Kan Stazını Gidermek ve Kollateralleri Aktive Etmek için Geleneksel Çin Tıbbı, TAK1/JNK Yolağı Üzerinden Makrofaj İnfiltrasyonunu ve Aktivasyonunu Engelleyerek Diyabet Nefropatisi Sıçanlarında Renal Enflamasyonu İyileştirir
Diyabet nefropatisi (DN), diyabetin yaygın ve ciddi bir komplikasyonudur ve dünya çapında son dönem böbrek hastalığının birincil nedenidir. Günümüzde DN tedavisi temel olarak diyetle sodyum alımının sınırlandırılmasını, kan şekerinin kontrol altına alınmasını, kan basıncının düşürülmesini ve renin-anjiyotensin sisteminin (RAS) bloke edilmesini içermektedir. DN'nin ilerlemesini bir dereceye kadar geciktirebilse de, etkinliği ideal değildir. Diyabetik nefropatinin oluşumunda ve gelişiminde enflamatuar yanıtın önemli bir rol oynadığına ve makrofaj infiltrasyonu ve aktivasyonunun renal enflamasyonda merkezi bağlantılar olduğuna dair giderek daha fazla kanıt ortaya çıkmaktadır. TAK1/JNK sinyal yolu, makrofaj infiltrasyonunu ve aktivasyonunu düzenleyen önemli bir yoldur. Bu nedenle, TAK1/JNK sinyal yolunun bloke edilmesi DN'nin önlenmesi ve tedavisi için etkili bir stratejidir.

Araştırma grubumuz, "kollateralleri engelleyen kan stazının" diyabetik nefropatinin temel patogenezi olduğuna ve sendrom farklılaşması ve tedavisi temelinde kan stazını gidermek ve kollateralleri teşvik etmek için geleneksel Çin tıbbının eklenmesinin diyabetik nefropatinin tedavisinde temel ilke haline geldiğine inanmaktadır. Kan stazını gidermek ve kan dolaşımını teşvik etmek için kullanılan geleneksel Çin tıbbı çok sayıda ilaç içermektedir. Araştırma grubumuz, 20 yılı aşkın klinik uygulama ve tekrarlanan taramalardan sonra, DN tedavisi için nispeten sabit temel ilaçlar olarak Chuanxiong, Danshen, Dilong, Leech ve Scorpion olmak üzere beş Çin ilacı belirlemiştir. Önceki araştırmalarımız, kan stazını gidermek ve kan dolaşımını teşvik etmek için geleneksel Çin tıbbının DN sıçanlarında renal RAS aktivasyonunu inhibe edebileceğini, podosit gözenek membran proteini ve hücre iskeleti proteini kaybını azaltabileceğini ve DN'nin ilerlemesini geciktirebileceğini doğrulamıştır. Ancak şu anda DN durumunda bu ilacın enflamatuar yanıtı üzerine bir araştırma bulunmamaktadır. Bunu göz önünde bulundurarak, bu çalışma, kan stazını gidermek ve kollateralleri teşvik etmek için geleneksel Çin tıbbının DN sıçanlarının böbrek dokusunda makrofaj infiltrasyonu, aktivasyonu ve TAK1 / JNK sinyal yolu üzerindeki etkilerini gözlemlemek, kan stazını gidermek ve kollateralleri teşvik etmek için geleneksel Çin tıbbının hedeflerini daha da netleştirmek ve klinik uygulaması için deneysel temel sağlamak için SD sıçanlarını araştırma nesnesi olarak almaktadır.

40 SD sıçan arasından 10 sıçan rastgele normal grup (Grup C) olarak seçilmiş ve diğer 30 sıçan diyabet modelleri oluşturmak için yüksek şeker ve yüksek yağlı diyetle birlikte tek bir intraperitoneal streptozotosin (STZ, 40 mg/kg) enjeksiyonu ile beslenmiştir. Başarılı bir şekilde modellenen sıçanlar rastgele bir model grubuna (M grubu) ve bir Çin bitkisel ilaç grubuna (Z grubu) ayrıldı. Z grubu geleneksel Çin tıbbı müdahalesi almıştır. 16 hafta sonra, her sıçan grubunda 24 saatlik idrar proteini ölçümü (24 saatlik UTP) yapıldı; serumda monosit kemoatraktan protein-1 (MCP-1), interlökin-1 β (IL-1 β) ve tümör nekroz faktörü - α (TNF - α) ekspresyonunu tespit etmek için ELISA yöntemi kullanıldı; Renal doku toplanmış ve makrofaj belirteç proteini CD68 ve klasik aktive makrofaj belirteç proteini indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) ekspresyonunu tespit etmek için immünofloresan kullanılmıştır. Western blot, transforming growth factor activated kinase-1 (TAK1), p-TAK1, c-Jun N-terminal kinase (JNK) ve p-JNK dahil olmak üzere TAK1/JNK sinyal yolağı ile ilgili proteinlerin ekspresyonunu tespit etmek için kullanılmıştır.

