UPLC parmak izine dayalı gül kalite analizi ve iki kimyasal bileşenin belirlenmesi
Gül çiçeği, Rosaceae familyasından bir bitki olan Rosa chinensis Jacq'ın kurutulmuş çiçeğidir. Gül kırmızısı, muzaffer kar, ince misafir, savaşan kar kırmızısı, dört mevsim çiçeği, değerli ay çiçeği ve parlak kar tanesi olarak da bilinir ve çiçeklerin kraliçesi olarak bilinir. Gül çiçekleri ilk olarak Compendium of Materia Medica'da kaydedilmiştir. Tatlı bir tadı, sıcak bir doğası vardır ve karaciğer meridyenine aittir. Kan dolaşımını teşvik etme, menstrüasyonu düzenleme, karaciğeri yatıştırma ve depresyonu hafifletme etkilerine sahiptirler. Adet bozuklukları, dismenore ve amenore; kan stazı, şişlik ve ağrı, yanıklar, düşme yaralanmaları, apseler ve skrofula tedavisinde kullanılabilirler. Başta Yunnan, Hubei, Sichuan ve Gansu olmak üzere ülke çapında ekilir ve yıl boyunca hasat edilebilir. Güllerin kimyasal bileşimi flavonoidler, tanenler, fenolik asitler, uçucu yağlar, pigmentler ve glikozit bileşikleri dahil olmak üzere zengin ve çeşitlidir.
Son yıllarda güller üzerine yapılan araştırmalarda belirli ilerlemeler kaydedilmiştir. Wu ve arkadaşları, güller ve güller arasındaki uçucu olmayan kimyasal bileşenlerdeki farklılıkları incelemek için UPLC-Q-Tof-MS teknolojisini kullanmıştır. Sonuçlar, güllerde 43 bileşik tespit edildiğini ve güllerde 25 bileşik tespit edildiğini göstermiştir. Bununla birlikte, güllerde tespit edilen ana bileşenler fenolik glikozitler, tanenler ve fosfolipitlerdir ve tespit edilen tek flavonoid bileşen kaempferol glukozittir. Literatür araştırma raporlarına göre, flavonoidler gül çiçeklerinin ana aktif bileşenleridir. Shangguan ve arkadaşları farklı hasat zamanlarında gül çiçekleri üzerinde çalışmış, farklı hasat dönemlerinde gül çiçeklerinin toplam flavonoid içeriğini ölçmüş ve DPPH ve hidroksil radikallerini temizleme yeteneklerine dayanarak antioksidan aktivitelerini değerlendirmiştir. Toplam flavonoid içeriği ile antioksidan aktivite arasındaki korelasyonu araştırmışlar, ancak farklı kökenlerden gelen gül çiçeklerinin toplam flavonoidlerini incelememişlerdir. Günümüzde, güller üzerine birçok çalışma vardır, ancak güllerin kalite standartları hakkında çok az rapor bulunmaktadır. Modern farmakolojik araştırmalar, hyperoside ve isoquercitrin'in antioksidan stres ve hücre apoptozu, anti akut karaciğer hasarı, anti-inflamatuar, antidepresan, vasküler koruma ve güllerde karaciğeri yatıştırma ve depresyonu hafifletme etkisiyle tutarlı diğer etkilere sahip olduğunu bulmuştur. Bu da hiperosid ve isoquercitrin'in güllerdeki ana aktif bileşenlerden biri olduğunu göstermektedir. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısında gül çiçeklerinin içerik tayini kapsamında, toplam hiperosit ve izoquercitrin miktarını sınırlamak için yalnızca izokratik elüsyon yöntemi kullanılmaktadır. Bu kromatografik koşul altında, yalnızca hiperosid ve izoquercitrin bilgileri yansıtılır, ancak gül çiçeklerinin kalitesini tam olarak yansıtamaz. Flavonoidler ve fenolik asitler gibi diğer karakteristik bileşenlerin bilgileri kapsamlı bir şekilde yansıtılamaz. Parmak izi spektrumu, geleneksel Çin tıbbında bulunan kimyasal bileşenleri kapsamlı bir şekilde yansıtabilir ve geleneksel Çin tıbbının kapsamlı kalite kontrolünün önemli bir aracı haline gelmiştir. Buna dayanarak, bu deney gül çiçekleri için bir UPLC parmak izi yöntemi oluşturmuş ve gül çiçeklerinin yalnızca parmak izi yöntemleriyle kalitatif ve kantitatif kontrolünü sağlamak için parmak izi koşulları altında flavonoid bileşenlerinin, hiperosid ve izoquercitrin'in toplam miktarını eşzamanlı olarak ölçmüştür. Kümeleme analizi ve temel bileşen analizi, farklı kökenlerden gelen gül çiçeklerini değerlendirmek için birleştirilerek gül çiçeklerinin kalite kontrol araştırmalarının temelini oluşturmuştur. Ayrıca, bu yöntem aynı aile ve cinsteki güllerin kalite standartlarına da uygulanabilir ve güllerin ve güllerin tanımlama araştırmalarına uygulanabilir.

