Dengzhanhua Standart Dekoksiyonunun Parmak İzi Atlası ve İn Vitro Antioksidan Aktivite Testine Dayalı Kalite Değerlendirmesi
Dengzhan Hua, Dengzhan Xixin olarak da bilinir, Asteraceae familyasından Erigeron breviscapus (Vant.) Hand- Mazz. adlı bitkinin kurutulmuş bütün bitkisi ilkbahar ve sonbaharda hasat edilir ve Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısına dahil edilmiştir. Kan dolaşımını teşvik etme, kollaterallerin tıkanıklığını açma, ağrıyı hafifletme, rüzgarı giderme ve soğuğu giderme etkilerine sahiptir. Modern farmakolojik çalışmalar, Scutellaria baicalensis'in nöroprotektif, kardiyovasküler ve serebrovasküler koruyucu, antioksidan, antikanser ve diğer farmakolojik etkilere sahip olduğunu göstermiştir. Kanser, kardiyovasküler ve serebrovasküler hastalıklar, vücuttaki süperoksit anyon radikalleri, hidroksil radikalleri ve lipid radikalleri gibi aşırı reaktif oksijen türlerinin neden olduğu oksidatif hasarla yakından ilişkilidir. Antioksidanların uygun şekilde alınması vücuttaki aşırı serbest radikalleri ortadan kaldırabilir, bu da insan sağlığı ve hastalıkların önlenmesi ve kontrolü için faydalıdır. Literatür, Lamplighter'ın mükemmel antioksidan aktiviteye sahip olduğunu göstermektedir. Lamplighter'ın kimyasal bileşimi karmaşıktır ve kimyasal bileşim ile aktif dozaj etkisi arasındaki ilişki henüz çok net değildir. Geleneksel Çin tıbbının kimyasal parmak izi, geleneksel Çin tıbbı teorisinin genel ve bulanık doğasına uygun olan Çin tıbbında bulunan madde bileşenlerini karakterize etme kabiliyeti nedeniyle Çin tıbbının kalite değerlendirmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, geleneksel Çin tıbbının yalnızca kimyasal bilgilerini yansıttığı ve terapötik etkileriyle bir ilişki kuramadığı için uygulaması giderek sınırlanmaktadır. 2020 yılında, Ulusal Tıbbi Ürünler İdaresi İlaç Değerlendirme Merkezi, klinik uygulamalarda geleneksel Çin tıbbının güvenliğini ve etkinliğini sağlamak için etkinlikle ilgili kalite kontrol yöntemlerinin oluşturulmasını savunan "Geleneksel Çin Tıbbının Biyolojik Etkilerinin Tespitine Yönelik Teknik Kılavuz (Deneme)" yayınlamıştır. Geleneksel Çin tıbbının "spektrum etki ilişkisi" çalışması, aktif bileşenlerin genel karakteristik ifadesini birden fazla gösterge ve hedefin etkileriyle yakından ilişkilendirebilir ve geleneksel Çin tıbbının özellikleriyle de uyumlu olan farmakolojik madde temelini makul bir şekilde belirleyebilir.

Çin tıbbı standart kaynatma, standartlaştırılmış süreçlerle hazırlanan, standartlaştırılmış klinik ilaç için kullanılan, ilacın doğruluğunu ve ölçüm tutarlılığını sağlayan tek bir geleneksel Çin tıbbı kaynatmasıdır. Çin tıbbı formül parçacıklarının temelde klinik kaynatma ile tutarlı olup olmadığını ölçmek için standart bir referans görevi görür. Standart kaynatma önerisi, geleneksel Çin tıbbı kaynatmasına dayalı dozaj formlarının kalite tutarlılığını sağlamak ve etkili kalite değerlendirme yöntemleri oluşturmak için önemli bir ölçüt sağlar. Bu makale, araştırma nesnesi olarak Dianzhanhua'nın standart kaynatmasını ele almakta ve DPPH ve ABTS serbest radikallerini temizleyen in vitro deneyler yoluyla antioksidan etkisini doğrulamaktadır. Aynı zamanda, HPLC parmak izi oluşturulmuş ve toplam flavonoid içeriği belirlenmiştir; Önemli ölçüde ilişkili antioksidan bileşenleri taramak için iki değişkenli korelasyon analizi kullanılarak, taranan bileşenler üzerinde küme analizi (CA) ve temel bileşen analizi (PCA) gerçekleştirilmiş ve ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizi (OPLS-DA) ayrıca diferansiyel bileşenleri tanımlamak için kullanılmıştır; Lamplighter ve preparatlarının kalite kontrolü için bir temel sağlamak üzere antioksidan etkisinin kalitesini değerlendirmek.

