Kimyasal olarak modifiye edilmiş L02 karaciğer hücre zarı biyouyumlu malzemeler kullanılarak raventteki lipid düşürücü aktif bileşenlerin hızlı taranması
Geleneksel Çin tıbbındaki aktif bileşenlerin taranması, büyük iş yükü, hantal çalışma ve düşük verimlilik dezavantajlarına sahip olan tarama nesneleri olarak monomer bileşenleri ile esas olarak aktivite takibine dayanır. Geleneksel aktivite izleme yöntemleriyle karşılaştırıldığında, hücre zarı kromatografisi (CMC), spesifik tanıma ve verimli ayırma özelliklerine sahip, son yıllarda hızla gelişen bir biyolojik afinite kromatografi tekniğidir. CMC'nin temel prensibi, sabit bir faz oluşturmak için hücre zarını bir silika jel taşıyıcının yüzeyine bağlamaktır. Hücre zarı reseptörü spesifik olarak ilaç moleküllerine bağlanabilir ve ilaç molekülleri ile hücre zarı reseptörleri arasındaki etkileşim kromatografik analiz kullanılarak incelenebilir. CMC, kromatografik kolon içinde aktif farmasötik bileşenlerin in vivo etki sürecinin yaklaşık dinamik simülasyonunu elde etmek için kromatografik teknoloji, hücresel ve moleküler biyoloji ve reseptör farmakolojisinin avantajlarını birleştirir; İyon değişim reçineleri ve makro gözenekli adsorpsiyon reçineleri gibi yaygın olarak kullanılan adsorbanlarla karşılaştırıldığında CMC, kromatografik ayırmayı aktivite taramasıyla birleştirme avantajına sahiptir. Kullanımı kolay, hızlı ve kararlıdır ve yüksek hassasiyete sahiptir, bu da onu özellikle geleneksel Çin tıbbı gibi karmaşık sistemlerdeki aktif bileşenlerin taranması için uygun hale getirir.
Hücre zarı kromatografisi hazırlanırken, hücre zarı ve silika jel taşıyıcının farklı bağlanma biçimlerine göre fiziksel adsorpsiyon ve kimyasal modifikasyon olarak ikiye ayrılabilir. Fiziksel adsorpsiyon hücre zarı biyolojik afinite kromatografisi, hücre zarının kendisinin füzyon etkisi ve silika jel yüzeyindeki silikon hidroksil gruplarının adsorpsiyon etkisi kullanılarak hazırlanır; Bu tür bir kuvvet nispeten zayıftır ve hücre zarının taşıyıcıdan kolayca ayrılmasına neden olarak kromatografik kolonun ömrünün kısa olmasına neden olur. Biyolojik afinite kromatografisi için hücre membranının kimyasal modifikasyonu, silika jel ve hücre membranı arasında kovalent bağlanmayı içerir; Silika jelin silanol grubu, glutaraldehit molekülleri ile çapraz bağlanan amino grupları eklemek için silan bağlama maddesi ile bir yoğunlaşma reaksiyonuna girer. Serbest aldehit fonksiyonel grubunun bir ucu silika jel yüzeyinde elde edilebilir; Hücre zarı, oda sıcaklığında aldoamin yoğunlaşma reaksiyonlarına girmeye eğilimli çok sayıda amino grubu içerir, böylece silika jel ve hücre zarı arasında kovalent bağlantı sağlanır. Kimyasal olarak modifiye edilmiş hücre membranı biyoafinite kromatografisinde, taşıyıcı silika jel, nispeten stabil olan hücre membranına kovalent olarak bağlanır ve hücre membranı kolayca ayrılmaz, böylece kromatografi kolonunun ömrü uzar.

Ravent, Gansu Eyaleti'nden otantik bir şifalı bitkidir ve klinik uygulamada yaygın olarak kullanılan geleneksel Çin ilaçlarından biridir; antibakteriyel, anti-tümör, anti-inflamatuar, antiviral ve lipid düşürücü gibi farmakolojik etkilere sahiptir. Birçok akademisyen ve araştırma grubu, önceki çalışmalarda raventin lipit düşürücü etkisini doğrulamıştır ve araştırma grubumuz, hiperlipidemik sıçanlarda lipit düşürücü için etkili kısım olarak 30% etanol ekstraktını taramıştır, ancak spesifik farmakolojik madde temeli hala belirsizdir; Araştırma grubu ayrıca bir fiziksel adsorpsiyon L02 karaciğer hücre zarı biyolojik afinite kromatografi materyali hazırlamıştır, ancak hücre zarı ayrılması şiddetlidir ve kullanımı sınırlıdır. Bunu göz önünde bulundurarak, bu deneyde, L02 karaciğer hücre zarı biyolojik afinite kromatografi materyali hazırlamak için taşıyıcı olarak APTES modifiye silika jel kullanılmıştır. Hücre membranı yüzeyindeki hedef, raventin 30% etanol ekstraktındaki kimyasal bileşenleri spesifik olarak adsorbe etmek için kullanılmıştır. HPLC analizi, adsorpsiyondan önce ve sonra her bir kimyasal bileşenin kromatografik piklerindeki değişiklikler üzerinde gerçekleştirilmiştir. Kromatografik pikin pik alanı değişim oranına dayanarak, raventin lipid düşürücü aktif bileşenleri hızlı bir şekilde tarandı; Ve malzemenin yeniden kullanılabilirliğini araştırarak, raventin lipid düşürücü etkisinin madde temelinin yüksek verimli taranması için yeni fikirler sağladı.

Silikon jel, APTES ve glutaraldehit ile çapraz bağlanma ve yoğunlaşma reaksiyonlarına girer ve taşıyıcı olarak APTES ile modifiye edilmiş L02 hücre zarı biyo afinite malzemesi hazırlamak için hücre zarına kovalent olarak bağlanır. Taramalı elektron mikroskobu ve kızılötesi spektroskopisi başarılı hazırlığı doğrulamaktadır. APTES ile modifiye edilmiş L02 hücre membranı biyoafinite materyali, raventin 30% etanol ekstraktını adsorbe etmek için kullanılmış ve sonuçlar 11 bileşenin spesifik olarak bağlanabildiğini göstermiştir; 4 antrakinon glikozit, 5 antrakinon glikozit ve 2 bilinmeyen bileşen dahil olmak üzere, aralarında aloe emodin 😯 - β - D-glukozit, rhein 😯 - β - D-glukozit, emodin 😯 - β - D-glukozit ve bilinmeyen bileşen 1, lipit düşürücü aktivite doğrulaması için potansiyel aktif bileşenler olarak kullanılabilecek ana spesifik bileşenlerdir. Bununla birlikte, hücre zarlarının yüzeyindeki çok sayıda hedef nedeniyle, bu malzeme sadece lipit düşürücü aktif bileşenlerin ön taraması için uygundur; Ve sonraki aşamada, bilinmeyen iki bileşenin ön yapısal tanımlaması için LC-MS/MS kullanılması gerekir. L02 hücre zarı biyo afinite malzemelerinin fiziksel adsorpsiyonu ile karşılaştırıldığında, bu malzeme bir dereceye kadar kimyasal kovalent bağlar oluşturarak hücre zarının ayrılmasını önler ve kullanım sürelerini uzatır. Kan lipitlerini düşürmek için raventteki aktif bileşenlerin hızlı taranması için kullanılabilir ve ayrıca kan lipitlerini düşürmek için diğer aktif bileşenlerin hızlı taranması için referans sağlayabilir.