 

Test numunesi için hazırlama yönteminin ve kromatografik koşulların belirlenmesi. Bu deneyde ekstraksiyon çözücüsü, ekstraksiyon yöntemi, ekstraksiyon süresi ve katı-sıvı oranı incelenmiştir. Kromatografik yöntem, bilgi içeriğini en üst düzeye çıkarmak, en iyi ekstraksiyon verimliliğini elde etmek ve yöntemin kararlılığını sağlamak için kullanılmıştır. Son olarak, ekstraksiyon çözücüsü olarak 50% metanol kullanılmış, ardından 30 dakikalık ultrasonik işlem ve 1.0 g katı-sıvı oranı uygulanmıştır: Numune hazırlama yöntemi olarak 50 mL. Kromatografik koşullar açısından, farklı kromatografik kolonlar, mobil faz sistemleri, kolon sıcaklıkları, akış hızları ve tespit dalga boyları araştırılmıştır. Karşılaştırmadan sonra, kromatografik kolon olarak Agilent SB C18, mobil faz olarak asetonitril 0.2% fosforik asit, 35 ℃ kolon sıcaklığı, 0.4 mL / dak akış hızı seçildiğinde, kromatografik piklerin pik şekli ve ayırma derecesinin iyi olduğu bulundu; Test çözeltisi, 190-400nm'de UV görünür ışık altında tam dalga boyunda tarandı ve sonuçlar, 254nm'de parmak izi spektrumunun ortak piklerinin yüksek yanıt değerlerine ve iyi pik şekillerine sahip olduğunu gösterdi. Ayrıca, hyperoside ve isoquercitrin'in maksimum absorpsiyonu 254nm'de gözlenmiştir, bu nedenle 254nm tespit dalga boyu olarak seçilmiştir.
Parmak izi spektrumunun analizi ve içerik belirleme sonuçları. Bu çalışmada, 15 parti gül çiçeğinin parmak izi spektrumları üzerinde benzerlik analizi yapmak için "Çin Bitkisel İlaç Kromatografik Parmak İzi Benzerlik Değerlendirme Yazılımı" (2012 versiyonu) kullanılmıştır. Toplam 30 ortak pik tespit edildi ve 15 parti numunenin parmak izi spektrumlarının benzerliği 0,95'ten büyüktü, bu da farklı partilerdeki gül çiçeklerinin kimyasal bileşiminde tutarlılık olduğunu gösteriyordu. Referans standartlarla karşılaştırma yoluyla 8'i flavonoid olmak üzere toplam 10 karakteristik pik tanımlanmıştır. Farklı kökenlerden gelen güllerin parmak izi spektrumlarını analiz etmek için küme analizi ve temel bileşen analizi kullanıldığında, kümeleme mesafesi 10 olduğunda, farklı partilerden gelen güller 5 kategoriye ayrılabilir, bu da farklı kökenlerden gelen güllerin belirli farklılıklara sahip olduğunu gösterir. PCA analizi, farklı bölgelerden gelen güllerin kalitesinde belirli farklılıklar olduğunu göstermektedir. Hiperosid ve izoquercitrin içeriğinin 15 parti gül çiçeğinde ölçülmesiyle, toplam hiperosid ve izoquercitrin içeriği 3.88-8.67mg/g olup, farmakope değeri olan 0.38%'den daha yüksektir. Bu da 15 parti gül çiçeğinin tamamının Henan Eyaleti, Zhoukou Şehrindeki en yüksek toplam hiperosid ve izoquercitrin içeriğine sahip nitelikli tıbbi malzemeler olduğunu göstermektedir.
Oluşturulan parmak izi yöntemi güllerin kalite değerlendirmesine uygulanabilir. "Çin Tıbbı Kromatografik Parmak İzi Benzerlik Değerlendirme Yazılımı" (2012 versiyonu) kullanılarak 15 parti gül tıbbi malzemesinin parmak izi spektrumları analiz edilmiş ve toplam 22 ortak pik tespit edilmiştir. Gül tıbbi malzemelerinin 15 partisinin parmak izi spektrumlarının benzerliği 0.95'ten büyüktü. Gül ve gülün her ikisi de Rosaceae familyasının üyeleridir ve morfolojik, mikroskobik ve fizikokimyasal özellikleri açısından ayırt edilebilirler. Bununla birlikte, parmak izi tanımlamasına ilişkin herhangi bir rapor bulunmamaktadır. Bu çalışmada oluşturulan UPLC parmak izi, gül ve gülü tanımlamak için kullanılabilir. Parmak izi spektrumlarının karşılaştırılmasından, ikisinin 15 ortak bileşene sahip olduğu, gülün 10 özel bileşene ve gülün 5 özel bileşene sahip olduğu görülebilir.
Gül çiçeklerinin UPLC parmak izinin oluşturulması temelinde, bu çalışma birden fazla flavonoid bileşeni tanımladı ve bunları kimyasal örüntü tanıma yöntemini kullanarak değerlendirdi; Güllerde hiperosid ve izoquercitrin içeriğini belirlemek için bir yöntem oluşturarak güllerin kalite kontrolü için bir temel sağladı. Bu yöntem basit, doğru ve güllerle ilgili sonraki araştırmalar için referans sağlayabilir.