Kokmuş şakayıktan feniletanolik glikozitlerin tanımlanması ve insan akciğer adenokarsinomu A549 hücrelerine karşı in vitro mekanizma çalışması
Akciğer kanseri, bronşiyal mukoza ve bezlerde meydana gelen kötü huylu bir tümördür. Ulusal Kanser Merkezi tarafından sağlanan verilere göre, 2022 yılında Çin'de akciğer kanseri görülme oranı 10,6% ve ölüm oranı 24% olacak ve Çin'deki kötü huylu tümörlerin ölüm oranında ilk sırada yer alacak ve kadın hastaların oranı yıldan yıla artacak ve daha genç olma eğiliminde olacaktır. Geleneksel Çin tıbbı, çok bileşenli ve çok hedefli avantajları nedeniyle, tümör ilerlemesini geciktirebilir, tümör hücresinin radyoterapi ve kemoterapiye duyarlılığını artırabilir, ameliyat sonrası enfeksiyonları azaltabilir ve çeşitli yollarla radyoterapi ve kemoterapinin neden olduğu advers reaksiyonları en aza indirebilir, böylece tümör nüksünü ve metastazı ve uzun süreli stabil tümörleri önleme ve tedavi etme hedefine ulaşabilir. Kokmuş Şakayık, kötü huylu tümörlerin tedavisi için Hunan halk tıbbında keşfedilen etkili bir geleneksel Çin ilacıdır ve 40 yıldan fazla tekrarlanan klinik ve bilimsel araştırma uygulaması ile seçilmiştir. Kokmuş şakayık hafif bir yapıya, keskin ve acı bir tada sahiptir ve "rüzgar ve rutubeti giderme, detoksifiye etme ve kan stazını dağıtma, şişlik ve ağrıyı azaltma" etkilerine sahiptir. Hunan bölgesinde başta akciğer kanseri olmak üzere çeşitli tümörlerin tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak, kokmuş şakayığın anti-tümör tedavisindeki etkili bileşenleri ve mekanizmaları henüz net değildir. Araştırma grubunun ön deneylerinde, Paeonia lactiflora'nın feniletanolik glikozitler açısından zengin olduğu ve iyi bir anti-tümör aktivitesine sahip olduğu bulunmuştur. Bu çalışmada, Paeonia lactiflora feniletanolik glikozitlerinin anti-tümör etkisini ve mekanizmasını daha fazla incelemek ve etkili ve düşük toksisiteli geleneksel Çin tıbbı preparatlarının geliştirilmesi için temel oluşturmak amacıyla Paeonia lactiflora'daki feniletanolik glikozitleri daha fazla tanımlayacağız ve A549 hücre proliferasyonunu in vitro olarak inhibe etme mekanizmalarını araştıracağız.

Akciğer kanseri, geleneksel Çin tıbbında "akciğer birikimi" ve "akciğer taşı" kategorilerine ait olan, bronşiyal mukoza ve bezlerde meydana gelen kötü huylu bir tümördür. Çağdaş tıp uzmanları, akciğer kanserinin sürekli artışının, akciğerlerde toksik patojenlerin birikmesine yol açan çevre kirliliği veya uzun süreli sigara içiminden kaynaklandığına inanmaktadır. Akciğerlerin qi hareketi bozulur ve toksinler ile qi ve kanın birleşimi zamanla akciğer birikimine yol açar. En temel patolojik mekanizma kanser toksini, balgam ve kan stazının konsolidasyonudur; eksiklik ve fazlalık kombinasyonu ana patolojik değişikliklerdir. Ünlü bir geleneksel Çin tıbbı uygulayıcısı ve Hu Xiang Ouyang'ın çeşitli hastalıklar ekolünün mirasçısı olan Profesör Ouyang Qi'nin akciğer kanseri tedavisi ve ameliyat sonrası nüksün önlenmesi konusundaki deneyimlerinden yararlanılmıştır, Akciğer kanserinin etiyolojisi ve patogenezinin patojenik toksinlerin istilasına, akciğer fonksiyonunun