İmmobilize betulinik asit afinite integral kolonu hazırlama yöntemi ve uygulaması
23 hidroksi betulinik asit (23-HBA), Ranunculaceae familyasındaki geleneksel Çin tıbbı bitkisi Pulsatilla chinensis'ten izole edilen lupin tipi pentasiklik triterpenoid bir bileşiktir. Betula pubescens, Ziziphus mauritiana, Prunella vulgaris, Apocynaceae gibi çeşitli bitkilerde de dağılım gösterir ve özellikle Betula ailesinde bol miktarda bulunur. Modern farmakolojik araştırmalar, antiviral, tümör hücresi proliferasyon inhibisyonu, anjiyogenez inhibisyonu ve kombine hassasiyet gibi bir dizi etkiye sahip olduğunu göstermiştir. Örneğin, bu tür bir bileşik benzersiz bir etki mekanizmasına, son derece düşük toksisiteye ve minimum yan etkiye sahiptir, bu da onu anti-HIV-1 tedavisi için oldukça umut verici bir aday bileşik haline getirir; Örneğin, 23-HBA'nın birçok türevi, ornitin dekarboksilaz gibi hücre hayatta kalması ve büyümesi için gerekli olan spesifik enzimleri inhibe ederek rektal kanser, akciğer kanseri, lösemi, lenfoma, prostat kanseri, yumurtalık kanseri gibi çeşitli tümörlerin ve kanser hücrelerinin biyolojik aktivitesini de inhibe edebilir. Bu nedenle, 23-HBA önemli araştırma değerine sahip lider bir bileşik olarak kabul edilir.
Son yıllarda, araştırma grubumuz 23-HBA'nın türevlendirilmesi üzerine sistematik çalışmalar yürütmüş ve daha iyi aktiviteye sahip 23-HBA'nın önemli türevi 3,23-diasetil-17-asetik asit betulinik asidi (bundan sonra Türetilmiş BA olarak anılacaktır) elde etmiştir. Bununla birlikte, bu tür 23-HBA türevlerinin etki mekanizması üzerine yapılan araştırmalar henüz emekleme aşamasındadır ve hedefleri hakkında çok az rapor vardır, bu da belirsiz hedefler ve mekanizmalar ikilemiyle karşı karşıyadır. Bu nedenle, doğal ürünlerin protein/enzim hedeflerini belirlemek ve tanımlamak için etkili, hızlı ve basit bir yöntem geliştirmek çok geniş ve önemli bir uygulama beklentisine sahiptir. Son yıllarda, ilaç hedef proteinlerinin keşfi ve araştırılması için çeşitli teknolojik araçların bulunduğunu belirtmek gerekir; Bunlar arasında, afinite zenginleştirme balıkçılığına dayanan kimyasal proteomik teknolojisi, biyomoleküller arasındaki spesifik etkileşimleri kullanabilir veya simüle edebilir ve karmaşık karışımlardan belirli maddeleri seçici olarak analiz etmek ve saflaştırmak için kromatografi için sabit bir faz görevi görebilir. Bu nedenle, yüksek verim ve düşük maliyet gibi önemli avantajlarla küçük moleküllü ilaç protein hedeflerini incelemek için ana yöntemlerden biri haline gelmiştir. Şimdiye kadar, afinite kromatografisi takrolimus, siklosporin, metotreksat gibi çeşitli ilaçların hedef proteinlerinin araştırılmasında başarıyla uygulanmıştır. 23-HBA türevleri ile bağlanmış yeni bir afinite kromatografi kolonu hazırlayarak, ilgili hedef proteinleri keşfetmek için hücrelerden veya dokulardan ekstrakte edilen proteinlerin afinite taramasını araştırıyoruz. Bunun, doğal ürünlerin hedef proteinlerini aramak ve incelemek için yeni fikirler ve yöntemler oluşturması beklenmektedir; Aynı zamanda, küçük moleküllü doğal ürünler ile farklı hedefler arasındaki etkileşimi incelemek için de önemli bir araştırma platformu sağlamaktadır.
