Aspir yapraklarından toplam flavonoidlerin ekstraksiyon ve saflaştırma işlemlerinin optimizasyonu ve anti akut karaciğer hasarı aktiviteleri üzerine çalışma
Asteraceae bitkisinin kurutulmuş çiçeği Carthamus tinctorius L. değerli bir geleneksel Çin şifalı bitkisidir ve Moğol tıbbı klinik uygulamalarında en yaygın kullanılan şifalı bitkilerden biridir. Bu ilaç doğası gereği soğuktur, tadı hafif acıdır ve kalp ve karaciğer meridyenleri üzerinde besleyici bir etkiye sahiptir. Kan dolaşımını teşvik etmek, kan stazını temizlemek ve ağrıyı hafifletmek için iyi bir ilaçtır. Geleneksel olarak aspir bitkisinin kullanımı ve araştırmaları sadece tıbbi çiçeklerine odaklanmıştır. Bununla birlikte, aspir bitkisinin çiçek verimi çok düşüktür, bu da tıbbi kısımları - "çiçekler" - hasat edildikten sonra üretilen büyük miktarda yaprağın atılmasına ve kaynak israfına neden olur. Araştırmacılar aspirin toprak üstü kısımlarının kimyasal bileşimini incelemişlerdir, ancak bunların çoğu alkaloidler ve terpenler üzerine odaklanmıştır. Bununla birlikte, antioksidan, antiviral, hepatoprotektif, antikanser ve anti-inflamatuar gibi farmakolojik aktivitelere sahip olan flavonoidleri hakkında nispeten az araştırma vardır. Bitki kaynaklı flavonoidler aynı zamanda doğal ve düşük toksisite özelliklerine sahiptir ve verimli ve güvenli doğal ilaçlar, cilt bakım ürünleri ve sağlık ürünlerinin geliştirilmesinde geniş beklentilere sahiptir. Şu anda, aspir yapraklarından flavonoidlerin ekstraksiyon ve saflaştırma süreci ve biyolojik aktivitesi üzerine bir araştırma bulunmamaktadır. İlgili çalışmalar, aspir saplarının alkol özütünün önemli bir anti CCI4 kaynaklı akut karaciğer hasarı etkisine sahip olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, aspir yaprağı ekstresinin de karaciğer koruyucu etkileri olup olmadığı araştırılmaya değerdir. Bu nedenle, aspirin tıbbi olmayan kaynaklarından tam olarak yararlanma perspektifinden bakıldığında, bu deney Carthamus yaprakları tinctorius L. yaprağından toplam flavonoidler elde etmek için ekstraksiyon ve saflaştırma sürecini optimize etti (TFCTLL)， Ve hepatoprotektif etkisini daha fazla araştırarak aspirin tıbbi olmayan kısım kaynaklarının tam olarak kullanılması ve farmakolojik aktivite araştırması için veri desteği sağladı.

 

Bu çalışmada ilk kez deneysel materyal olarak aspir atık yaprakları kullanılmış ve ısıtma reflü yöntemi kullanılarak aspir yapraklarından toplam flavonoidler ekstrakte edilmiştir. Tek faktörlü deneylere dayanarak, aspir yapraklarından toplam flavonoidler için optimum ekstraksiyon sürecini optimize etmek üzere bir Box Behnken yanıt yüzeyi testi tasarlanmıştır. Katı-sıvı oranı 1:27, etanol konsantrasyonu 80% ve ekstraksiyon süresi 65 dakika olarak belirlenmiştir. Gerçek ekstraksiyon oranı 4.921% olup teorik değerden 0.014% daha düşüktür. Tek faktör ve yanıt yüzeyi sonuçları üzerinde istatistiksel analiz yapılmış ve ikisi arasında anlamlı bir fark olmadığı bulunmuştur (P>0.05). Bu model iyi ve istikrarlı bir şekilde tahmin eder ve aspir yapraklarından toplam flavonoidlerin ekstraksiyonu için kullanılabilir. Optimum ekstraksiyon işlemi ile elde edilen aspir yapraklarından toplam flavonoid içeren ham ekstraktın düşük ekstraksiyon oranı nedeniyle, sonraki aktivite çalışmaları için ham ekstraktın daha fazla zenginleştirilmesi ve saflaştırılması gerekmektedir.

