HPLC parmak izi spektrumları ve Fu Mao demir çubuk çekicinin farklı bölgelerindeki dört alkaloid içeriğinin belirlenmesi
Aconitum flavum Hand. - Mazz. Ranunculaceae familyasının Aconitum cinsine aittir. Duanchongcao, Wuyao ve Yizhihao olarak da bilinir ve geleneksel bir Çin şifalı bitkisi ve halk bitkisidir. Kökleri ve fideleri ilaç olarak kullanılır ve kurutulmuş kökleri genellikle "demir çubuk çekici" olarak bilinir. Shaanxi Çin Bitkisel Tıbbı, Fumao Demir Çubuk Çekicinin kan dolaşımını teşvik etme, kan stazını giderme, ağrıyı hafifletme, rüzgarı ve rutubeti giderme, şişliği ve toksinleri azaltma, kanamayı durdurma, düşmelerden kaynaklanan yaralanmaları, romatoid artriti ve bel ve bacak ağrısını tedavi etme etkilerine sahip olduğunu kaydeder.

Literatür raporlarına göre, alkaloidler Çin şifalı bitkisi Aconitum carmichaelii'nin ana aktif bileşenleridir ve akonitin nispeten yüksek içeriğe sahip ana kimyasal bileşendir. Fumao Iron Hammer ve Iron Hammer arasındaki içerik farkının ana bileşenleri 12 epiaconitine ve aconitine'dir. Fumao Iron Hammer, Iron Hammer'a göre daha yüksek 12 epiakonitin ve akonitin içeriğine sahiptir. Modern farmakolojik deneysel çalışmalar akonitin, 12 epiakonitin, sofokarpin ve 3-asetilakonitinin analjezik, anti-enflamatuar ve antikanser aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir.

Şu anda, Fumao Demir Çekiç'in kalite standartları hakkında çok az rapor bulunmaktadır. Geleneksel Çin tıbbının parmak izi spektrumu, geleneksel Çin tıbbında bulunan kimyasal bileşenlerin türlerini ve miktarlarını kapsamlı bir şekilde yansıtabilen kalite değerlendirmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada Fumao Tiebang Hammer tıbbi malzemelerinin farklı kökenlerinden 15 parti için HPLC parmak izi kromatogramları oluşturulmuş ve 12 epiakonitin, Song Guoling, akonitin ve 3-asetilakonitin dahil olmak üzere dört alkaloidin içeriği belirlenmiştir; İkinci olarak, Çin tıbbı kromatografik parmak izi benzerlik değerlendirme sistemi (2012A versiyonu) benzerlik değerlendirmesi için kullanılmış ve gösterge bileşenlerinin taranması ve Çin tıbbı Fumao Tiebang Hammer'ın kalitesinin kapsamlı kontrolü için bilimsel temel sağlamak amacıyla küme analizi ve temel bileşen analizi için SPSS yazılımı kullanılmıştır.

 

 

Kromatografik koşulların belirlenmesi. Akonitin ve Song Guoling'in maksimum absorpsiyon dalga boyu 210nm, akonitin ve 3-asetilakonitinin maksimum absorpsiyon dalga boyu ise 235nm'dir. Dört tepe noktasını dengelemek ve en yüksek yanıt değerini elde etmek için 210, 215, 220 ve 230nm araştırılmıştır. Son olarak, 215nm tespit dalga boyu olarak seçilmiştir. Agilent Eclipse Plus C18 (50mm × 4.6mm, 5 μm), Unitary C18 (250mm × 4.6mm, 5 μm), JADE-PAK ODS (250mm × 4.6mm, 5 μm) ve ACE Excel C18PFP (250mm × 4.6mm, 5 μm) incelendi. Simetri faktörü, çözünürlük ve pik şeklini karşılaştırarak, sonuçta ACE Excel C18 PFP kromatografik kolonu seçtik. Sulu faza 2.0, 2.5 ve 3.0 mL trietilamin eklenmesini araştırdık ve 2.5 mL trietilamin eklenmesinin daha iyi kromatografik pik şekilleri ve gradyan elüsyon etkileri ile sonuçlandığını gördük. Bu nedenle, sulu faza 2,5 mL trietilamin ekledik. Farmakope ve literatüre göre, asetonitril: 0,1% amonyum asetat, asetonitril: 0,2% glasiyal asetik asit (trietilamin ile pH=6,2'ye ayarlanmış), asetonitril ve su ve asetonitril: 0,1% fosforik asit gibi mobil fazlar incelenmiştir. Son olarak, asetonitril: 0.1% fosforik asit sulu çözeltisinin gradyan elüsyonu seçilerek düzgün bir taban çizgisi, düzgün pik dağılımı ve iyi bir ayırma etkisi elde edilmiştir.