Yaygın afinite zenginleştirme matris malzemeleri arasında silika jel iyi kromatografik performansa sahiptir, ancak asit ve alkali direnci zayıftır; Reçine ve agaroz geniş bir pH aralığı için uygundur, ancak zayıf mekanik mukavemete sahiptir. Monolitik kolon, hızlı analiz ve akış hızı gradyan modu için uygun olan bir kromatografik kolonda monomerler, çapraz bağlayıcılar, başlatıcılar ve gözenek oluşturucu maddelerin bir karışımının yerinde polimerizasyonu ile oluşturulan sürekli yataklı bir sabit fazdır. Geleneksel paketlenmiş kolonlarla karşılaştırıldığında, basit hazırlama yöntemi, kolay modifikasyon, yüksek kolon verimliliği, iyi geçirgenlik, düşük geri basınç ve hızlı kütle aktarım hızı avantajlarına sahiptir; Aynı zamanda, biyomoleküllerin ayrılması ve analizinde büyük avantajlara sahip olan kontrol edilebilir gözenek boyutu avantajına da sahiptir. Bu nedenle, asit ve alkali direncine ve iyi biyouyumluluğa dayanan yeni polimer bazlı dökme malzeme afinite kromatografisinin geliştirilmesi önemli teorik ve pratik öneme sahiptir.
Şu anda 23-HBA bileşikleri ile bağlanmış organik polimer monolitik kolonlar hakkında literatürde herhangi bir rapor bulunmamaktadır. Bu çalışmada, 100 μm I.D. (iç çap) kapiler kolonda in-situ termal polimerizasyon yoluyla yeni bir immobilize 23 HBA hedef polimer monolitik kolon poli (GMA-EDA-BA-co EDMA) hazırlamak için daha önce bildirilen "tek pot yöntemi" kullanılmıştır; Aynı zamanda, hazırlanan monolitik kolonun bileşimini ve oranını kapsamlı bir şekilde araştırdık ve etki mekanizmasını araştırdık.

Bu makalede, doğal ürünlerin küçük moleküllerini immobilize etmek için bir afinite kromatografi kolonu hazırlamak için bir yöntem araştırılmıştır. İlk olarak, aktif etilendiamin gruplarına sahip EDA-BA fonksiyonel monomerleri (ligandlar), aktiviteyi önemli ölçüde etkilemeyen 28 pozisyonu değiştirilerek sentezlenmiştir. Poli (GMA-EDA-BA co EDMA) integral kromatografi kolonları, diğer monomerler ve çapraz bağlama ajanları ile "tek pot yöntemi" ile hazırlanmıştır. Bu çalışmanın özü, tanıtım değeri olan doğal ürünlerin küçük moleküllerini immobilize etmek için bir afinite kromatografi kolonu hazırlama yöntemi geliştirmektir. "Tek pot yöntemi", sadece zamandan tasarruf etmek ve monomer bileşiklerinin saflaştırma maliyetini düşürmekle kalmayıp aynı zamanda kromatografik kolonun afinitesini de koruyarak hazırlık verimliliğinde büyük avantajlara sahiptir. Bununla birlikte, fonksiyonel monomerlerin (ligandların) ticarileştirilme seviyesi, yöntemin daha fazla tanıtım değerini belirler; Şu anda, bazı eksiklikleri olan her küçük moleküle dayalı türev tasarımı yapmak hala gereklidir. Bu afinite kromatografi kolonunun karmaşık sistemlerde pratik uygulaması ve tanıtımı için, sonraki deneylerde daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.
Doğal ürünler her zaman yeni ilaç keşfi için önemli bir kaynak olmuştur ve ilgili afinite kromatografi kolonlarını hazırlamak için doğal ürünlerin immobilize edilmesi, doğal ürünlerin geliştirilmesine yardımcı olmakta ve böylece araştırma sıcak noktalarından biri haline gelmektedir. Bu makale, doğal ürünlerin hedef proteinlerini aramak ve incelemek için hızlı, etkili ve uygulanabilir bir yöntem oluşturmayı amaçlamaktadır; Aynı zamanda, küçük moleküllü doğal ürünler ile hastalıklarda iyi bir etkinlik göstermesi beklenen farklı hedefler arasındaki etkileşimi keşfetmek için önemli bir araştırma yöntemi ve platformu da sağlar. Etkiyi elde etmenin ana yolu, alfa amilaz ve alfa glukozidazı inhibe etmek, böylece polisakkaritlerin hidrolizini azaltmak ve glikan sentezini teşvik etmektir. Bu, BA'nın alfa glukozidaz ile bir afinite ilişkisi oluşturabileceğini ve böylece önemli kromatografik tutma etkisi elde edebileceğini göstermektedir. Bu çalışma, bu integral kolonun etki mekanizmasını araştırmak için bilimsel bir temel sağlamaktadır, ancak gerçek örneklerdeki spesifik uygulamasının sonraki çalışmalarda daha da geliştirilmesi gerekmektedir.