 

 

DPPH ve ABTS serbest radikalleri genellikle aktif bileşenlerin in vitro antioksidan aktivitesini ölçmek için indikatör olarak kullanılır. DPPH yöntemi, yalnız çift elektrona sahip maddelere bağlanarak tıbbi malzemelerin antioksidan kapasitesini belirlerken, ABTS yöntemi hidrofilik ve lipofilik maddelere bağlanarak antioksidan kapasiteyi belirler. Scutellaria baicalensis'in ana aktif bileşenleri flavonoidleri içerir. Bu çalışmada, 16 parti Scutellaria baicalensis standart dekoksiyonunun toplam flavonoid içeriği 2.85-11.28mg/mL olarak belirlenmiştir. İn vitro antioksidan aktivitesi, antioksidan göstergeler olarak DPPH ve ABTS serbest radikallerinin süpürülmesi ile değerlendirilmiştir. DPPH'nin IC50 değeri 1.00-3.39mg/mL ve ABTS'nin IC50 değeri 0.254-2.16mg/mL olup, Scutellaria baicalensis standart dekoksiyonunun ABTS serbest radikallerini süpürme yeteneğinin DPPH serbest radikallerini süpürme yeteneğinden daha güçlü olduğunu göstermektedir. Pearson iki değişkenli korelasyon analizi kullanılarak, iki in vitro antioksidan aktivitenin (IC50 değerleri), sırasıyla -0,714 ve -0,841 korelasyon katsayıları ile toplam flavonoid içeriği ile önemli ölçüde negatif ilişkili olduğu (P<0,01) bulunmuştur; bu da IC50 değeri ne kadar küçük ve toplam flavonoid içeriği ne kadar yüksekse, ekstraktın antioksidan kapasitesinin o kadar güçlü olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, toplam flavonoid içeriği Scutellaria baicalensis'in antioksidan gücünü etkileyen göstergelerden biridir ve Scutellaria baicalensis'in antioksidan gücünü değerlendirmek için bir gösterge olarak kullanılabilir.
Parmak izi spektrumlarının oluşturulması sürecinde, Agilent ZORBAX-SB C18, Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 ve Agilent Extend C18 kromatografik kolonlar deneysel olarak incelenmiştir. Kromatografik piklerin sayısı ve ayırma derecesinin karşılaştırılmasına dayanarak, Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18'in daha iyi performansa sahip olduğu bulundu; Farklı akış hızlarını (0.8, 1, 1.2 mL / dak) araştırdık ve 0.0.1% formik asit su metanol, 0.1% formik asit su asetonitril ve 0.1% formik asit su asetonitril tetrahidrofuran ikili sistemlerini farklı gradyanlarla araştırdık. 0,1% formik asit su asetonitril tetrahidrofuranın ayırma etkisinin daha iyi olduğu ve taban çizgisinin nispeten kararlı olduğu; 200-400nm algılama dalga boyunun taranmasıyla elde edilen sonuçlar, dalga boyunun farklı zaman aralıklarında değiştirilmesiyle elde edilen kromatografik piklerin çoklu olduğunu ve taban çizgisinin kararlı olduğunu göstermiştir. Son olarak, dalga boyunun 0-9 dakika arasında 252nm ve 9-60 dakika arasında 330nm olduğu belirlenmiştir.
