UPLC Parmak İzi ve Çoklu İndeks Bileşen Miktar Tayinine Dayalı Farklı Kökenlerden Baimao Kökü Standart Çorbasının Kalite Değerlendirmesi Üzerine Araştırma
İçerik göstergelerinin seçimi. Geleneksel Çin tıbbının standart kaynatma işlemi, Çin bitkisel ilaç dilimlerini hammadde olarak kullanarak, Çin bitkisel tıbbının geleneksel kaynatma alışkanlıklarına atıfta bulunarak, çözücü olarak su kullanarak ve standartlaştırılmış bir kaynatma modunu benimseyerek hazırlanan tek bir bitki kaynatma işlemidir. Standart bir madde veya sistem olarak, geleneksel Çin tıbbı standart kaynatma, geleneksel Çin tıbbının klinik kullanımını standartlaştırmak, formül granülleri gibi yeni geleneksel Çin tıbbı kaynatma parçalarının kullanımını standartlaştırmak ve geleneksel Çin tıbbının klinik kullanımının doğruluğunu sağlamak için yaygın olarak kullanılır. Bu nedenle, geleneksel Çin tıbbı standart dekoksiyonları için kalite standartlarının oluşturulması, ilgili Çin tıbbı formül granülleri ve klasik formüller gibi modern Çin tıbbı formülasyonları için kalite standartlarının oluşturulması için önemli referanslar sağlayabilir.
Poaceae bitkisinin kökü Imperata cylindrica Beauv Var. major (Nees) C. E. Hubb. kurutulmuş rizomu kanı soğutma, kanamayı durdurma, harareti giderme ve diürez etkilerine sahiptir. Modern araştırmalar, Houttuynia cordata köklerinin hemostaz, diürez, analjezi, antibakteriyel, anti-enflamatuar, antioksidan, kan basıncını düşürme, karaciğer koruması ve bağışıklık fonksiyonunun düzenlenmesi gibi çeşitli farmakolojik aktivitelere sahip triterpenoidler, flavonoidler, organik asitler, fenilpropanoidler, endosülfanlar ve polioller gibi çeşitli kimyasal bileşenler içerdiğini göstermiştir. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, Houttuynia cordata kökü tıbbi malzemelerinin kalite standartları için içerik göstergelerinden yoksundur ve mevcut kalite standartlarının Houttuynia cordata kökünün içsel kalitesini tam olarak yansıtması zordur. Önceki araştırma raporları, Polygonatum sibiricum köklerinin kalite kontrolü için çoğunlukla klorojenik asit içeriği belirleme ile birlikte parmak izi/karakteristik spektrum kullanmıştır, ancak parmak izi spektrumu ve çoklu gösterge bileşenlerinin kombinasyonu üzerine nicel bir çalışma yapılmamıştır. Araştırmalar, geleneksel Çin tıbbındaki fenolik asit bileşenlerinin anti-enflamatuar, antibakteriyel, antioksidan, anti-tümör ve diğer etkilere sahip olduğunu ve büyük araştırma değeri ve uygulama potansiyeli olan doğal aktif ürünler olduğunu göstermiştir. Houttuynia cordata kökü büyük miktarda fenolik asit bileşenleri içerir ve anti-enflamatuar, antibakteriyel ve antioksidan gibi farmakolojik aktiviteleri Houttuynia cordata kökünün fonksiyonel endikasyonları ile yakından ilişkilidir. Bu nedenle, bu çalışma Houttuynia cordata kökü standart kaynatmasının UPLC parmak izini oluşturmuş ve standart kaynatmadaki klorojenik asit, neoklorojenik asit, kriptoklorojenik asit ve p-light sinnamik asit içeriğinin ilk kez eşzamanlı olarak belirlenmesini sağlamıştır. Kemometrik analiz yöntemleriyle birleştirildiğinde, farklı üretim alanlarında Houttuynia cordata kökü standart kaynatmasının kalite değerlendirmesi için bir temel sağlar.