Son yıllarda, geleneksel Çin tıbbı diyabetik nefropati konusunda daha derin bir anlayış kazanmıştır ve çoğu tıp uygulayıcısı kan stazını temel alarak tartışmaktadır. Susuzluktan muzdarip olunduğunda, Qi eksikliği ve kanın taşınamaması kan akışının gecikmesine yol açar, bu da zamanla kan stazına yol açar; Yin eksikliği ve aşırı ateş vücut sıvılarının acı çekmesine neden olabilir, bu da yetersiz vücut sıvıları ve zayıf kan dolaşımı ile sonuçlanır. Zamanla bu durum kan stazına yol açabilir. "Kan Sendromu Teorisi: Kan Stazı" şöyle der: "Meridyenler ve organlar arasında kan stazı oluştuğunda, hastalığın temel nedenini oluşturur." "Tıp Fakültesinin Temel Okumaları" şöyle der: "Kan stazının birikimi doğruluktur, zaman içinde, gece gündüz birikir." Kan stazı devam eder ve iyileşmezse, meridyen ve kollateral hastalıklardan kaynaklanır. DN'nin seyri uzundur, bu nedenle ilerleyişi geleneksel Çin tıbbındaki kümelenme ve oluşum, zamanla birikme ve kollaterallerin stazı ve tıkanması gibi değişikliklere uygundur. "Kollateralleri tıkayan kan stazı" prensibi DN'nin başından sonuna kadar devam eder ve temel patogenezini oluşturur. Kan dolaşımını teşvik etme, kan stazını giderme ve kollaterallerin tıkanıklığını açma yöntemi DN için temel tedavi prensibi haline gelmiştir. Bununla birlikte, bu kan stazının, geleneksel kan aktive edici ve staz giderici ilaçların erişemeyeceği birikimi nedeniyle dağıtılması zordur. Bu nedenle, araştırma grubumuz Danshen ve Chuanxiong gibi geleneksel kan aktive edici ve staz giderici ilaçları kullanma temelinde meridyenleri taramak ve parazitleri gidermek için sülükler, solucanlar, akrepler ve diğer özel ilaçlar ekledi. Danshen, kan dolaşımını teşvik etmek ve kan stazını gidermek için temel bir ilaçtır ve ana aktif bileşenleri salvianolik asitler ve tansinonlardır. Modern farmakolojik çalışmalar Danshen'in DN hastalarında ve deney hayvanlarında glikoz ve lipid metabolizmasını düzenleyebildiğini, oksidatif stresi, enflamasyonu ve fibrozu inhibe edebildiğini ve böbrek fonksiyonlarını koruyabildiğini göstermiştir. Chuanxiong kan dolaşımını ve qi dolaşımını teşvik edici etkiye sahiptir. Ana aktif bileşenleri ligustrazin ve ferulik asittir. Modern farmakolojik çalışmalar, Chuanxiong'un trombosit agregasyonunu ve trombozu inhibe etmek, kan viskozitesini azaltmak, mezangial hücre proliferasyonunu azaltmak ve endotelyal hücre proliferasyonunu inhibe etmek gibi çeşitli biyolojik aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir. Sülüklerin etkinliği kanı kırmak, kan stazını gidermek ve menstrüasyonu teşvik etmektir. Sülüklerin ana etken maddesi, antikoagülan, antitrombotik, lipid düşürücü, anti-enflamatuar etkileri, epitelyal mezenkimal geçişin inhibisyonu, renal tübüler epitel hücrelerinin apoptozunun azaltılması ve renal fibrozisin hafifletilmesi olan hirudindir. Toprak solucanlarının böbrek hastalığının tedavisinde kan dolaşımını ve diürezi teşvik edici etkileri vardır. Lumbricus, fibrinolitik sistemin dengesizliğini iyileştirme, trombosit aktivasyonunu inhibe etme, lipid metabolizması bozukluklarını düzenleme ve glomerüler mezangial hücrelerin çoğalmasını ve hücre dışı matrisin aşırı birikimini inhibe etme etkilerine sahip olan solucan kinaz içerir. Akrebin rüzgarı dağıtma, meridyenlerin tıkanıklığını açma ve düğümleri dağıtma etkileri vardır. Modern farmakolojik çalışmalar, akreplerin antikoagülan, antitrombotik, fibrinolizi teşvik edebildiğini, böbrek kan akışını artırabildiğini ve proteinüriyi azaltabildiğini göstermiştir. Bu beş bitkinin kombinasyonu meridyenlerin tıkanıklığını açabilir ve kan stazını ortadan kaldırabilir.

