Mirisetinin siklofosfamid ile bağışıklık sistemi baskılanmış farelerin bağışıklık fonksiyonu üzerindeki etkisi
Bağışıklık sistemi, dengeyi ve genel sağlığı korumak için organizmaları patojenlerin neden olduğu enfeksiyonlardan koruyabilir. İmmünsüpresyon, uzun süreli veya geçici bir immün fonksiyon bozukluğudur. Bağışıklık sistemi hasarı nedeniyle organizmalar patojenlere karşı daha hassas hale gelir ve daha düşük dirence sahip olurlar. Genellikle ciddiye alınmayan küçük patojenler bile kolayca enfeksiyonlara neden olabilir. Şu anda klinik uygulamada kullanılan birçok immünomodülatörün levamizol ve Bacillus subtilis gibi bazı yan etkileri vardır. Bu nedenle, bağışıklık baskılanmasıyla ilgili hastalıkların tedavisine yardımcı olmak için yeni immünomodülatörlerin araştırılması ve geliştirilmesi hala gereklidir.

18. yüzyılın sonlarında, Myriaceae familyasından Yangmei'nin kabuğundan mirisetin (MYR) adı verilen açık sarı bir kristal çıkarılmıştır (bkz. Şekil 1). MYR meyvelerde, sebzelerde, çayda ve şarapta bulunan flavonoid bir bileşiktir ve birçok gıdada önemli bir aktif bileşen ve katkı maddesidir. Modern farmakolojik araştırmalar, MYR'nin farklı kanser türleri, enflamatuar hastalıklar, ateroskleroz, Alzheimer hastalığı ve patojenik mikrobiyal enfeksiyon dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar üzerinde terapötik etkileri olduğunu göstermektedir. Bununla birlikte, bu flavonoidlerin işlevi, özellikle bağışıklık sisteminin düzenlenmesinde hala tam olarak anlaşılamamıştır.

Siklofosfamid (CTX), bazı solid tümörler, lenfomalar ve bazı otoimmün hastalıklarla mücadele etmek için kemoterapi ve hastalık değiştirici olarak yaygın şekilde kullanılan bir immünosupresif indükleyicidir. CTX normal hücrelerin DNA'sına zarar verebilir, bu da immünosupresyon yapabilmesinin nedenlerinden biridir. Şu anda, klinik ortamlarda bir immünosupresan olarak da kullanılmaktadır. MYR ayrıca çeşitli laboratuvarlarda bağışıklık yetersizliğinin ideal hayvan modellerini oluşturmak için yaygın olarak kullanılan bir modelleme ilacıdır.

Bu nedenle, bağışıklıklarını azaltmak ve immünosupresif bir model oluşturmak için farelere intraperitoneal olarak enjekte etmek üzere CTX kullandık. Model fareleri MYR ile tedavi ettik ve MYR'yi yeni bir immünomodülatör ajan olarak geliştirmek için dalak ve timus indekslerini, dalak lenfosit proliferasyon yeteneğini, serum hemolizin seviyelerini, antikor oluşturan hücre yeteneğini ve ayrıca serum sitokin interlökin-2 (IL-2), interferon - γ (IFN - γ), interlökin-4 (IL-4), interlökin-6 (IL-6) salgılama seviyelerini değerlendirdik.

 

