Qingpi tıbbi malzemelerinin farklı spesifikasyonlarının UPLC karakteristik spektrumları ve çoklu indeks bileşen içerikleri üzerine karşılaştırmalı çalışma
Qingpi ilk olarak "İnci Kesesi" kitabında kaydedilmiştir. Li Shizhen, "Qingju kabuğu eski zamanlarda işe yaramazdı, ancak Song Hanedanlığı'na kadar tıp uzmanları onu kullanmaya başlamadı" demiştir. Song Hanedanlığı döneminde olgunlaşmamış ve olgun portakal kabukları karşılaştırılmış ve biraz farklı tıbbi etkilere sahip oldukları görülmüştür, dolayısıyla Qingju kabuğu ile Huangju kabuğu arasındaki ayrım da buradan gelmektedir. Qingpi, Citrus reticulata Blanco ve Rutaceae familyasındaki ekili çeşitlerinin kurutulmuş veya olgunlaşmamış meyve kabuğunu ifade eder. Tıpta kullanılan Qingpi için iki farklı özellik vardır: Mayıs ve Haziran ayları arasında yere düşen genç meyvelerin toplanması, güneşte kurutulması ve yaygın olarak "Geqingpi" olarak bilinmesi; Olgunlaşmamış meyvelerin Temmuz'dan Ağustos'a kadar hasat edilmesi, kabuktan tabana doğru uzunlamasına dört yaprağa kesilmesi, tüm yaprakların çıkarılması ve güneşte kurutulması, yaygın olarak "Dört Çiçekli Yeşil Kabuk" olarak bilinir. Yeşil deri doğası gereği sıcaktır, acı ve keskin bir tadı vardır. Karaciğer, safra kesesi ve mide meridyenlerine geri döner. Karaciğeri yatıştırma ve qi'yi parçalama, birikimi azaltma ve durgunluğu giderme etkilerine sahiptir. Göğüs ve kaburga ağrısı, fıtık ağrısı, meme fetişi, meme apsesi, gıda birikimi ve qi durgunluğu ve karın şişkinliği ve ağrısı için kullanılır. Qingpi'nin ana bileşenleri uçucu yağlar, flavonoidler, amino asitler vb.dir. Modern farmakolojik çalışmalar Qingpi'nin gastrointestinal sistemi düzenleme, safra akışını teşvik etme, anti aritmik etkiler, balgam söktürücü etkiler ve mastiti tedavi etme etkilerine sahip olduğunu göstermiştir. Yeşil derinin iki özelliği biraz farklı işlevsel endikasyonlara sahiptir. Bir tür yeşil deri esas olarak qi durgunluğunu kırmaya odaklanırken, diğer tür karaciğeri düzenlemeye ve qi'yi düzenlemeye odaklanır.
Ayrıca, ikisinin bileşimlerinde de küçük farklılıklar vardır. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, yeşil kabuğun farklı özelliklerinin özellikleri ve tanımlanması konusunda farklı düzenlemeler yapmıştır ve içerik belirleme maddelerinin yalnızca hesperidin için sınır gereksinimleri vardır. Li ve arkadaşlarının araştırma sonuçları, Geqingpi'deki hesperidin ve sinomenin içeriğinin Sihuaqingpi'dekinden daha yüksek olduğunu, N-metil amin ve uçucu yağ içeriğinin ise daha düşük olduğunu göstermiştir. Farklı bölgelerden iki spesifikasyondaki dört bileşenin yüksek ve düşük içeriğinin eğilimi temelde aynıydı. Zhao ve arkadaşları Eucommia ulmoides ve Eucommia ulmoides'in uçucu yağlarını analiz etmek için GC-MS kullanmış ve geraniol, nerolidol ve α - isoterpinene dahil olmak üzere dokuz bileşiğin Eucommia ulmoides'e özgü olduğunu bulmuştur. Ana bileşenler olan limonen ve linalol, Eucommia ulmoides'in iki katından daha fazlayken, diğer bileşenlerin içeriği büyük ölçüde değişiklik göstermiştir. Yi ve arkadaşları da bileşenlerini incelemek için gaz kromatografisi ve sıvı kromatografisi kullanarak Geqingpi ve Sihuaqingpi'nin bileşiminde bazı farklılıklar olduğuna işaret etmiştir. Yukarıdaki çalışmaların tümü Geqingpi ve Sihuaqingpi arasındaki kimyasal bileşimde farklılıklar olduğunu göstermektedir.
