Kemometri ile birleştirilmiş HPLC karakteristik spektrumlarına dayalı krizantem karakteristik belirteçleri üzerine araştırma
Krizantem, Asteraceae bitkisi Chrysanthemum morifolium Ramat'ın kurutulmuş baş çiçeğidir. Esas olarak flavonoidler, uçucu yağlar, organik asitler ve eser elementler gibi aktif kısımlar içerir. Rüzgarı dağıtma, ısıyı temizleme, karaciğeri sakinleştirme, görüşü iyileştirme ve ısıyı temizleme ve detoksifiye etme etkilerine sahiptir. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, menşe yerlerine ve işleme yöntemlerine göre "Boju", "Chuju", "Gongju", "Hangju" ve "Huaiju" gibi krizantem çeşitlerini içerir. Tıbbi ve yenilebilir özelliklere sahip bir Çin şifalı bitkisi olarak krizantem, çok çeşitli ve karmaşık bileşen bileşimi özelliklerine sahiptir. Bununla birlikte, farklı krizantem çeşitleri, farklı büyüme ortamları, yetiştirme ve işleme yöntemleri ve eşit olmayan kaliteleri nedeniyle kimyasal bileşimde önemli farklılıklara sahiptir ve bu da farklı klinik terapötik etkilere neden olur. Şu anda, Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, değerlendirme göstergeleri olarak üç kimyasal bileşenin, klorojenik asit, luteolin-7-O - β - D-glukozit ve 3,5-O-dicaffeoylquinic asit içeriğini kullanmaktadır, bu da krizantem tıbbi malzemelerinin kalitesini kapsamlı bir şekilde değerlendirmeyi zorlaştırmaktadır.
Geleneksel Çin tıbbının karakteristik spektrumu, geleneksel Çin tıbbının iç kalitesindeki genel değişiklikleri karakterize edebilir. Giderek daha fazla geleneksel Çin ilacı, kalite kontrol için karakteristik parmak izi spektrumlarının oluşturulmasını kullanmaktadır; bunların arasında HPLC karakteristik parmak izi teknolojisi de krizantem çeşitlerinin tanımlanmasında ve kalite kontrol araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Geleneksel Çin tıbbı kalite belirteci (Q-Marker), geleneksel Çin tıbbının işlevsel özellikleriyle ilgili özel, klinik olarak etkili ve izlenen kimyasal bileşenlerden oluşur. Geleneksel Çin tıbbının güvenliğini ve etkinliğini yansıtabilir ve geleneksel Çin tıbbı için modern, kapsamlı, sistematik ve nicel bir kalite değerlendirme sistemi oluşturmak için kullanılabilir. Q-Marker temelinde, parmak izi spektrumları ve kemometrik yöntemler entegre edilerek, şifalı bitkiler veya formüllerdeki ortak özellikleri yansıtan bileşenler keşfedilebilir ve geleneksel Çin tıbbının özelliklerine uygun çok boyutlu bir kalite değerlendirme sistemi kurulabilir. Bu, geleneksel Çin tıbbının bilimsel denetimi için daha iyi bir çözüm sağlayabilir.
Krizantemler üzerine yapılan önceki araştırmalara dayanarak, bu çalışma farklı krizantem çeşitlerinin HPLC karakteristik kromatogramlarını oluşturmuş ve krizantemlerin ortak madde temelini karakteristik belirteçler olarak taramak için kemometrik yöntemlerle birleştirmiştir. Aynı zamanda, farklı krizantem çeşitleri arasındaki karakteristik belirteçlerdeki önemli farklılıklar taranarak, krizantemlerin genel kalite değerlendirmesi, çeşit tanımlaması ve tek çeşit karakteristik değerlendirmesi için bilimsel temel sağlanmıştır.

 

Ekstraksiyon yöntemlerinin seçimi. Bu deneyde farklı çözücülerin (70% metanol, 50% metanol, 80% metanol), ekstraksiyon yöntemlerinin (ultrasonik ekstraksiyon ve ısıtma reflü ekstraksiyonu) ve ekstraksiyon sürelerinin (30, 35, 40 dakika) kromatogramlar üzerindeki etkileri araştırılmış ve ekstraksiyon yöntemi olarak 70% metanolün 40 dakika süreyle ultrasonik ekstraksiyonunun kullanılmasına karar verilmiştir.
Kromatografik koşulların optimizasyonu. Bu deneyde farklı kromatografik kolonlar (Agilent XDB-C18 kolon Phenomenex Luna C18)、 Tespit dalga boyları (220, 254, 330, 348nm) ve mobil faz sistemleri (asetonitril -0.1% fosforik asit su, asetonitril -0.1% formik asit su, asetonitril -0.2% asetik asit su) kullanılmış ve kromatografik pik şekli, pik sayısı ve çözünürlük değerlendirme göstergeleri olarak kullanılmıştır. Son olarak, bir Agilent XDB-C18 kromatografik kolon (4.6mm × 250mm, 5 µ m), 348nm'lik bir tespit dalga boyu ve mobil faz sistemi olarak asetonitril -0.2% asetik asit sulu çözeltisi ile seçilmiştir.