kaybına yol açan yetersiz pozitif qi'ye, balgam birikimine ve zamanla durgunluğa bağlı olduğuna, vücutta hem qi hem de kan yin ve yang eksikliğine yol açtığına ve sonuçta akciğer kanserinin ortaya çıkmasına neden olduğuna inanıyoruz. Akciğer kanserinin ana patogenezi, patojenik faktörler, balgam, pıhtılaşma ve toksin gibi patojenik faktörlerin yanı sıra qi durgunluğu ve kan stazı birikimi ile karakterizedir. Tedavi prensibi detoksifiye etmek ve kan stazını gidermek, balgamı ortadan kaldırmak ve nodülleri dağıtmaktır. Kokmuş şakayık, Verbenaceae familyasından bir bitki olan Clerodendrum bungei Steud'un gövdesi ve yaprağıdır. Çin'de yaygın olarak bulunur ve bol miktarda tıbbi kaynağa sahiptir. Doğası sakin, keskin ve acı bir tada sahiptir. Antik literatür, akciğer kanseri için "detoksifikasyon ve kan stazını giderme, balgamı ortadan kaldırma ve nodülleri dağıtma" tedavi prensibi ile uyumlu olan "rüzgar ve nemi dağıtma, kan stazını detoksifiye etme ve dağıtma, şişliği azaltma ve ağrıyı hafifletme" işlevlerine sahip olduğunu kaydeder. Araştırmalar, hem kokmuş şakayık bileşiğinin hem de ekstraktının iyi bir anti-tümör aktivitesine, özellikle de akciğer kanserine karşı en iyi anti-tümör aktivitesine sahip olduğunu göstermiştir. Ön araştırmada, araştırma ekibi kokmuş şakayığın kaynatma ve farklı ekstrakte edilmiş bileşenleri üzerinde çoklu sıvı kalite analizleri gerçekleştirdi ve kokmuş şakayığın ana bileşenlerinin feniletanolik glikozitler olduğunu ve bunların arasında ana bileşenlerin yaprak benzeri ve heterojen yaprak benzeri glikozitler olduğunu buldu. Deneysel tarama ve gösterimden sonra, kokulu şakayık feniletanolik glikozitlerinin iyi anti-tümör etkilere sahip olduğu bulunmuştur. Bu nedenle, esas olarak yaprak benzeri ve heterojen yaprak benzeri glikozitlerden oluşan feniletanolik glikozitlerin, kokulu şakayıkların anti-tümör etkilerinin ana bileşenleri olabileceği tahmin edilmektedir.

EphA2, reseptör tirozin kinazların (RKT'ler) en büyük alt ailesi olan Eph ailesinin ana üyesidir ve çeşitli malign tümörlerde, özellikle yüksek malignite ve güçlü invazyon ve metastaz kabiliyetine sahip tümörlerde aşırı eksprese edilir ve akciğer kanserinin invazyonu ve metastazında rol oynar. Araştırmalar, EphA2 reseptörlerinin akciğer kanseri hastalarında ve akciğer kanseri hücre hatlarında önemli ölçüde ifade edildiğini ve ifade seviyesi ne kadar yüksekse, hastaların prognozunun o kadar kötü olduğunu bulmuştur. Akciğer kanseri dokusunda, epidermal büyüme faktöründe (EGFR) fosforile EphA2 S897'de bir mutasyon gözlenmiş ve hücre zarında ekson 19 delesyonu bulunmuştur. EphA2 biyolojik etkilerini iki şekilde gösterir: ligand bağımlı ve ligand bağımsız. Bir yandan, EphrinA1 ligandı EphA2 reseptörüne bağlandığında, EphA2 internalizasyona uğrar ve daha sonra ubikitinasyon yoluyla bozunur; Aynı zamanda, EphA2 fosforilasyon için tirozin kinaz tarafından aktive edilirken, EphA2 S897 bölgesi defosforile edilir, böylece PI3K/ATK ve Ras/MAPK gibi sinyal yollarını inhibe ederek ligand bağımlı antitümör etkiler gösterir. Öte yandan, EphrinA1 ligandı düşük eksprese edildiğinde ve EphA2 yüksek