Son çalışmalar makrofaj infiltrasyonunun DN inflamatuar yanıtının karakteristik belirtilerinden biri olduğunu göstermiştir. Makrofaj infiltrasyonu hem DN hastalarında hem de DN hayvan modellerinde bulunmuş ve infiltrasyon derecesi DN proteinürisi ve böbrek fonksiyon bozukluğu ile pozitif korelasyon göstermiştir. Araştırmalar, böbrek hastalığının gelişim yönünü belirleyen ana faktörün makrofaj infiltrasyonunun miktarı değil, daha ziyade yerel dokulardaki makrofajların aktivasyon durumu olduğunu göstermiştir. Böbrek hasarından sonra, kandaki monositler böbrek dokusuna göç eder ve makrofajlara farklılaşır. Makrofajlar belirli bir mikro çevrede iki farklı aktivasyon fenotipi edinir: klasik olarak aktive edilmiş makrofajlar (M1) ve klasik olarak aktive edilmemiş makrofajlar (M2). M1 makrofajları iNOS, kemokinler (MCP-1, IL-8) ve pro-inflamatuar faktörler (TNF - α, IL-1 β) salgılayarak böbrek inflamasyonu ve fibrozise aracılık eder; M2 ise IL-1 ve IL-10 gibi anti-inflamatuar ve doku onarımı işlevleri olan anti-inflamatuar faktörler üretir. INOS, M1 makrofaj aktivasyonunun bir belirtecidir. Böbrek hasarının erken evresinde, M1 makrofajları esas olarak infiltrasyon yapar ve MCP-1, IL-1 β, TNF - α, ROS gibi inflamatuar faktörleri salarak inflamatuar yanıtı indükler ve arttırır. Bu çalışmada, normal grupla karşılaştırıldığında, model sıçan grubu böbrek dokusunda CD68 pozitif makrofajların agregasyonunda bir artış, M1 makrofaj aktivasyon belirteci iNOS ekspresyonunda bir artış ve MCP-1, IL-1 β, TNF - α gibi enflamatuar faktörlerin seviyelerinde bir artış göstermiştir. Kan stazını gidermek ve kan dolaşımını teşvik etmek için kullanılan Çin bitkisel ilaçları, DN sıçanlarında renal makrofajların infiltrasyonunu, aktivasyonunu ve inflamatuar faktörlerin salınımını inhibe edebilir ve böylece renal inflamasyonu azaltabilir.

DN böbrek dokusunda makrofajların infiltrasyonu ve aktivasyonu TAK1/JNK sinyal yolağı ile yakından ilişkilidir. JNK, mitojenle aktive olan protein kinaz ailesine (MAPK) aittir. Her MAPK ailesi, sırayla hareket eden bir dizi üç kinazdan oluşur: MAPKK kinaz (MAPKKK), MAPK kinaz (MAPKK) ve MAPK. Aktive edilmiş MAPKKK, MAPKK'yı fosforile edebilir ve aktive edebilir. Aktive edilmiş MAPKK, MAPK'yı fosforile eder ve aktive eder. Aktive edilmiş MAPK, hedef genlerin transkripsiyonunu düzenlemek için çekirdeğe transloke edilebilir. Son yıllarda, hayvan ve hücre deneyleri JNK yolağının renal enflamatuar yanıtı desteklediğini doğrulamıştır. TAK1, MAPKKK ailesine ait bir serin/treonin kinazdır, JNK'nın yukarı akışında yer alır ve JNK sinyal iletiminde önemli bir sinyal molekülüdür. TAK1/JNK sinyal yolağının aktivasyonu DN, IgA nefropatisi ve renal transplant iskemi/reperfüzyon gibi böbrek hastalıklarında görülebilir ve inflamatuar yanıtın ilerlemesiyle yakından ilişkilidir. UUO farelerinde, TAK1/JNK sinyal yolunun inhibisyonu makrofaj infiltrasyonunu azaltabilir, M1 makrofaj aktivasyonunu engelleyebilir ve inflamatuar faktör seviyelerini düşürebilir. Bu çalışmada, normal grupla karşılaştırıldığında, TAK1/JNK sinyal yolu DN sıçanlarında önemli ölçüde aktive olmuştur. Kan stazını gidermek ve kan dolaşımını teşvik etmek için kullanılan Çin bitkisel ilaçları TAK1/JNK sinyal yolu ile ilgili proteinlerin ekspresyonunu önemli ölçüde azaltabilir ve TAK1/JNK sinyal yolunun aktivasyonunu inhibe edebilir.

Özetle, araştırma sonuçlarımız, kan stazını gidermek ve kan dolaşımını teşvik etmek için kullanılan geleneksel Çin tıbbının DN sıçanlarında proteinüriyi iyileştirebileceğini ve böbrek iltihabını hafifletebileceğini göstermektedir. Etki mekanizması, TAK1/JNK sinyal yolağı aracılı makrofaj infiltrasyonu, aktivasyonu ve inflamatuar faktörlerin salınımının inhibisyonu ile ilişkili olabilir.