl içerik sıralamasına sahip bileşikler, kurutulmuş mandalina kabuğunun kalite ile ilgili metabolitleri olarak kabul edilebilir. Yaşlandırılmış mandalina kabuğunun sekonder metabolitlerinde 1 yıl ve 3 yıl yaşlandırmadan sonra diferansiyel değişikliklere sahip ilk 20 bileşik arasında, yukarı regüle edilen bileşikler şunlardır: 3,5-dihidroksi-3-metilvalerik asit, 5,7-dihidroksi-1 (3H)-izobenzofuran-on, sinapin, p-hidroksibenzoil tartarik asit, 3', 4', 7-trihidroksiflavon, kateşin, limonin, dihidrobaibei alkaloid B, kuersetin-O-rutinosin-hekzoz ve C-hekzosil-aureosin-O-sinapirilhekzoz. Bunlar arasında kateşin, limonin, 3', 4', 7-trihidroksiflavon antibakteriyel, anti-inflamatuar, antioksidan, antikanser ve diğer etkilere sahiptir ve bunların tümü potansiyel kalite değerlendirmeleri olarak kullanılabilir. İkonik bileşikler. Hastalıkların geleneksel Çin tıbbı ile tedavisi çoklu bileşen, hedef ve yol özelliklerine sahiptir. Çok sayıda bileşen arasından hastalıkları tedavi etmek için hedef bileşenlerin nasıl taranacağı, geleneksel Çin tıbbının kalite değerlendirmesi ve kalite kontrolünün anahtarıdır. Bunlar arasında küçük moleküllü bileşik veri tahmini, serum tıbbi kimyası ve bitki metabolomiği gibi yöntemler yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu deneyin sonuçları, makul gruplandırma öncülünde, UPLC-ESI-MS/MS geniş hedefli metabolomik teknolojisinin kullanımının kurutulmuş mandalina kabuğunun kalitesiyle ilgili metabolitleri verimli bir şekilde tarayabileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, taranan bileşiklerin aktivitesinin, kurutulmuş mandalina kabuğunun geleneksel işlevleriyle birleştirilerek daha fazla doğrulanması gerekmektedir.
Mandalina kabuğunun yaşlanma mekanizması. Geleneksel olarak, yaşlandırılmış mandalina kabuğunun iyi olduğuna inanılır. Bununla birlikte, mandalina kabuğunun yaşlanma sürecinde, mikroorganizmaların metabolik dönüşümünün kabuktaki kimyasal bileşenleri etkilediği, böylece aktif bileşenlerin birikimini teşvik ettiği ve iyi yaşlanmış mandalina kabuğu hedefine ulaştığı yaygın olarak bildirilmiştir. Bu sonuç, yaşlandırılmış mandalina kabuğundaki toplam flavonoid içeriğinde bildirilen artışla tutarlıdır. Bu makale, metabolomikler tarafından tespit edilen farklı metabolitler ile yüksek verimli dizileme ile tanımlanan farklı mikroorganizmalar arasında bir korelasyon analizi gerçekleştirmektedir. Sonuçlar ayrıca Aspergillus, Penicillium ve Penicillium gibi baskın bakteri cinslerinin, literatür raporlarıyla tutarlı olarak, kurutulmuş mandalina kabuğundaki aktif bileşenleri önemli ölçüde etkileyebileceğini doğrulamaktadır. Araştırma grubunun ön araştırması, kurutulmuş mandalina kabuğunun yaşlanma sürecinde, yüzeye bağlı baskın mikrobiyal grupların sürekli olarak geliştiğini ortaya koymuştur. Yaşlanma süresinin artmasıyla birlikte baskın mikroorganizmalar Zasmidium, Cladosporium, Symmetrospora ve Fusarium'dan Cladosporium, Aureobasidium, Aspergillus ve Xeromyces'e kaymaktadır. Xeromyces bisporus, 1 yıl ve 3 yıl depolanan numuneler arasında farklılık gösteren bir mikroorganizma olup kuru küfe karşı daha toleranslı bir türdür. Düşük su aktivitesi koşullarında hayatta kalabilen mikroorganizmalar, yaşlandırılmış mandalina kabuğunun aşırı kuru durumuyla tutarlı olan son derece düşük su aktivitesine (0,61) sahip yaşam ortamlarına uyum sağlayabilir. Aynı zamanda, deneysel sonuçlar Fusarium, Aspergillus ve Fusarium gibi diferansiyel mikroorganizmaların hesperidin, vanilik asit, puerarin ve asit bileşenleri gibi çeşitli aktif bileşenlerin ve aroma bileşenlerinin nispi içeriğini aynı anda etkileyebileceğini göstermiştir. Bu nedenle, kapsamlı bir değerlendirme, kurutulmuş mandalina kabuğu örneklerindeki farklı mikroorganizmaların hesperidin ve diğer flavonoidler gibi aktif bileşenlerin göreceli artışını teşvik edebileceğini ve aynı zamanda kurutulmuş mandalina kabuğunun kokusunu düzenlemek için aroma bileşenlerinin göreceli artışını veya azalışını değiştirebileceğini göstermektedir. Bu nedenle, "yıllanmış mandalina kabuğu iyidir" bilimsel çağrışımı, diferansiyel mikroorganizmaların ikincil metabolitlerin göreceli içeriği üzerindeki etkisiyle yakından ilişkili olabilir.