İçerik göstergelerinin seçimi. Şu anda, Polygonatum sibiricum köklerinin içeriğini belirlemeye yönelik göstergeler hakkında nispeten az araştırma vardır ve esas olarak fenolik asitlerin ve şekerlerin belirlenmesine odaklanmaktadır. Polygonatum sibiricum köklerinde Polygonatum sibiricum ve Caryophyllin içeriğinin belirlenmesine ilişkin raporlar da bulunmaktadır. Ancak, tıbbi malzemelerdeki Polygonatum sibiricum ve Caryophyllin içeriği çok düşüktür. Polygonatum sibiricum köklerinin standart kaynatılmasında çözücü olarak su kullanılır ve aktif bileşenler esas olarak suda çözünen bileşenlerdir. Polygonatum sibiricum ve Caryophyllin sadece içerik olarak düşük değil, aynı zamanda yağda çözünen bileşenlerdir, bu nedenle gösterge bileşenleri olarak uygun değildirler. Şeker bileşenlerinin özgüllüğü zayıftır ve bunlar da indikatör bileşen olarak uygun değildir. Parmak izi spektrumu çalışmasından, Polygonatum sibiricum köklerinin birçok kimyasal bileşene sahip olmasına rağmen, etkili bileşenlerin içeriğinin nispeten düşük olduğu da bulunmuştur. Parmak izi spektrumundan daha yüksek pik tiplerine sahip iki kromatografik pik tanımlanmıştır, bunların her ikisi de fenolik asit bileşenleridir ve Houttuynia cordata'nın standart kaynatmasının farmakolojik aktivitesiyle yakından ilişkilidir. Bu nedenle içerik göstergelerinin seçiminde fenolik asit bileşenlerinin belirlenmesi tercih edilmektedir. Araştırmalar, klorojenik asit, neoklorojenik asit ve kriptoklorojenik asidin asidik pH koşullarında nispeten kararlı olduğunu, ancak nötr ve alkali koşullar altında kararsız olduğunu ve aralarında belirli bir dönüşüm derecesi olduğunu göstermiştir. Houttuynia cordata kökü ve standart kaynatmanın parmak izi spektrumlarını inceleme sürecinde, Houttuynia cordata kökü ile karşılaştırıldığında, Houttuynia cordata kökü standart kaynatmasının parmak izi spektrumlarının pik 1 (neoklorojenik asit), pik 8 (kriptoklorojenik asit) ve pik 5'in pik alanı oranında önemli bir artış gösterdiğini tespit ettik. Bu nedenle, Houttuynia cordata kökünün kaynatma işlemi sırasında klorojenik asit, neoklorojenik asit ve kriptoklorojenik asidin dönüşüm olasılığının daha yüksek olduğunu tahmin ediyoruz. Klorojenik asit, neoklorojenik asit ve kriptoklorojenik asit benzer yapılara ve farmakolojik aktivitelere sahiptir. Bu nedenle, Zhimao kökünün standart kaynatma işlemi için içerik göstergelerini seçerken, sadece tek tek klorojenik asit bileşenlerini ölçmek yerine, toplam klorojenik asit, neoklorojenik asit ve kriptoklorojenik asit miktarını belirlemenin en iyisi olduğuna inanıyoruz. Araştırma sonuçları, farklı üretim alanlarından elde edilen Polygonatum sibiricum'un standart kaynatmasındaki dört fenolik asit bileşeninin toplam miktarında, farklı üretim alanlarından elde edilen Polygonatum sibiricum tıbbi malzemelerinin kalitesini yansıtan ve farklı üretim alanlarından elde edilen tıbbi malzemelerin farklı hasat süreleri ve işleme yöntemleriyle ilgili olabilecek önemli farklılıklar olduğunu göstermektedir.

