Acanthopanax senticosus'tan elde edilen polisakkaritlerin tek bir bileşeni olan AHP-III'ün makrofajlar üzerindeki immünomodülatör etkisi ve mekanizması
Geleneksel Çin ilacı olan Acanthopanax giraldii Hams, Araliaceae familyasındaki Acanthopanax giraldii bitkisinin kök kabuğudur. Esas olarak Gansu, Ningxia, Qinghai, Sichuan ve diğer bölgelerde üretilir ve rüzgar ve rutubeti giderme, kasları ve kemikleri güçlendirme, kan dolaşımını ve diürezi teşvik etme etkilerine sahiptir. Acanthopanax giraldii Hams polisakkaridi, anti-tümör, antiviral, hepatoprotektif ve bağışıklık düzenlemesi gibi farmakolojik etkilere sahip aktif bileşenlerinden biridir.

Makrofajlar vücudun farklı dokularında yaygın olarak bulunur, sadece doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık tepkilerine katılmakla kalmaz, aynı zamanda ikisi arasında "köprü hücreler" olarak da görev yapar. Aktif makrofajlar yabancı cisimleri yutabilir veya patojenleri ve tümör hücrelerini doğrudan öldürebilir; tümör nekroz faktörü alfa (TNF - α), interlökin-6 (IL-6), NO ve diğer ilgili sitokinleri salgılayarak vücudun bağışıklık tepkisine katılabilir. Önceki çalışmalar, geleneksel Çin tıbbından elde edilen polisakkaritlerin makrofajları aktive edebildiğini ve TNF - α, IL-6 ve NO gibi sitokinlerin salınımını teşvik edebildiğini göstermiştir.

Bu makale, araştırma grubumuz tarafından Acanthopanax senticosus derisinden elde edilen polisakkaritlerin tek bir bileşeni olan AHP-III'ün fare makrofajı RAW264.7 hücreleri üzerindeki aktivasyon etkisinin incelenmesine ve mekanizmasının araştırılmasına odaklanmaktadır.

Bağışıklık yanıtı, antijenik yabancı maddeleri "tanıyarak" ve ortadan kaldırarak vücudun iç ortamının dengesini ve istikrarını korur. Enflamasyon, doku hücrelerinde ve kan lökositlerinde pro-enflamatuar ve anti-enflamatuar aracıların ifadesini düzenleyen çeşitli sinyal yollarının koordineli aktivasyonu ile karakterize edilen yoğun bağışıklık tepkilerinden kaynaklanır; Etkili enflamatuar yanıt, vücudun bağışıklık düzenleme işlevini artırabilen bağışıklık sistemi, vasküler sistem ve dokular arasındaki karmaşık hücresel ve moleküler etkileşimlere dayanır. Örneğin, bitki polisakkaritleri, fagositik öldürme işlevlerini geliştirmek için makrofajları aktive edebilir ve bağışıklık düzenleyici etkiler elde etmek için ilgili sitokinleri serbest bırakabilir.
Makrofajlar vücuttaki önemli bağışıklık hücreleridir ve enfeksiyonlara karşı direnç göstermede, iç ortam stabilitesinin korunmasında ve bağışıklık gözetiminde rol oynarlar. Aktif makrofajlar bağışıklık tepkileri ve NO, interlökin (IL), tümör nekroz faktörü (TNF) gibi inflamasyonla ilgili biyoaktif moleküller üretebilir. Önceki raporlar, makrofajların polisakkaritler için hedef hücreler olarak hizmet edebileceğini ve polisakkaritlerin immünomodülatör aktivitesini değerlendirmek için genellikle ideal hücre modelleri olarak kullanıldığını göstermiştir. Liu ve arkadaşları, Panax ginseng çiçeklerinden elde edilen polisakkaritlerin makrofaj fagositik yeteneğini artırarak ve bağışıklık faktörlerini serbest bırakarak makrofaj bağışıklık aktivitesini artırabileceğini bulmuştur. Buna ek olarak, araştırmalar Ganoderma lucidum polisakkaritlerinin ve Poria cocos polisakkaritlerinin de makrofajlar üzerinde aktive edici bir etkiye sahip olduğunu bulmuştur.