Deneyde oluşturulan beş farklı krizantem çeşidi kontrol haritaları farklı ortak zirvelere ve tanımlanmış karakteristik zirvelere sahiptir. Boju, Chuju, Gongju, Hangju ve Huaiju'nun oluşturulan kontrol haritalarında sırasıyla 21, 20, 25, 22 ve 22 ortak pik tespit edilmiş ve kontrol örneği ile karşılaştırılarak 14, 14, 12, 13 ve 13 ana karakteristik pik belirlenmiştir; Krizantem kontrol spektrumunda 50 parti krizantem örneğinden elde edilen neoklorojenik asit, klorojenik asit, kriptoklorojenik asit dahil olmak üzere 17 ortak pik tespit edilmiştir, luteolin-7-O - β - D-glukozid, izoklorojenik asit B, 3,5-O-dikafeoilkinik asit, apigenin 7-O - β - D-glukozid, izoklorojenik asit C, vanillolignin 7-O - β - D-glukozid, vanillogenin, apigenin ve luteolin. Gongju, Hangju ve Huaiju'da kafeik asit ve Gongju'da asasetin tespit edilmediğinden, krizantem kontrol spektrumunda kafeik asit ve asasetin ortak pikler olarak kullanılmamıştır. Pik alanlarının karşılaştırılmasıyla, beş krizantem kontrol spektrumu arasında luteolin-7-O - β - D-glukozit, apigenin, apigenin 7-O - β - D-glukozit ve izoklorojenik asit C'ye karşılık gelen pik alanlarında önemli farklılıklar olduğu bulunmuştur. Gongju ve Hangju kontrol spektrumlarında, luteolin-7-O - β - D-glukozit ve izoklorojenik asit C'nin pik alanları daha büyükken, diğer üç krizantem kontrol spektrumunda pik alanları daha küçüktür; Boju, Chuju ve Huaiju'nun kontrol spektrumlarında apigenin pik alanı nispeten büyükken, Gongju ve Hangju'nun kontrol spektrumlarında pik alanı çok küçüktür; Apigenin 7-O - β - D-glukozitin pik alanı Hangzhou krizantem kontrol spektrumunda daha büyükken, diğer dört krizantem kontrol spektrumunda daha küçüktür. Dolayısıyla, beş krizantem çeşidinin karakteristik pikleri arasındaki farklılıkları karşılaştırarak, farklı krizantem çeşitleri arasındaki farklılıkları önceden yansıtabiliriz, bu da farklı krizantem çeşitlerinde kimyasal bileşenlerin türlerinde ve içeriklerinde belirli farklılıklar olduğunu gösterir.
Benzerlik değerlendirme sonuçları, farklı partilerden aynı çeşit krizantemler arasındaki farklılıkların nispeten küçük olduğunu gösteren yüksek bir tür içi benzerlik göstermektedir; Düşük türler arası benzerlik 0.391-0.690'dır ve farklı krizantem çeşitlerinin kimyasal bileşiminde önemli farklılıklar olduğunu göstermektedir. CA, PCA ve OPLS-DA, beş farklı krizantem çeşidini beş kategoride doğru bir şekilde sınıflandırabilir. Beş krizantem çeşidi farklı olmasına rağmen, benzerlikleri de vardır. PCA ve OPLS-DA beş spesifik bölgeyi sol ve sağ olmak üzere iki kategoriye ayırır. Bunlar arasında Boju, Chuju ve Huaiju bir kategori (tıbbi amaçlar için) olarak sınıflandırılırken, Gongju ve Hangju bir kategori (tıbbi amaçlar için) olarak sınıflandırılmıştır. Kemometrik analiz, kumarin-7-O - β - D-glukozit, izoklorojenik asit C ve apigenin'in iki kategorinin ana diferansiyel bileşenleri olduğunu ve bunların iki krizantem türü arasındaki farkları ayırt etmek için karakteristik belirteçler olarak kullanılabileceğini göstermektedir. OPLS-DA 7 ana belirteç bileşenini taramış ve karışık referans standartlarıyla karşılaştırarak apigenin, apigenin 7-O - β - D-glukozit, luteolin-7-O - β - D-glukozit ve izoklorojenik asit olmak üzere 4 bileşeni tanımlamıştır. Bu bileşenler, pik alanlarının karşılaştırılmasıyla desteklenen farklı krizantem çeşitleri arasındaki farklılıkları ayırt etmek için karakteristik belirteçler olarak kullanılabilir. Bunlar arasında 24, 11 ve 20 numaralı pikler tanımlanmamıştır ve krizantem kalite değerlendirmesindeki rolleri daha fazla araştırmaya ihtiyaç duymaktadır; VIP değerleri 1'den küçük olan izoklorojenik asit B, 3,5-O-dikafeoilkinik asit, vanilin, kriptoklorojenik asit, klorojenik asit, neoklorojenik asit, luteolin ve vanilin 7-O - β - D-glukozit dahil on bileşen, bir bütün olarak krizantemin karakteristik belirteçleri olarak kullanılabilir.
Özet olarak, bu deney beş krizantem çeşidinin HPLC karakteristik spektrumlarını oluşturmuş ve analiz etmiş, karakteristik pikleri ve bunlara karşılık gelen pik alanlarını karşılaştırmış ve benzerlik değerlendirmesi yaparak farklı krizantem çeşitleri arasındaki farklılıkları önceden göstermiştir; Krizantem etkinliğini temsil eden ve farklı krizantemler arasındaki farklılıkları yansıtan karakteristik belirteçler olarak farklı krizantem çeşitleri arasında aynı maddeleri analiz etmek ve taramak için kemometrik yöntemler kullanılarak, krizantem çeşidi tanımlama ve kalite değerlendirmesi için bilimsel temel sağlanmıştır.