eksprese edildiğinde, EphA2 fosforile olur ve S897 bölgesi yoluyla aktive olurken, tirozin fosforilasyon seviyesi azalır, böylece PI3K/ATK/mTOR ve Pyk2/c-Src sinyal yollarını aktive ederek liganddan bağımsız tümörijenik etkiler gösterir. Ligand bağımlı olmayan EphA2 sinyali tümör proliferasyonunu ve metastazını teşvik edebilir, tümör ilaç direncini artırabilir ve tümör kök hücresi benzeri özellikleri koruyabilir. EphA2'nin ligandla aktive edilen antikanser ve ligandla aktive edilmeyen pro kanser olmak üzere ikili aktiviteye sahip olduğu ve EphA2 S897 bölgesinin defosforilasyonu veya fosforilasyonunun iki zıt biyolojik etkiyi kontrol eden anahtar olduğu görülebilir. EphA2 S897'nin defosforilasyonu ligand EphrinA1 ile ilgiliyken, EphA2 S897 üzerindeki fosforilasyon en erken ve tanınan önemli faktör olan ATK ile ilgilidir. ATK fosforilasyonu, EphA2 faktörünün hücre göçünü ve istilasını teşvik etmesinde önemli bir faktörken, EphrinA1 ligandının EphrinA1'e bağlanması ATK aktivasyonunu inhibe eder ve tümör hücresi göçünü baskılar. EphA2'nin ATK'nın hem yukarı akış negatif düzenleyicisi hem de aşağı akış efektörü olduğuna dair raporlar vardır. PI3K/ATK/mTOR yolağının aktivasyonu, ligand EphrinA1'lerin yokluğu ile birleştiğinde, EphA2'nin bir tümör baskılayıcıdan ATK tarafından fosforile edilen ve malign tümör gelişimini destekleyen bir pro tümör faktörüne geçmesine neden olur. Raporlara göre, EphA2, Wnt - β - katenin yolu aracılığıyla mide kanseri hücrelerinde EMT'nin ilerlemesini teşvik etmektedir.

Araştırma ekibi tarafından yapılan önceki araştırmalar, kokulu şakayık özütünün akciğer kanserinde EMT ile ilgili faktörler Vimentin, Slug, Snail, Twist ve Cmyc'nin ekspresyonunu önemli ölçüde azaltabileceğini ve Wnt - β - catenin yolunu düzenleyerek akciğer kanserinin EMT sürecini inhibe edebileceğini göstermiştir. Bu çalışmada, Paeonia lactiflora feniletanolik glikozitlerinin ekstraktlarının A549 hücrelerinin çoğalmasını, göçünü ve istilasını önemli ölçüde inhibe edebildiğini ve ayrıca EphA2, mTOR, p-mTOR, β - catenin, GSK-3 β, P-GSK-3 β ve P-ATK proteinlerinin ekspresyonunu baskıladığını bulduk. Bunlar arasında, P-ATK'nin aşağı regülasyonu özellikle önemlidir ve EphA2 proteininin aşağı regülasyonu da EphrinA1'in ekspresyonunu yukarı regüle edebilir. Kokmuş şakayık feniletanolik glikozit ekstresi, EphA2'nin ligand EphrinA1 ile bağlanmasını indükleyebilir, ligand EphrinA1 bağımlı anti-kanser yolunu teşvik edebilir ve EphA2, P-ATK, mTOR ve diğer faktörleri inhibe ederek, EphA2/ATK/mTOR sinyal yolunu bloke ederek antitümör etki gösterebilir. P-EphA2'nin artışı ligand bağımlılığından kaynaklanmaktadır. EphA2 üzerindeki S897 bölgesi defosforilasyona uğramasına rağmen, EphA2 tirozin kinaz fosforilasyon ile aktive edilir, bu nedenle genel P-EphA2 yukarı regüle edilebilir. Ancak anti-tümör mekanizması çok karmaşıktır ve tümör hücrelerinin kaderi tek bir yolla belirlenmez. Bu çalışma, kokulu şakayığın anti-tümör moleküler mekanizmasını belirlemek ve EphA2 hedeflerini hedefleyen yüksek verimli ve düşük toksisiteli geleneksel Çin tıbbı özleri geliştirmek için deneysel kanıtlar sunmaktadır.