Protein Derecelendirme Parmak İzi Haritasının Oluşturulması ve Bombyx mori Tıbbi Materyallerinin Köken Tespiti Üzerine Moleküler Çalışma
Bombyx Batryticatus, üreme sırasında ipekböceği larvalarında Beauveria bassiana (Bals.) Vuillart enfeksiyonu (veya yapay aşılama) ile oluşan ve ölüme neden olan bir yan üründür. Rüzgar ve spazmları hafifletme, rüzgar ve ağrıyı giderme, balgam ve nodülleri çözme etkilerine sahiptir. Çin'de "dutun doğudan batıya taşınması" endüstriyel düzeninin uygulanması nedeniyle, Sichuan ve Yunnan ipekböcekçiliği endüstrisinde önemli eyaletler haline gelmiş ve böylece ipekböceği tıbbi malzemeleri için ana üretim alanları haline gelmiştir. Sichuan'da üretilen ipekböceklerinin Yunnan'da üretilen ipekböceklerinden daha iyi morfolojik özelliklere sahip olması ve 63. ve 77. baskılardan önceki Çin bitki kitapları ve farmakopelerinde tanımlanan "düz ve dolgun vücut, sıkı doku, beyaz renk ve parlak kesit" gibi yüksek kaliteli ipekböceği standartlarına uyması nedeniyle, pazar tanınırlıkları daha yüksektir ve satış fiyatları da daha yüksektir. Pazar araştırmalarında, tüccarların satışlarında kar elde etmek için genellikle kasıtlı olarak iki ürünün kökenini karıştırdıkları tespit edilmiştir. Klinik ilaçların güvenliğini ve etkinliğini artırmak için, ipekböceklerinin menşeini belirleme yöntemi üzerinde araştırma yapılması gerekmektedir.

Bilindiği gibi, Çin tıbbi malzemelerindeki etkili bileşenlerin oluşumu ve birikimi, doğal büyüme koşullarıyla yakından ilişkilidir. Bu nedenle menşe, Çin tıbbi malzemelerinin kalitesini etkileyen önemli faktörlerden biridir. Menşe tanımlama ve izlenebilirlik yöntemlerinin oluşturulması, tüketicilerin ürün bilgilerini anlama ihtiyaçlarının karşılanmasında, üretim, işleme ve satış işletmelerinin hak ve menfaatlerinin korunmasında ve Çin tıbbi malzemelerinin uluslararası pazardaki rekabet gücünün artırılmasında önemli bir rol oynamaktadır. Liao Baosheng ve diğerleri, Çin tıbbi malzemelerinin menşeinin belirlenmesi ve izlenebilirliğinin moleküler biyoloji teknolojisi, geleneksel Çin tıbbı parmak izi teknolojisi, izotop izleme teknolojisi, kablosuz radyo frekansı tanımlama izlenebilirlik teknolojisi ve barkod teknolojisine dayalı olarak gerçekleştirilebileceğini öne sürmüştür. Protein elektroforezi, Uluslararası Tohum Denetim Birliği tarafından benimsenen standart bir çeşit tanımlama yöntemidir, ancak bu yöntem hala düşük çözünürlük ve tür içi tanımlamada zorluk gibi dezavantajlara sahiptir ve bu da geleneksel Çin tıbbi malzemelerinin menşe tanımlaması ve izlenebilirliği için kullanılmasını zorlaştırmaktadır. Bunu göz önünde bulundurarak, bu makale Yunnan ve Sichuan ipekböceklerinin proteomundaki farklılıkları analiz etmek, elde edilen diferansiyel molekülleri tanımlamak ve menşe tanımlaması için ilgili molekülleri keşfetmek için biyoinformatik analiz yapmak amacıyla hiyerarşik bir parmak izi teknolojisi oluşturmak için hiyerarşik çökeltme ve protein elektroforezi tekniklerini birleştirmenin fizibilitesini araştırmayı ve basit, uygulanabilir ve bilimsel olarak doğru bir menşe tanımlama yöntemi oluşturmak için deneysel temel sağlamayı amaçlamaktadır.