Son yıllarda, Scutellaria baicalensis gibi şifalı bitkilerin parmak izi spektrumlarına ilişkin literatür çoğunlukla parmak izi spektrumlarının benzerliğini değerlendiren ve ortak zirveleri belirleyen HPLC yöntemini kullanmıştır; Literatür, parmak izi spektrumlarının kimyasal örüntü tanıması için CA ve PCA kullanmış ve tıbbi malzemeleri sınıflandırmış, ancak farklılıkların nedenlerine ilişkin derinlemesine analiz yapmamıştır. Bu makalenin ilk aşamasında Lampyridis şifalı bitkisinin parmak izi spektrumu temelinde, 0,770-0,993 benzerlikle Lampyridis'in standart kaynağının parmak izi spektrumu oluşturulmuş ve 21 ortak tepe noktası elde edilmiştir. Referans madde kullanılarak bilinen sekiz bileşen tanımlanmıştır. Bu çalışmada, DPPH serbest radikallerini temizleme yeteneği ile önemli ölçüde negatif korelasyon gösteren 10 kromatografik piki (pik 3, 4 ve 6 (klorojenik asit), pik 7, 11 ve 13 (skutellarin B), pik 14 (izoklorojenik asit B), pik 15 (skutellarin A) ve pik 17 ve 19 (izoklorojenik asit C) taramak için iki değişkenli korelasyon analizi kullanılmıştır (yani, ortak pik alanı ne kadar büyükse, IC50 değeri o kadar küçüktür). Kişi korelasyon katsayıları sırasıyla -0.552, -0.733, -0.626 ve -0, 665, -0.537, -0.518, -0.767, -0.754, -0.541 ve -0.748 olup ilgili kimyasal maddelerin DPPH radikallerini süpürmede ana aktif bileşenler olduğunu göstermektedir. Pikler 3, 4, 6, 7, 8, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18 (izoklorojenik asit A) ve 19 dahil olmak üzere on üç kromatografik pik, ABTS serbest radikal süpürme ile önemli ölçüde negatif korelasyon göstermiştir. Kişi korelasyon katsayıları sırasıyla -0.594, -0.861, -0.761, -0.829, -0.645, -0.583, -0.676, -0.721, -0.740, 0.574, -0.652, -0.720 ve -0.518 idi. İlgili maddeler ABTS serbest radikal süpürme için ana aktif bileşenlerdi. İki antioksidan yöntemle belirlenen antioksidan aktivite (IC50 değerleri), bilinen bileşenler olan klorojenik asit, skutellarin B, izoklorojenik asit B, skutellarin A ve klorojenik asit C ile önemli ölçüde ilişkiliydi ve bu beş bileşenin skutellarinin antioksidan aktivitesindeki ana aktif maddeler olduğunu gösteriyordu.
Deneyde, CA ve PCA analizi için değişken olarak DPPH ve toplam flavonoid içeriği ile önemli ölçüde korelasyon gösteren 10 ortak pik ve değişken olarak ABTS ve toplam flavonoid içeriği ile önemli ölçüde korelasyon gösteren 13 ortak pik kullanılmıştır. Örnekler, yabani S014 ve S016 ve geri kalan 14 parti ekilmiş örnek olmak üzere iki kategoriye ayrılmıştır. Bu durumun fener çiçeklerinin büyüme ortamı (ışık, rakım, enlem ve boylam vb.) ve hasat dönemi gibi faktörlerle ilişkili olabileceği tahmin edilmektedir. Aynı zamanda, Scutellaria baicalensis'in standart dekoksiyonu için bu bileşenlerin değişken olarak kullanıldığı bir puanlama modeli oluşturulmuştur. Standart kaynatmanın 16 partisi için puan sıralaması temel olarak in vitro antioksidan aktivite sıralamasıyla tutarlıydı. CA ve PCA temelinde, yazar ayrıca OPLS-DA analizini gerçekleştirmiş ve DPPH serbest radikallerinin temizlenmesi ile ilgili dört ana diferansiyel bileşen belirlemiştir: tepe 11, 15 (scutellarin), 14 (izoklorojenik asit B) ve tepe 13 (scutellarin); ABTS serbest radikallerinin temizlenmesi ile ilgili dört ana diferansiyel bileşen tepe 11, 15, 14 ve tepe 8'dir (scutellarin). Araştırma sonuçları, Scutellaria baicalensis'in kalitesini kontrol ederken, yüksek Scutellaria baicalensis B (yani baicalin) içeriğini kontrol etmenin yanı sıra, güçlü farmakolojik aktiviteye sahip diğer kalite kontrol göstergelerinin de uygun şekilde eklenmesi gerektiğini göstermektedir.
Özetle, bu çalışma kimyasal parmak izi ile biyolojik aktivite değerlendirmesini birleştirmekte ve spektral korelasyon araştırması yoluyla Lampyridis'in standart kaynağının antioksidan aktif bileşenlerini araştırmaktadır. Oluşturulan yöntemin kullanımı kolaydır ve sonuçlar güvenilirdir, bu da Lampyridis'in farmakolojik etkileri ve kalite değerlendirmesi üzerine daha fazla araştırma için bir temel sağlayabilir. Gelecekte, örnek boyutu artırılabilir ve sıvı kromatografi-kütle spektrometresi teknolojisi, standart kaynatmadaki bilinmeyen bileşenlerin ortak zirvelerini tanımlamak, farmakolojik aktivitelerini incelemek ve Scutellaria baicalensis'in kalite araştırması için bir temel sağlayarak çoklu farmakolojik aktivitelerin spektrum etki ilişkisini kapsamlı bir şekilde araştırmak için kullanılabilir.