Analitik yöntemlerin oluşturulması. Şu anda, Houttuynia cordata kökünün çok bileşenli miktar tayini ile birlikte parmak izi spektrumu kullanılarak kalite kontrolü üzerine bir araştırma bulunmamaktadır. Houttuynia cordata kökü standart kaynatmasının dondurularak kurutulmuş tozu çok fazla şeker içerir ve fenolik asit bileşenlerinin yapısı benzerdir, bu da yüksek kromatografik ayırma gerektirir. Bu nedenle, yöntemin oluşturulmasında, farklı mobil faz oranlarının, kromatografik kolonların, kolon sıcaklıklarının ve akış hızlarının her parmak izi piki, özellikle de içerik belirleme için kromatografik pik üzerindeki ayırma etkisi tam olarak incelenmeli ve optimum kromatografik koşullar ve kolonlar seçilmelidir; Tespit dalga boyları olarak 280, 300, 325 ve 350nm seçin ve 200-400nm aralığında numunenin absorpsiyon spektrumlarını kaydetmek için tam dalga tarama gerçekleştirin. Sonuçlar, farklı dalga boylarında her bir kromatogramın sayısında ve pik türlerinde önemli bir fark olmadığını göstermektedir. Tespit dalga boyu olarak 325nm kullanıldığında, kromatogram pikinin absorpsiyon değeri en yüksektir. Bu nedenle, 325nm bu karakteristik spektrum için tespit dalga boyu olarak seçilmiştir. Tek faktör analizi yöntemi kullanılarak, ekstraksiyon çözücüleri (metanol, 10% metanol, 50% metanol, 70% metanol, 70% etanol, 50% etanol, 10% etanol), ekstraksiyon yöntemleri (ultrason ve ısıtma reflüsü), çözücü dozu (15, 25, 50 mL) ve ekstraksiyon süresi (15, 30, 45 dakika) test çözeltisi için makul bir hazırlama yöntemi belirlemek üzere araştırılmıştır.

Benzerlik değerlendirmesi ve kemometrik analiz. Parmak izi spektrumlarının benzerlik hesaplama sonuçları, Henan üretim alanındaki Polygonatum sibiricum'un üç standart kaynatma partisinin benzerlik değerlerinin diğer üretim alanlarındakilerden önemli ölçüde daha düşük olduğunu göstermektedir; bu da Henan'daki Polygonatum sibiricum köklerinin kimyasal bileşim oranında diğer üretim alanlarına kıyasla önemli farklılıklar olduğunu göstermektedir. Hem HCA hem de PCA sonuçları Hebei, Anhui ve Henan üretim alanlarından örnekleri etkili bir şekilde ayırt edebilir, ancak Jiangsu üretim alanından örneklerin farklılaşması açık değildir. Klorojenik asit gibi fenolik asit bileşenleri suda kolayca çözünür ve ısıya maruz kaldıklarında kararsızdır. Bu nedenle, farklı üretim bölgelerindeki işleme, depolama ve nakliye tıbbi malzemelerin kalitesini etkileyebilir ve bu da farklı üretim bölgelerinden gelen Polygonatum sibiricum'un standart kaynatma kalitesinde farklılıklara yol açabilir. OPLS-DA kullanılarak, üç farklı biyobelirteç tanımlanmış ve VIP değerlerine göre sıralanmıştır: tepe 9>tepe 6>tepe 5. Bu, farklı üretim alanlarından elde edilen Houttuynia cordata'nın standart kaynatmasının pik 9, pik 6 ve pik 5'inde önemli farklılıklar olduğunu göstermektedir. Pik 9'un p-light sinnamik asit, pik 5'in klorojenik asit olduğu ve pik 6'nın daha fazla araştırmaya ihtiyaç duyduğu doğrulanmıştır. Şu anda birçok il, üretim alanlarındaki şifalı bitkilerin taze kesimini teşvik etmek ve etkili bileşenlerin kaybını azaltmak için yerel politikalar uygulamaya koymuştur. Çalışmalar, mercan otlarının tazeyken yıkanıp kesilmesiyle elde edilen dilimlerdeki klorojenik asit, neoklorojenik asit ve kriptoklorojenik asit içeriğinin, geleneksel işleme yöntemleriyle elde edilen dilimlerdekinden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstermiştir. Taze iken işlenen çim mercan dilimlerinin anti-enflamatuar ve analjezik etkileri, geleneksel dilimlerden önemli ölçüde daha iyidir ve bu da çim mercan işlemenin üretim alanı işleme ile birleştirilmesinin fizibilitesini gösterir. Jiumao kökü fenolik asit bileşenleri bakımından zengindir, özellikle üretim alanında taze işleme için uygundur, böylece tıbbi malzeme içeriği artar.

Bu çalışmada, Polygonatum sibiricum standart kaynatma için bir UPLC parmak izi yöntemi oluşturulmuş ve eş zamanlı olarak dört fenolik asit bileşeni belirlenmiştir. Kullanımı kolay, kararlı, güvenilir ve tekrarlanabilirliği iyi olan bu yöntem, Polygonatum sibiricum standart kaynatma, tıbbi malzemeler, kaynatma parçaları ve ilgili preparatların kalite değerlendirmesi için önemli bir referans sağlamaktadır.