HPLC Parmak İzi ile Kombine Kimyasal Örüntü Tanıma ile Bombyx mori'nin Kalite Değerlendirmesi Üzerine Çalışma
Bombyx mori, klinik uygulamada yaygın olarak kullanılan hayvan ilaçlarından biridir ve esas olarak karaciğer rüzgar balgamı, nöbetler, infantil irkilme, tetanoz vb. gibi hastalıkların tedavisinde kullanılır. Kaynağı, Beauveria bassiana (Bals.) Vuillart ile enfekte olan ve ölen ipekböceği Bombyx mori Linnaeus'un 4. ila 5. instar larvalarının kurutulmuş gövdesidir. Kimyasal çalışmalar, ana aktif bileşenlerinin proteinler, amino asitler, flavonoidler ve diğer bileşenler olduğunu göstermiştir. Modern farmakolojik çalışmalar, Bombyx mori'nin protein açısından zengin özütünün anti epileptik, immünomodülatör ve inhibitör etkilere sahip olduğunu göstermiştir G7 tümör taşıyan farelerin tümör büyümesi, Parkinson hastalığı farelerinde MPTP tarafından indüklenen motor bozukluğun iyileşmesini teşvik eder, dopamin tükenmesini önler vb.
Tek bir diyete sahip bir ipekböceği olarak, sadece dut yapraklarıyla beslenme özelliği, vücudundaki dut yapraklarındaki ana flavonoidlerin zengin ve çeşitli emilimini, dönüşümünü ve metabolizmasını belirler. Araştırmalar, Fusarium oxysporum ile enfeksiyondan sonra ipekböceklerindeki flavonoidlerin biyotransformasyona uğradığını göstermiştir. Örneğin, kuersetin ve kaempferol gibi flavonoidler, 4-O-metilglukozilasyon reaksiyonu yoluyla kuersetin-7-O - β - D-4-O-metilglukozid ve kaempferol-7-O - β - D-4-O-metilglukozide dönüştürülür. Xing ve arkadaşları, ölüm zamanı arttıkça vücuttaki flavonoidlerin içeriğinin ve dönüşümünün de farklılık gösterdiğini tespit etmiş ve kuersetin 7-O - β - D-4-O-metilglukozit ve kaempferol-7-O - β - D-4-O-metilglukozitin kalite kontrol göstergelerinden biri olarak kullanılabileceğini düşünmüştür. Bu nedenle, flavonoidler ipekböceklerinin kalitesini değerlendirmek için önemli göstergeler olarak hizmet edebilir.

Parmak izi spektrumu ve kimyasal örüntü tanıma kombinasyonu, geleneksel Çin tıbbının, Çin tıbbı kaynatma parçalarının, formül granüllerinin vb. kalite değerlendirmesinde yaygın olarak kullanılan geleneksel Çin tıbbının kalitesini değerlendirmek için etkili bir yöntemdir. Şu anda, ultraviyole parmak izi, kızılötesi parmak izi, HPLC, HPCE ve protein parmak izi spektrumları dahil olmak üzere ipekböcekleriyle ilgili parmak izi spektrumları üzerine çeşitli çalışmalar bulunmaktadır. Bileşim kategorileri suda çözünen bileşenleri, lipidde çözünen bileşenleri, alkolde çözünen bileşenleri vb. kapsamaktadır. Bununla birlikte, zayıf ayırma verimliliği ve sınırlı tanımlama pikleri ile ilgili sorunlar vardır, bu da kalite özelliklerini karakterize etmeyi zorlaştırır. Araştırmacılar Sichuan'da üretilen ipekböceklerinin Guangxi, Yunnan ve Zhejiang gibi diğer bölgelere kıyasla daha kaliteli ve daha yüksek Beauveria bassiana seviyelerine sahip olduğunu göstermiştir. Bombyx mori'nin kimyasal bileşimi ve kalite kontrolü hakkında bazı araştırma raporları olmasına rağmen, karmaşık bileşimi ve düşük içeriği nedeniyle şu anda iyi bir kalite kontrol yöntemi bulunmamaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada farklı kökenlerden gelen 20 parti ipekböceği tıbbi malzemesinin parmak izi spektrumlarını oluşturmak için yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanılmış ve benzerlik analizi, küme analizi ve temel bileşen analizi gibi kimyasal tanımlama modları birleştirilerek farklılaştırma araştırması yapılmıştır. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısındaki ipekböceği maddesinin gerekliliklerine atıfta bulunarak, nem içeriği, toplam kül içeriği, asitte çözünmeyen kül içeriği ve ekstrakt belirlenmiştir. Etkili bileşen Beauveria bassiana içeriği, farklı kökenlerden gelen tıbbi malzemelerin kalitesini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek, ipekböceği tıbbi malzemelerinin kalite kontrolü ve standart iyileştirmesi için bilimsel temel sağlamak ve diğer tıbbi malzemelerin araştırılması için referans sağlamak amacıyla araştırma grubunun önceki yöntemi kullanılarak belirlendi.