Parmak izi spektrumu ve içerik belirleme analizi. Fu Mao demir çubuk çekicinin farklı kökenlerinden gelen örneklerin parmak izi spektrumunda kromatografik piklerin sayısı, alıkonma süresi ve aynı alıkonma süresindeki pik alanında farklılıklar vardır; 15 parti tıbbi malzemenin parmak izi spektrumlarının benzerlik değerlendirme sonuçları 0,769 ila 0,952 arasında değişmektedir; Küme analizi S1 ve S2 örneklerini Sınıf I olarak sınıflandırmıştır; S3~S5 örnekleri Sınıf II olarak sınıflandırılmıştır; S6~S13 Sınıf III olarak sınıflandırılmıştır; S14 ve S15 Sınıf IV olarak sınıflandırılmıştır. Temel bileşen analizi sonuçları ile uyumludur. Temel bileşen analizi, ortak karakteristik bileşenleri taramak, belirleyici faktörleri tanımlamak ve Fumao Demir Çubuk Çekiç tıbbi malzemelerinin kalite değerlendirmesi için referans sağlamak amacıyla kullanılmıştır. Temel bileşen analizi, çıkarma kriteri olarak 1,2'den büyük özdeğerleri kullanır ve kümülatif varyans katkı oranı 80%'den büyük olduğunda, Fu Mao demir çubuk çekicinin parmak izi spektrumundaki ortak piklerin bilgilerinin çoğunu temsil edebilen beş temel bileşen elde edilir. İçerik belirleme sonuçlarına göre, 12 epiaconitine, Song Guoling ve aconitine içeriklerinin nispeten yüksek olduğu ve önceki literatür incelemelerinin hepsinin anti-enflamatuar ve analjezik aktivitelere sahip olduğunu bulduğu görülebilir. Bununla birlikte, 3-asetilakonitin içeriği çeşitli örneklerde genellikle düşüktür ve Fuzhong Demir Çekici için bir kalite kontrol göstergesi olarak kullanılmamaktadır. Bu nedenle, içerik belirleme ve temel bileşen analizi sonuçlarına dayanarak, bu deneyde eş zamanlı olarak beş temel bileşene önemli ölçüde katkıda bulunan ve büyük pik alanlarına sahip olan 2, 3, 4 (12 epiakonitin), 5 (Song Guoling), 6 ve 15 (akonitin) olmak üzere altı karakteristik bileşen kullanılmıştır. Bunlar arasında 2, 3 ve 6 numaralı pikler bilinmemektedir ve Fu Mao Demir Çekicinin sonraki aşaması için kalite kontrol göstergeleri olarak kullanılıp kullanılamayacaklarını incelemek için kütle spektrometresi ile daha fazla doğrulanabilir.

İçerik belirleme sonuçları Qinghai üretim bölgesindeki Yushu (S3), Jiuzhi (S4) ve Maqin'in (S5) daha yüksek alkaloid içeriğine sahip olduğunu göstermektedir; Wang Rong ve arkadaşları Ningxia'daki Guoluo, Yushu, Haidong ve Guyuan'da Fumao Demir Çekicinin alkaloid içeriğini belirlemiştir. Sonuçlar, alkaloid içeriğinin Guoluo Banma ve Yushu'daki Fumao Demir Çekicinde en yüksek olduğunu göstermiştir ki bu da bu çalışmanın sonuçlarıyla tutarlıdır. Toplam akonitin miktarı dört bileşen arasında en yüksekken, toplam 3-asetilakonitin miktarı en düşüktür ve bu da Zhao Meiyu'nun araştırma sonuçlarıyla tutarlıdır. En yüksek 12 aconitine, Song Guoling, aconitine ve 3-acetylaconitine içeriğine sahip üretim alanları Yushu, Qinghai'deki Jiangxi Orman Çiftliği, Qinghai'deki Maqin Havaalanı, Sichuan'daki Aba ve Qinghai'deki Guinan'dır; Jiangxi Orman Çiftliği ve Maqin Havaalanı'ndan alınan örneklerdeki dört alkaloidin toplam miktarı da en yüksektir. Farklı bölgelerdeki Fu Mao Tie Ban Hammer gibi tıbbi malzemelerin kalitesinde farklılıklar vardır; bu farklılıklar tıbbi malzemelerdeki ikincil metabolitlerin birikimini etkileyen ve tıbbi malzemelerin benzerliği ve içeriğinde farklılıklara yol açan tıbbi malzemelerin yetişme ortamı, iklim, toprak, toplama zamanı ve büyüme yılları gibi faktörlerden kaynaklanıyor olabilir.

Çin Farmakopesi, Fu Mao Tie Ban Zhong şifalı bitkisinin HPLC kalite kontrolünü kapsamamaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada Fu Mao Tie Ban Zhong'un parmak izi spektrumunu oluşturmak için HPLC-DAD yöntemi kullanılmış ve dört alkaloid bileşenin içeriği belirlenmiştir. Aynı zamanda, farklı kökenlerden gelen Fu Mao Tie Ban Zhong'un kalitesini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için benzerlik değerlendirmesi, küme analizi ve temel bileşen analizi kullanılmıştır. Üç yöntem karşılıklı olarak doğrulandı ve desteklendi, tek bir bileşenin içeriğine dayalı olarak şifalı bitkilerin kalitesini değerlendirmenin dezavantajından kaçınıldı ve Fu Mao Tie Ban Zhong şifalı bitkilerinin kalite değerlendirmesi için referans sağlandı.