Makro gözenekli reçine, son yıllarda doğal ürünlerin ayrıştırılması ve saflaştırılmasında, özellikle de flavonoidlerin zenginleştirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Basit çalışması, kirlilik yaratmaması, düşük enerji tüketimi ve iyi ayırma etkisi nedeniyle flavonoidlerin saflaştırma araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Çoğu flavonoid zayıf polardır, bu nedenle zayıf polar ve polar olmayan reçineler flavonoidler üzerinde daha iyi saflaştırma etkilerine sahiptir. Hou ve arkadaşları, makrogözenekli adsorpsiyon reçinesi kullanarak Artemisia annua'daki toplam flavonoidlerin zenginleştirilmesi ve saflaştırılması üzerine çalışmışlardır. NKA-9, GPD100, HPD400, HPD600, AB-8, D101, X-5 ve GM301 makrogözenekli adsorpsiyon reçinelerinin toplam flavonoidler için adsorpsiyon ve desorpsiyon yeteneklerini araştırmak için statik adsorpsiyon deneyleri yapılmıştır. Sonuçlar AB-8 makrogözenekli adsorpsiyon reçinesinin en iyi adsorpsiyon ve desorpsiyon kabiliyetine sahip olduğunu göstermiştir. İlgili literatürde ayrıca, diğer reçine türlerine kıyasla flavonoidlerin adsorpsiyonu ve çözünürlüğünde önemli avantajlara sahip olan HPD-100, HPD-600, D101 ve HP-20 olmak üzere dört tip makro gözenekli adsorpsiyon reçinesi bildirilmiştir. Bu nedenle, bu deneyde, TFCTLL'nin saflaştırılması için toplam flavonoidlerin zenginleştirilmesi için uygun beş tip makro gözenekli adsorpsiyon reçinesi, AB-8, HPD-100, HPD-600, D101 ve HP-20 seçilmiştir. Optimum saflaştırma işlemi elde edildikten sonra, optimum işlem altında ekstrakte edilen aspir yaprağı ekstraktı, önceden işlem görmüş makrogözenekli reçine kromatografi kolonu AB-8 üzerine adsorbe edildi ve 95% etanol ile elüe edildi. Toplam flavonoid saflığı 61.42%'ye ulaştı ve eluent toplandı ve kuru bir ekstrakt halinde konsantre edildi. Sonraki aktivite araştırmaları için bir temel oluşturmuştur.

İlgili çalışmalar, aspir saplarından elde edilen alkol özütlerinin CCI4 kaynaklı akut karaciğer hasarını önemli ölçüde önleyici etkilere sahip olduğunu göstermiştir. Aspir yaprağı ekstraktının da karaciğer koruyucu etkileri var mıdır? Bu çalışmada, TFCTLL'de verbascoside, quercetin-7-O - β - D-glucoside, verbascoside ve vitexin dahil olmak üzere dört flavonoid tanımlanmıştır. İlgili araştırma sonuçları, serum ALT ve AST aktivitesini azaltabilen, TNF - α ve IL-1 β gibi enflamatuar faktörlerin seviyelerini inhibe edebilen spesifik anti-enflamatuar, antioksidan ve anti fibrotik etkilere sahip olduğunu göstermiştir, Antioksidan enzimlerin ve NF - κ B yolunun aktivasyonunu inhibe eder ve lipid metabolizmasını düzenleyerek, antioksidan, anti-inflamatuar, demir birikimini azaltarak, tümör hücresi proliferasyonunu düzenleyerek, anti apoptozu, otofajiyi ve diğer yolları teşvik ederek karaciğer hasarını hafifletir. Genellikle akut karaciğer hasarı ve ilgili hastalıkları tedavi etmek için kullanılır.

Akut karaciğer hasarı, kısa vadede çeşitli nedenlerden kaynaklanan ani anormal karaciğer fonksiyon hastalığıdır. Klinik prognozu kötüdür ve aktif olarak müdahale edilip tedavi edilmezse siroz ve karaciğer kanserine dönüşerek insan hayatını ve sağlığını tehdit edebilir. Kimyasal karaciğer hasarı, bakteriyel ve viral kaynaklı biyolojik karaciğer hasarı dahil olmak üzere karaciğer hasarına neden olabilecek çeşitli faktörler vardır. CCI4, kimyasal karaciğer hasarını indüklemek için deneysel hayvan araştırmalarında en yaygın kullanılan hepatotoksindir ve tek bir CCI4 dozu karaciğer hücresi hasarı tipi ALI hazırlayabilir. Karaciğer hücrelerinin yapısına ve işlevine zarar verebilir, hücre içi ALT ve AST'nin kan dolaşımına taşmasına neden olabilir, bu da kandaki ALT ve AST aktivitesinde artışa neden olur ve bu da karaciğer hasarının derecesi ile pozitif korelasyon gösterir. Bu nedenle, ALT ve AST aktivitesi genellikle karaciğer hasarının derecesini değerlendirmek için gösterge olarak kullanılır. Bu çalışmanın hayvan deneyi sonuçları, intraperitoneal CCI4 enjeksiyonundan sonra, serumdaki ALT, AST ve TBA aktivitelerinin önemli ölçüde arttığını ve karaciğer dokusu lezyonlarının meydana geldiğini göstererek, CCI4 kaynaklı akut karaciğer hasarı fare modelinin başarılı bir şekilde kurulduğunu göstermiştir. TFCTLL ile müdahaleden sonra, fare serumundaki ALT, AST ve TBA aktiviteleri önemli ölçüde azaldı ve karaciğer dokusu lezyonlarının derecesi hafifledi, bu da TFCTLL'nin farelerde CCI4 kaynaklı akut karaciğer hasarı üzerinde koruyucu bir etkiye sahip olduğunu gösterdi.

Bu çalışma, aspir tıbbi kaynakları perspektifinden yola çıkmakta, geleneksel tıbbi olmayan atık ve yan ürünleri kaynak bazlı ilaçlara dönüştürmekte, aspir tıbbi malzemelerini tam olarak kullanmakta ve aspir yapraklarının hepatoprotektif etkilerini araştırmaktadır. Sonuçlar, ekstraksiyon ve saflaştırmadan sonra elde edilen TFCTLL'nin akut karaciğer hasarı olan fareler üzerinde etkili olduğunu göstermektedir. Bu çalışma, TFCTLL'nin daha sonraki gelişimi ve kullanımı için referans sağlayabilir ve ayrıca aspir kaynaklarının yüksek değerli kullanımı için büyük önem taşımaktadır.