Bu deneyde ekstraksiyon yöntemi, ekstraksiyon çözücüsü ve ekstraksiyon süresi gibi ön işlem koşulları incelenmiş ve ekstraksiyon yönteminin (reflü ekstraksiyonu, ultrasonik ekstraksiyon) ultrasonik ekstraksiyon için, ekstraksiyon çözücüsünün (metanol, 80% metanol, asetonitril ve su) 80% metanol için ve ekstraksiyon süresinin (15, 30, 45 dakika) 30 dakika için en uygun olduğu belirlenmiştir. İpekböceğinin belirlenen parmak izi 0.92 ile 0.99 arasında bir benzerliğe sahiptir, bu da nispeten yüksektir ve ipekböceğinin kalite değerlendirmesi için bir temel sağlar.
Araştırma enstitümüz tarafından oluşturulan parmak izi spektrumu esas olarak Bombyx mori'nin tıbbi malzemelerindeki flavonoidlere odaklanmaktadır. Wang ve arkadaşları, sonuçları incelemek için ağ farmakolojisi ve moleküler yerleştirme tekniklerini kullanmış, bu da kuersetin, kaempferol ve diğer bileşenlerin Bombyx mori'nin rüzgar ve spazmları hafifletme kabiliyeti için ana malzeme temel bileşenleri olabileceğini göstermiştir. Çok sayıda çalışma da kuersetin ve kaempferolün epilepsi tedavisinde ana aktif bileşenlerden biri olduğunu göstermiştir. Rüzgar ve spazmları hafifletmek için önemli bir bitki olan Bombyx mori'nin etkisinin temel maddelerinden biri flavonoidler olabilir. Ayrıca bu çalışmada, her bir ortak pikin pik alanları ile tıbbi malzemelerin özellikleri, ekstraktları, toplam kül içeriği ve beyaz muskarin içeriği arasında bir korelasyon analizi de yapılmıştır. Sonuçlar, enine kesit özelliklerinin yüzey özellikleri, tıbbi malzeme uzunluğu ve beyaz muskarin içeriği ile pozitif korelasyon gösterdiğini ve pik 1, 2, 3, 4, 6 ve 7'nin pik alanları ile pozitif korelasyon gösterdiğini ortaya koymuştur. Karşılaştırma sonrasında, pik 1, 2, 4, 6 ve 7 dut yapraklarındaki ana flavonoidler olan rutin, hiperosid, astragalosid, kuersetin ve kaempferol olarak tanımlanmıştır. Bu, ipekböceği oluşumu sırasında flavonoidlerin dönüşümünün kesitin "vitröz gövdesi" ile ilgili olduğunu göstermektedir. Şifalı bitkilerin kalitesi ile oluşum arasında güçlü bir korelasyon vardır ve bu da eski zamanlardan beri "beyaz renk, düz çizgiler ve ipekböcekleri için siyah ve parlak kesitler tercih edilir" kalite karakteristik noktasını doğrulamaktadır.

Özetle, bu makalede oluşturulan parmak izi spektrumu sadece ipekböceğinin "Xifeng Zhijing" farmakolojik etkisinin olası maddi temel bileşenlerini içermekle kalmaz, aynı zamanda ipekböceği tıbbi malzemesinin kalitesini kapsamlı bir şekilde yansıtabilen ve ipekböceği tıbbi malzemesinin kalite kontrolü için bilimsel temel sağlayan ipekböceği tıbbi malzemesinin kalite göstergeleri ile belirli bir korelasyona sahiptir. Cordyceps sinensis tıbbi malzemeleri için kalite kontrol standartlarında, bunun bir "bakteri böcek yaprağı" kompleksi olduğu tam olarak dikkate alınmalı ve kalitesini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için çoklu göstergeler kullanılmalı, tıbbi malzemeler için daha bilimsel ve makul bir kalite standardı oluşturulmalıdır.