Bu çalışma, Qingpi ve Sihua Qingpi'nin ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) karakteristik spektrumlarını kemometrik yöntemlerle birleştirerek, Qingpi'nin iki spesifikasyonu arasındaki farkları ve Qingpi tıbbi malzemelerinin iki spesifikasyonundaki beş etkili bileşenin içeriğini karşılaştırarak, iki spesifikasyondaki Qingpi miktar standartlarını iyileştirmek için referans sağlamıştır.

 

Test çözeltisinin hazırlanması. Bu çalışmada, ekstraksiyon çözücülerinin (metanol, 70% metanol, 50% metanol, etanol, 70% etanol, 50% etanol), ekstraksiyon yöntemlerinin (ultrasonik ekstraksiyon, ısıtma reflüsü) ve ekstraksiyon sürelerinin (15, 30, 45 dakika) kromatografik pik "toplam pik alanı/örnek boyutu" ve değerlendirme göstergeleri olarak sinomenin, hesperidin, naringin ve hesperidin içerikleri ile her bir bileşenin karakteristik spektrumu ve içerik tayini üzerinde. Sonuçlar, 30 dakika boyunca 70% metanol ile reflü ısıtmanın en iyi etkiye sahip olduğunu göstermiştir.
Özellik haritalarının oluşturulması ve analizi. Özellik haritası çalışmasının sonuçları, hem Geqingpi hem de Sihuaqingpi'nin UPLC özellik haritalarında 7 ortak pik olduğunu göstermiştir. Geqingpi ve Sihuaqingpi'nin beş karakteristik bileşeni referans standartlar aracılığıyla tanımlanmıştır: sinomenin, naringin, hesperidin, naringin ve hesperidin. Farklı sulu fazlar (0.1% fosforik asit ve 0.1% formik asit), iki farklı tip kromatografik kolon Waters ACQUITY HSS T3 (100mm × 2.1mm, 1.8 μ m), YMC Triart C18 (100mm × 2.1mm, 1.9 μm) ve farklı tespit dalga boylarının (275nm ve 284nm), kolon sıcaklıklarının (38, 40, 42 ℃) ve akış hızlarının (0,28, 0,30, 0,32 mL/dak) Qingpi karakteristik spektrumlarının kromatografik pikleri üzerindeki etkilerini karşılaştırmıştır. Sonuçlar, sulu faz olarak 0.1% formik asit içeren Waters ACQUITY HSS T3 (100mm × 2.1 mm, 1.8 μm) kromatografik kolon kullanılarak, 275nm tespit dalga boyu, 40 ℃ kolon sıcaklığı ve 0.30mL/dak akış hızı kromatografik koşulları altında kromatografik piklerin elde edildiğini göstermiştir. Ayırma derecesi iyidir, taban çizgisi sabittir, kromatografik piklerin sayısı yüksektir ve sinyal buna bağlı olarak yüksektir.
Geqingpi ve Sihuaqingpi arasındaki kimyasal bileşim farkı. Bu çalışmada belirlenen Qingpi tıbbi malzemelerinin farklı spesifikasyonlarının UPLC karakteristik spektrumları, hem Geqingpi hem de Sihuaqingpi'de 7 ortak pik tespit etmiş ve bunlardan 5 karakteristik pik tanımlanmıştır. Pik 1 sinomenin; Pik 3 Yunxiang pomelo kabuğu glikozidi; Pik 4 hesperidin; Pik 6 Chenpi ekstraktı; Pik 7 portakal kabuğu ekstraktı olarak belirlenmiştir. Bu çalışmada, HCA, PCA ve OPLS-DA, yeşil kabuklu tıbbi malzemelerin farklı özelliklerini iki kategoride sınıflandırmak için kullanılmıştır; Daha ileri analizler, 1, 4 ve 2 numaralı piklerle temsil edilen kimyasal bileşenlerin, Qingpi şifalı bitkilerinin bu iki özelliği arasındaki diferansiyel bileşenler olduğunu ortaya koymaktadır. Bu nedenle, bu üç bileşen, Qingpi şifalı bitkilerinin bu iki özelliğini ayırt etmek için daha ileri analizler için giriş noktaları olarak kullanılabilir.