Bu makalede, Yunnan ve Sichuan ipekböceklerinden asitte çözünen, alkalide çözünen, suda çözünen ve alkolde çözünen proteinler çıkarılmış ve bunların toplam protein ve derecelendirilmiş parmak izi spektrumları incelenmiştir. Sonuçlar, iki ipekböceğinin toplam protein parmak izi spektrumlarının oldukça benzer olduğunu ve bunların köken tespiti için kullanılmasını zorlaştırdığını; İki ipekböceği türü arasında köken tespiti için kullanılması beklenen derecelendirilmiş parmak izi spektrumlarında önemli bir fark olduğunu; Hiyerarşik parmak izi spektrumu tarafından sağlanan bilgi zenginliğinin alkolde çözünen proteinler>asitte çözünen proteinler>suda çözünen proteinler>alkalide çözünen proteinler sıralamasında olduğunu göstermiştir. Hiyerarşik parmak izi haritalarındaki farklılıklara dayanarak, β - glukozidaz, anti kimotripsin, anti tripsin ve lipaz domain proteinleri de dahil olmak üzere toplam 273 karakteristik protein molekülü keşfedilmiştir. Bu moleküller transferaz, katalaz ve tiyoredoksin peroksidaz gibi aktivitelere sahiptir ve çeşitli hücresel süreçler, metabolik süreçler, uyaranlara yanıt, biyolojik düzenleme ve gelişimsel süreçlere katılırlar. Sekonder metabolit sentezi, farklı ortamlarda mikrobiyal metabolizma, antibiyotik biyosentezi ve biyolojik savunma mekanizmaları gibi yolları içerirler ve farklı habitat faktörlerinin ipekböcekleri ile Beauveria bassiana arasındaki etkileşim ve Beauveria bassiana'nın oluşumu üzerindeki önemli etkisini yansıtırlar. Beauveria bassiana'nın kökenini belirlemek için potansiyel değere sahiptirler.
Otantik şifalı bitkiler, geleneksel Çin tıbbında şifalı bitkilerin kalitesini kontrol etmek için benzersiz bir kapsamlı kriterdir ve Çin şifalı bitkilerinin kalitesi ile menşe yerleri arasındaki yakın ilişkiyi derinden yansıtır. Menşe tespiti için bilimsel bir yöntem oluşturulması, Çin bitkisel ilaç pazarının denetlenmesi için önemli bir teknik destek sağlayabilir. Yang Jian, Zhang Hongkun, Song Jun ve diğerleri Dendrobium officinale, Anemarrhena chinensis ve Auricularia auricula üzerinde sırasıyla kararlı izotoplar, mineral element parmak izleri ve DNA barkodlarına dayalı menşe belirleme çalışmaları yürütmüştür. Moleküler farmakognozi çalışmaları, menşe yerinin geleneksel Çin tıbbının kalitesi üzerindeki etkisinin, ilgili genlerin ifadesini etkileyen sıcaklık, nem ve ışık gibi habitat faktörlerindeki değişiklikler yoluyla elde edildiğini göstermiştir. Proteinler gen ifadesinin ürünleridir ve habitat faktörlerindeki değişiklikler kaçınılmaz olarak ifade türlerini ve bolluklarını etkiler. Bu nedenle, köken tanımlamasındaki uygulama beklentileri dikkat çekmeye değerdir. Bu çalışmanın sonuçları, Yunnan ve Sichuan'daki farklı habitat faktörlerinin iki bölgede üretilen ipekböceklerinin protein ifadesi üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğunu ve buna karşılık gelen farklılıkların hiyerarşik parmak izi kullanılarak tespit edilebileceğini göstermektedir. SDS-PAGE ve iki boyutlu jel elektroforezi ile karşılaştırıldığında, hiyerarşik parmak izi teknolojisi önce örnekleri hidrofobikliklerine göre sınıflandırmak için asetonla muamele eder ve ardından benzer örnekleri aynı jel üzerinde karşılaştırır. Basit kullanım, yüksek çözünürlük, doğru sonuçlar ve yüksek tekrarlanabilirlik avantajlarına sahiptir ve diğer Çin tıbbi malzemelerinin kökeninin belirlenmesi için bir referans sağlar. Buna ek olarak, Bombyx mori'nin alkolde çözünen proteinlerinde önemli ölçüde yüksek bollukta moleküller yoktur. Hiyerarşik bir parmak izi oluştururken, bantlar arasındaki karşılıklı etkileşimi ve kapsamı önleyerek diğer protein türlerine göre daha zengin parmak izi bilgisi ve daha iyi çözünürlük sağlayabilir. Yukarıdaki sonuçlar, diğer Çin tıbbi malzemelerinin kökeninin belirlenmesiyle ilgili moleküllerin seçimi için de fikir vermektedir.