İmmünosupresyon, insan vücudundaki immün fonksiyon bozukluğunun bir tezahürüdür. Bir veya daha fazla faktörün birleşik etkisi altında, insan vücudundaki bağışıklık hasarı onu enfeksiyona karşı daha duyarlı hale getirebilir ve bağışıklıkla ilgili lezyonlarla sonuçlanabilir. MYR, birçok gıdada bulunan ve karaciğer koruması, anti-tümör, anti-inflamatuar, antitrombotik, antioksidan gibi etkileri olan flavonoid bir maddedir. Klinik öncesi bağışıklık düzenlemesi hakkında da birçok rapor bulunmaktadır. MYR, atopik dermatit farelerinde kalsitriol tarafından indüklenen cilt hasarı semptomlarını iyileştirebilir, lokal Th1/Th2 dengesini düzenleyebilir ve hasarlı cilt bariyerlerini onarabilir. Hou ve arkadaşları, in vitro deneylerde MYR'nin tümör nekroz faktörü - α (TNF - α)/IFN - γ tarafından indüklenen insan immortalize keratinositlerinde inflamatuar faktörler üzerinde inhibe edici bir etkiye sahip olduğunu ve STAT1 ve NF - κ B sinyal yollarını bloke edebileceğini bulmuşlardır. MYR, Treg hücrelerinin oranını önemli ölçüde artırmış ve kolit farelerinde immün dengenin restorasyonunu desteklemiştir.
CTX, geniş anti-tümör özelliklere sahip bir tür alkilleyici ajandır. İlk olarak T hücrelerine karşı seçiciliği olan ve in vivo DNA hasarı ve onarımını indükleyebilen "gizli" geniş spektrumlu bir anti-kanser ilacı olarak anılmıştır. Otoimmün hastalıkları tedavi etme ve aşırı bağışıklığı düzenleme kabiliyetinin yanı sıra modellemedeki yüksek kolaylığı ve basit malzeme gereksinimleri nedeniyle CTX şu anda laboratuvarlarda bağışıklık sistemi baskılanmış hayvan modelleri için yaygın olarak kullanılan bir indükleyicidir. Bu deneyde MYR'nin bağışıklık seviyesini değerlendirmek için CTX modellemesi kullanılmıştır. Normal kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, Mod tedavi grubunda dalak, timus indeksi ve sitokin salgılama seviyesi gibi bağışıklık tepkisiyle ilgili göstergeler önemli ölçüde azalmıştır ve bu da bağışıklık yetersizliği olan fare modelinin başarılı bir şekilde kurulduğunu göstermektedir. Vücudun bağışıklık fonksiyonu, dalak ve timus gibi bağışıklık organlarının işlevsel durumuyla yakından ilişkilidir ve karşılıklı olarak etkilenir. Vücudun bağışıklık yeteneği baskılandığında, dalak ve timus küçülecektir. Bu çalışmada, MYR'nin farelerde MYR'nin neden olduğu dalak ve timus bağışıklık organlarının atrofisini hafiflettiği ve bağışıklık organlarının ağırlığında ve indeksinde bir artışa yol açtığı bulunmuştur. Bu, MYR'nin farelerin bağışıklık seviyesini bir dereceye kadar artırabileceğini göstermektedir. Mod grubu verileriyle karşılaştırıldığında, MYR tedavisinin her üç grubu da dalak ve timus endekslerini önemli ölçüde artırmıştır ve bu eğilimdeki artış derecesi, tedavi etkinliğinin ilaç dozajına belirli bir bağımlılığını göstermektedir. Yüksek dozlarda MYR uygulandıktan sonra her iki değerin de kontrol grubu seviyesine yakın olduğunu belirtmek gerekir. Sonuçlar, MYR'nin CTX'in neden olduğu bağışıklık organı hasarını hafifletebileceğini ve bağışıklık organları üzerinde bağışıklık arttırıcı bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir.
Hücresel ve humoral bağışıklık yanıtlarını içeren adaptif bağışıklık sistemi, vücudu belirli patojenlerin istilasından koruyabilir. Lenfosit proliferasyonu, adaptif bağışıklığın aktivasyonunda çok önemli bir rol oynar ve genellikle hayvanların immün yanıt yeteneğini değerlendirmek için kullanılır. ConA ve LPS sırasıyla T ve B lenfositlerinin çoğalmasını uyarabilir. MYR'nin bağışıklık etkisini daha da doğrulamak için, ConA ve LPS etkisi altındaki lenfositlerin salgı seviyelerini tespit ettik. Deneysel sonuçlar, MYR uygulamasının CTX'in lenfositler üzerindeki inhibisyonunu önemli ölçüde hafifletebileceğini ve farklı MYR konsantrasyonlarının uygulanmasından gözlemlenen değişikliklerin bir şekilde ilacın dozajına bağlı olduğunu göstermektedir. Araştırmalar, CD4+T lenfositlerin CD8+T lenfositlere oranındaki dengesizliğin bağışıklık fonksiyonu üzerinde etkisi olduğunu göstermiştir. Akış sitometrisi analizi yoluyla, CTX ile tedavi edilen farelerin CD4+ve CD8+ alt gruplarının önemli ölçüde azaldığı ve CD4+/CD8+ alt grup oranının düştüğü (P<0,05 veya P<0,01) bulunmuştur, bu da farelerin immünosupresif bir durumda olduğunu göstermektedir. Mod model grubu ile karşılaştırıldığında, MYR'nin her doz grubu CD4+ve CD8+T hücre alt gruplarının sayısını ve CD4+/CD8+alt grup oranını artırabilir (P<0.05 veya P<0.01), yüksek doz grubu önemli bir doza bağlı etki gösterir. MYR, CD4+ve CD8+hücrelerinin seviyelerini etkilemede, bağışıklık dengesizliklerini düzenlemede ve normal seviyelere geri getirmede rol oynayabilir. Bu nedenle, MYR'nin hem hücresel hem de humoral bağışıklığı artırabildiğini göstermektedir ki bu da dalak ve timus indeksleri üzerindeki etkilerinden çıkarılan sonuçla tutarlıdır.