Flavonoidler Qingpi'deki ana aktif bileşenlerdir. Geqingpi ve Sihuaqingpi'de bilinen beş flavonoidin içerik belirleme sonuçları, Geqingpi'deki sinomenin ve hesperidin içeriğinin Sihuaqingpi'den daha yüksek olduğunu, Geqingpi'deki naringin ve hesperidin içeriğinin ise Sihuaqingpi'den daha düşük olduğunu göstermiştir. Genel olarak, Qingpi Yunxiangyupi'nin iki spesifikasyonundaki naringin içeriği nispeten benzerdi. Bağımsız örneklem t-testi analizi sinomenin, hesperidin ve naringindeki farklılıkların istatistiksel olarak anlamlı olduğunu göstermiştir. Bu sonuç Li ve arkadaşlarının araştırma bulgularıyla tutarlıdır. Bu deneyde incelenen flavonoidlere ek olarak, uçucu yağ da Qingpi şifalı bitkilerinin etkili bileşenlerinden biridir. Zhao'nun Geqingpi ve Sihuaqingpi'nin uçucu yağları üzerine yaptığı araştırma, geraniol, nerolidol ve α - isoterpinene dahil olmak üzere dokuz bileşiğin Geqingpi'ye özgü olduğunu göstermiştir. Ana bileşenler olan limonen ve linalool, Sihuaqingpi'nin iki katından daha fazladır. Klinik uygulamada, Four Flower Green Skin'in fonksiyonel endikasyonları Geqing Skin'inkilerden daha hafiftir; bu da hesperidin ve sinomenin gibi aktif bileşenlerin yanı sıra Geqing Skin'e kıyasla Four Flower Green Skin'deki uçucu yağ içeriğinin daha düşük olmasıyla ilişkili olabilir. İlgili literatüre göre, Geqingpi Mayıs'tan Haziran'a kadar toplanan genç bir meyvedir; Dört çiçekli yeşil kabuk Temmuz'dan Ağustos'a kadar olgunlaşmamış meyvelerden hasat edilir ve ikisi arasındaki fark hasat zamanı ve olgunluk aşamasında yatmaktadır. Yukarıdaki sonuçlardan, farklı büyüme ve gelişme aşamalarının Qingpi'deki aktif bileşenlerin birikimini etkileyebileceği görülebilir. Bununla birlikte, üreme ve gelişme döneminde, Qingpi'deki aktif bileşenler basitçe artan veya azalan bir eğilim göstermez, bunun yerine bir miktar artış ve bir miktar azalma gösterir: Chenpi ekstresi ve hesperidin artış eğilimi gösterirken; Simulin, hesperidin ve naringin azalma eğilimi göstermiştir. Bu içeriklerdeki farklılıkların doğrudan veya dolaylı olarak Qingpi'nin farklı özelliklerinin farklı etkinlik odaklarına yol açıp açmadığını kanıtlamak için daha fazla farmakolojik deney yapılması gerekmektedir. Qingpi'nin iki farklı spesifikasyonundaki beş aktif bileşenin içeriğindeki farklılığa ve iki etkinin farklı vurgusuna dayanarak, geleneksel Çin tıbbı sendrom farklılaştırmasını ve tedavisini daha iyi uygulayabilir ve reçete klinik uygulamalarda kullanılmak üzere ayrı ayrı etiketlenirse tedavinin etkinliğini artırabiliriz. Bu arada, mevcut farmakope standartları Geqingpi ve Sihuaqingpi için ayrı kalite standartları oluşturabilirse, Qingpi tıbbi malzemelerinin kalite kontrolüne daha elverişli olabilir.