Şu anda, polisakkaritlerin biyolojik aktivitesi üzerine yapılan araştırmalar, esas olarak karmaşık bileşenlere sahip olan ve polisakkaritlerin etki mekanizmasını aydınlatmaya elverişli olmayan ham polisakkaritlere odaklanmaktadır. Araştırma ekibi, erken aşamada Acanthopanax senticosus'un ham polisakkaritlerinden üç tek bileşeni izole etmiş ve saflaştırmıştır. Araştırma ekibinin önceki araştırmalarına dayanarak, bu çalışma Acanthopanax senticosus polisakkaridi AHP-III'ün fare makrofajı RAW264.7 üzerindeki aktivasyon etkisini ve mekanizmasını araştırmaktadır.

Makrofajların fagositik işlevi, doğuştan gelen bağışıklığın temel savunma mekanizmasıdır. Nötr kırmızı testi, AHP-III'ün RAW264.7 hücrelerinin fagositik yeteneğini artırabildiğini ve deneysel konsantrasyon aralığında önemli bir fark olduğunu göstermiştir. NO, makrofajlar tarafından salgılanan ve vücutta bağışıklık düzenlemesi ve enflamatuar yanıtta önemli bir rol oynayan bir sinyal molekülüdür. Üç tip NO sentaz tarafından katalize edilir ve interferonlar ve enflamatuar faktörler (TNF - α, IL-6) gibi bazı dış uyaranlar indüklenebilir NO sentazı (iNOS) aktive edebilir. IL-6 ve TNF - α genellikle pro-inflamatuar sitokin sistemlerinin aktivasyonu için belirteç olarak kullanılır. RT qPCR ve ELISA deneyleri, AHP-III'ün TNF - α ve IL-6 genlerinin ekspresyon seviyelerini artırdığını ve böylece bu sitokinlerin salınımını artırdığını göstermiştir. ELISA deneyinde, boş gruptaki TNF - α sitokinlerinin salınımı standart eğrinin minimum eşiğinden daha düşüktü ve salınım nispeten küçüktü, bu da 0 olarak hesaplanan bir sonuçla sonuçlandı; RT qPCR deneyleri, iNOS geninin ekspresyon seviyesinin ilaç dozajının artmasıyla arttığını ve boş grupla karşılaştırıldığında anlamlı bir fark olduğunu gösterdi; Bu arada, Griess testine göre, tedavi edilen gruptaki NO salgısının boş gruba kıyasla önemli ölçüde arttığı bulundu. Yukarıdaki deneysel sonuçlar, AHP-III'ün sitokin salınımını teşvik edebileceğini ve sitokin genlerinin ekspresyonunu artırarak immünomodülatör bir rol oynayabileceğini göstermektedir.

NF-KB uzun zamandır, büyük ölçüde makrofajlar aracılığıyla inflamatuar yanıtlara aracılık edebilen interlökin ve tümör nekroz faktörü gibi pro-inflamatuar sitokinlerin aktivasyonuna dayanan tipik bir pro-inflamatuar sinyal yolu olarak kabul edilmektedir. RAW264.7 makrofajları, NF-KB sinyal yolağında IKK kinazı aktive eden TNF - α ve IL-6 gibi enflamatuar faktörler tarafından uyarılır. Fosforile IKK, IkBa'yı fosforile edebilir ve NF-KB dimerlerini serbest bırakarak NF-KB sinyal yolu ile ilgili proteinlerin fosforilasyon seviyesini artırabilir. Western blot deney sonuçları, RAW264.7 makrofajlarının AHP-III ile uyarılmasından sonra, NF-KB'deki p65, IKK β ve IkB α fosforilasyon seviyelerinin önemli ölçüde arttığını göstermiştir. AHP-III'ün NF-KB'de p65 ve IKK β fosforilasyonunu indükleyerek NF-KB sinyal yolunu aktive edebileceği ve böylece RAW264.7 makrofajlarının aktivasyonunu uyarabileceği doğrulanmıştır.

Özetle, boş grupla karşılaştırıldığında, AHP-III deney grubu RAW264.7 makrofajlarının fagositik kabiliyetinde önemli bir artış göstermiş ve NO, IL-6 ve TNF - α sitokinlerinin salınım ve gen ekspresyon seviyeleri belirli bir doz bağımlılığı ile önemli ölçüde artmıştır; Aynı zamanda, NF-KB sinyal yolundaki p65 ve IKK β fosforilasyon seviyeleri önemli ölçüde artmıştır. AHP-III'ün NF-KB sinyal yolunu aktive ederek immünomodülatör etkiler elde edebileceği ve Acanthopanax senticosus'tan elde edilen polisakkaritlerin daha da geliştirilmesi ve kullanılması için teorik bir temel sağladığı sonucuna varılabilir.