Serum hemolizindeki değişiklikler moleküler düzeyde vücutta üretilen antikor miktarını yansıtabilir ve serum hemolizindeki bir artış timusa bağlı hücre antijenlerine karşı spesifik antikor yanıtını artırabilir. Kontrol deneyinin veri sonuçlarına dayanarak, boş grupla karşılaştırıldığında, CTX ile indüklenen immünosupresif fare grubundaki hemolizin içeriğinin azaldığını ve antikor üreten hücrelerin sayısının azaldığını bulduk. Farklı MYR dozları, CTX ile indüklenen immünosupresif farelerde serum hemolizin oluşumunu önemli ölçüde artırmış ve ayrıca spesifik antikor üreten hücrelerin sayısı üzerinde belirli bir artırıcı etkiye sahip olmuştur, bu da MYR'nin farelerin hücresel bağışıklık fonksiyonunu artırabileceğini göstermektedir. Bu artışla ilişkili mekanizmaları araştırmak için, MYR'nin lenfositler ve enflamatuar faktörler üzerindeki etkileri üzerine daha derinlemesine bir in vivo çalışma yürüttük.
Bağışıklık sistemindeki unsurlardan biri olan sitokinler, bağışıklık yanıtlarında hücreler arasında köprü ve bağlantı görevi görerek bağışıklık ve enflamatuar yanıtların koordine edilmesinde önemli bir rol oynar. Örneğin, TH2 hücre alt kümeleri tarafından anti-enflamatuar sitokin IL-4 salgılanmasının artırılması, enflamasyonu kontrol edebilir ve alerjik rinit semptomlarını iyileştirebilir. IFN - γ, immün yanıtların düzenlenmesinde, T hücresi oluşumunun indüklenmesinde, makrofajların aktive edilmesinde ve TH1 ve TH2 hücrelerinin çapraz düzenlenmesinde önemli bir rol oynar. IL-2, immünosupresif veya immünostimülatör etkiler göstermek için Treg'i düzenleyebilir ve immün homeostaz sırasında önemli bir rol oynar. IL-4'ün hem uyarıcı hem de inhibe edici çoklu immünomodülatör etkileri vardır ve B hücre proliferasyonunu uyarabilir. Hematopoetik hücre gelişimi ve farklılaşmasının yanı sıra IgG ve IgE immünoglobulin oluşumunu teşvik etmede önemli bir faktördür. IL-6'nın hücreye özgü ifadesi çeşitli biyolojik reaksiyonlara yol açabilir, akut enflamatuar yanıtlarda önemli bir aracı rol oynayabilir ve IFN - γ üretimini azaltarak efektör CD8 + T hücre yanıtlarını inhibe edebilir. Deneysel sonuçlar, CTX enjekte edilen farelerde IL-2 ve IL-4, IL-6 ve IFN - γ sitokinlerinin ifade seviyelerinin kontrol grubuna kıyasla önemli bir düşüş eğilimi gösterdiğini ve IL-4 hariç diğer üç grubun verilerindeki farklılıkların son derece önemli olduğunu göstermiştir. MYR, IL-2 ve IL-4, IL-6 ve IFN - γ sitokinlerinin salgılanma seviyelerini doza bağlı olarak kontrol grubunun normal aralığına yaklaştırarak bu fenomeni tersine çevirebilir ve farelerde CTX kaynaklı bağışıklık eksikliği üzerinde iyi bir düzenleyici etkiye sahiptir. Bunlar arasında, yüksek doz ilaç grubundaki IL-6 ve TNF - γ konsantrasyonları kontrol grubunun seviyelerine geri getirilmiştir. Bu sonuç, MYR'nin vücudun bağışıklık sisteminin dengesini geri kazandırdığını ve bağışıklık hücreleri ile sitokinler arasındaki etkileşimleri düzenleyerek bağışıklık eksikliği semptomlarını iyileştirdiğini göstermektedir. Genel olarak, MYR'nin Th1 hücre alt kümeleri tarafından salgılanan sitokin IFN - γ üretimi üzerinde Th2 hücre alt kümeleri tarafından salgılanan sitokin IL-4 ve IL-6'dan daha büyük bir etkisi vardır, bu da MYR'nin esas olarak hücresel bağışıklık fonksiyonunu güçlendirerek bağışıklık sistemi baskılanmış model farelerin bağışıklık fonksiyonunu geliştirdiğini gösterir.
Özetle, MYR'nin bağışıklık sistemi üzerindeki etkisi karmaşıktır, çünkü çeşitli lenfositlerin ve enflamatuar faktörlerin ekspresyonunda değişikliklere neden olabilir ve bu faktörler arasındaki etkileşimleri düzenleyebilir. Bu çalışmanın sonuçlarına dayanarak, MYR'nin özellikle yüksek doz koşulları altında bağışıklık fonksiyonunda olumlu bir rol oynadığı sonucuna vardık. MYR'nin CTX tarafından indüklenen immün baskılanmayı tersine çevirebileceğini gösterdik. Bu nedenle, deneysel sonuçlarımız MYR'nin bağışıklık sistemini güçlendirici etkisi için kanıt ve daha fazla geliştirilmesi ve potansiyel klinik uygulamaları için bilimsel temel sağlamaktadır. Gelecekteki araştırmalarda, MYR'nin düşük bağışıklık veya bağışıklık bozukluklarının neden olduğu bazı hastalıklar üzerindeki etkisini keşfetmeye devam etmeyi umuyoruz.