Yeşil Duttan Antosiyaninlerin Yüksek Hızlı Karşı Akım Kromatografisi ile Ayrılması, Hazırlanması ve Antioksidan Aktiviteleri Üzerine Çalışma
Dut, dutgiller familyasında yer alan dut ağaçlarının meyvesi olarak besin açısından zengindir ve anti-kanser, antioksidan, analjezik ve anti-inflamatuar, siyah saç güzelliği gibi çeşitli etkilere sahiptir. Sarı dut olarak da bilinen yeşil dutlar, olgunlaşmamış dutları ifade eder. Geleneksel bir Çin tıbbı olarak yeşil dutların toplanması, taşınması ve saklanması olgun dutlara kıyasla daha kolaydır ve antosiyanin, kateşin ve epikateşin içerikleri olgun dutlardan çok daha yüksektir. Üzüm çekirdeği, gül, mısır püskülü, kızılcık, kakao çekirdeği gibi çeşitli bitkilerden antosiyaninlerin çıkarılması ve izole edilmesi konusunda hem yurt içinde hem de yurt dışında çalışmalar yapılmıştır. Liu ve ark. alıçtan antosiyaninleri zenginleştirmek ve saflaştırmak için LSA-10 reçinesi kullanmış; Chen Wenliang ve ark. üzüm çekirdeklerinden oligomerik antosiyaninleri ayırmak için membran ayırma ve filtrasyon kullanmış, 65% oligomerik antosiyanin içeriği elde etmiş, ancak monomer ayırma bileşenleri elde edememiş; Glavnik ve ark. Japon kaplan kamışındaki antosiyaninleri yüksek performanslı ince tabaka kromatografisi kullanarak analiz etmiş ve ham ekstraktından monomerleri, dekamerleri ve B tipi antosiyaninleri tanımlamıştır. Ancak bu yöntemin hazırlanması zordur; Sun ve arkadaşları üzüm çekirdeklerinden antosiyaninleri ayırmak için yarı hazırlayıcı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanmıştır, ancak ön işlem karmaşıktır ve ayırma verimi düşüktür; Bu makale, büyük bir ayırma kapasitesine sahip olan, toplu hazırlama ve ayırma için kullanılabilen, kullanımı kolay ve yüksek ayırma verimliliğine sahip olan yüksek hızlı karşı akım kromatografisini (HSCCC) seçmektedir.
Bir polifenolik bileşik türü olan prosiyanidinler (PC) bitkilerde yaygın olarak bulunur. Esas olarak kateşinler, epikateşinler (EC), epigallokateşinler (EGC) ve epikateşin gallatlardan (ECG) oluşurlar ve güçlü antioksidan aktiviteye sahiptirler. Bu çalışma, yeşil dutlardan antosiyaninleri ayırmak ve saflaştırmak için yüksek hızlı ters akım kromatografisini kullanmayı amaçlamaktadır. Her bir bileşenin kimyasal bileşenlerini tanımlamak ve saflıklarını analiz etmek için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanılacak; her bir bileşendeki DPPH radikalleri, ABTS+radikalleri ve hidroksil radikallerinin süpürme kabiliyeti incelenerek antioksidan kapasitelerinin gücü yansıtılabilecektir. Bu çalışma, dutların derinlemesine işlenmesi ve kullanımının kapsamını genişletmekte, yeşil dutlardaki antosiyaninlerin endüstriyel üretimine yön vermekte ve dutların tıbbi kaynak olarak geliştirilmesi ve kullanılması için belirli bir referans değerine sahiptir.

‍

Hammadde olarak yeşil dut kullanılarak, deneysel koşullar altında ekstraksiyon, yağ giderme, safsızlık giderme ve ekstraksiyon zenginleştirme yoluyla ham ekstrakt elde edildi. HSCCC ayırma ve saflaştırma için en uygun çözücü sistemi n-hekzan etil asetat su (1:20:20, V/V/V) idi. 200 mg yeşil dut antosiyanin ham ekstresi HSCCC ile F1 (28.5 mg), F2 (10.43 mg), F3 (6.85 mg), F4 (10.65 mg) ve F5 (13.65 mg) olmak üzere beş bileşene ayrılmıştır. Her bir bileşen kateşinler, antosiyanin B2, antosiyanin A1, vb. içermektedir. Bunlar arasında F4, 95.05% saflıkta epigallokateşin gallat; F5 ise 73.75% saflıkta kateşinler içermektedir. Ayrılan bileşenlerin hepsi belirli antioksidan aktiviteye sahiptir. Kontrol olarak Vc kullanıldığında, DPPH serbest radikal süpürme yeteneği aşağıdaki gibidir: Vc>F5>F4>F2>F3>F1>yeşil dutun ham ekstresi; ABTS+serbest radikal süpürme yeteneği: Vc>F5>F4>F2>F3>F1>yeşil dutun ham ekstresi; Hidroksil radikali süpürme yeteneği: F1>F5>Vc>F4>F2>yeşil dutun ham ekstresi>F3. HSCCC büyük bir hazırlama kapasitesine sahiptir ve kromatografik kolonda paketleme malzemesi yoktur. Bu deneyde, ham ekstrakt beş bileşen elde etmek için bir kez ayrılabilir ve bazı bileşenler yüksek saflıkta monomer maddelere ve güçlü antioksidan aktiviteye sahiptir. Makalenin araştırma içeriği, antosiyaninlerin üretimi için yeni fikirler ortaya çıkarmış ve yeşil dutlardaki antosiyaninlerin tıbbi etkinliğinin incelenmesi için teorik destek sağlamıştır.