Asasetin J8'in endotel hücre proliferasyon hedefleri ve apoptoz ile ilgili hücre sinyal yolakları üzerindeki inhibitör etkisi üzerine moleküler yerleştirme tabanlı çalışma
Akasya kabuğu, Albizia julibrissin Durazz baklagilinin kurutulmuş kabuğudur. Tatlı ve hafif bir tadı vardır ve farmakopede depresyonu hafifletme, zihni sakinleştirme, kan dolaşımını teşvik etme ve şişliği azaltma etkilerine sahip olduğu kaydedilmiştir. Esas olarak huzursuzluk, depresyon, uykusuzluk, akciğer apsesi, yaralar ve düşmelerden kaynaklanan ağrı gibi semptomların tedavisinde kullanılır. Modern farmakolojik çalışmalar, Akasya kabuğunun ham özlerinin ve toplam saponinlerinin in vivo ve in vitro tümör hücresi çoğalmasını inhibe etme aktivitesine sahip olduğunu göstermiştir. Zhu Liangchun gibi ünlü doktorlar akasya kabuğu gibi ilaçlarla akciğer kanseri tedavisinde iyi klinik sonuçlar elde etmişlerdir. Anti-tümör anjiyogenez aktivitesinin rehberliğinde, bu projenin ön çalışması, Akasya kabuğundan tümör anjiyogenezini inhibe eden etkili bileşenleri ve aktif bileşenleri izole edip saflaştırdı ve aktif bileşenlerini julioside J8 (J8) olarak tanımladı. Araştırma sonuçları, J8'in endotel hücre proliferasyonu üzerinde önemli inhibitör aktiviteye sahip olduğunu göstermiştir. Ve hücre apoptozuna neden olabilir. Bununla birlikte, etkilerini göstermek için hücre dışından ve hücre zarından, sitoplazmadan çekirdeğe sinyal iletimini nasıl düzenlediği hala belirsizdir ve yurtiçinde ve yurtdışında araştırma raporları yoktur. Bu çalışmada, J8'in endotel hücre proliferasyonu üzerindeki inhibitör etkisinin hedeflerini ve apoptoz ile ilgili hücre sinyal yolaklarını analiz etmek için in vitro hücre deneyleri ile birlikte moleküler yerleştirme kullanılmıştır.

J8, Akasya kabuğundan izole edilen bir saponindir. Önceki çalışmalar, hem in vitro hem de in vivo tümör anjiyogenezi üzerinde inhibe edici etkileri olduğunu ve endotelyal hücre apoptozunu indükleyebileceğini öne sürmüştür. Bununla birlikte, hücre apoptozunu indüklediği yol çok açık değildir. J8'in endotel hücre apoptozunu indükleme mekanizmasını araştırmak için, literatürde bildirilen ekstraksiyon, izolasyon ve tanımlama yöntemleri kullanılarak yeni bir numune grubu hazırlandı ve aktiviteleri tespit edildi. J8'in hücreler üzerindeki etki mekanizmasını, J8'in hücrelerin içine girip girmediğini veya hücre zarındaki yüzey proteinleriyle etkileşime girip girmediğini araştırmak için, hücre içindeki ve dışındaki J8 konsantrasyonunu tespit etmek için HPLC kullanıldı. Sonuçlar J8'in endotel hücrelerinin içine girmediğini ve sadece hücre zarındaki yüzey proteinleriyle etkileşime girdiğini göstermiştir. Belirli proteinlerle etkileşimini daha fazla araştırmak için, deney ilk olarak apoptoz DR3、DR4、DR5、TFR-1， ile ilişkili membran proteinleri FAS, FAS ve FAS'ı yerleştirmek için moleküler yerleştirme kullandı ve J8'in sadece hücre çoğalmasıyla ilgili proteinler olan FAS ve VEGF'ye iyi bağlandığı bulundu.
Vasküler endotelyal büyüme faktörü VEGF, endotelyal hücre proliferasyonunu, göçünü, artmış vasküler geçirgenliği ve anjiyogenezi teşvik edebilen oldukça spesifik bir pro endotelyal büyüme faktörüdür. VEGF aktivitesinin inhibe edilmesi, tümör kan damarlarının oluşumunu önemli ölçüde engelleyebilir ve böylece anti-tümör tedavisinin terapötik hedefine ulaşabilir. Literatür, Akasya kabuğundan elde edilen toplam saponinlerin tümör kan damarlarının oluşumunu önemli ölçüde inhibe edebildiğini ve VEGF aktivitesini baskılayabildiğini bildirmektedir. J8 saponinlerden biridir ve moleküler yerleştirme ve in vitro moleküler tespit, J8'in VEGF'ye bağlanabildiğini ve böylece endotelyal hücrelerin çoğalmasını engellediğini göstermiştir.
Modern moleküler ve hücresel farmakoloji araştırmaları, hücre apoptozunun sinyal iletiminin iki yola ayrılabileceğini öne sürmektedir: eksojen ve endojen (mitokondriyal) yollar. Ekzojen apoptotik yolağa TNF-a, TRAIL, FAS-L gibi apoptoz reseptörleri aracılık eder. Fas-L, hücre apoptozunu başlatmak için FADD'yi işe alarak ve bağlayarak FAS'a bağlanır. Mitokondri, farklı sinyal yollarına dayalı olarak Kaspaz bağımlı ve Kaspaz bağımlı olmayan apoptotik sinyal yollarına ayrılabilen endojen hücre apoptozunun düzenleyici merkezidir. FADD'nin Kaspaz-8'e bağlanması Kaspaz-8 dimerizasyonuna, yani aktivasyonuna yol açabilir. Aktive olan Kaspaz-8, Kaspaz-3/9'u yeniden aktive ederek hücre apoptozunu indükler. Kaspaz bağımlı olmayan apoptotik sinyal yolu esas olarak AIF ve EnDOG'un salınması yoluyla sağlanır, bunların her ikisi de büyük miktarlarda DNA parçalanmasına neden olabilir ve hücre apoptozunu indükleyebilir. Deneysel doğrulama yoluyla, HUVEC hücrelerine J8 (2,5 μg/mL) eklendikten sonra VEGF, JNK ve diğer proteinlerin ifadesinin önemli ölçüde aşağı regüle edildiği, apoptozla ilgili proteinler p-JNK, Bax ve EnDOG'un ifadesinin ise önemli ölçüde yukarı regüle edildiği bulunmuştur. J8'in Kaspaz-3, Kaspaz-8 ve Kaspaz-9 ekspresyon seviyeleri üzerinde önemli bir etkisi yoktu ve stresle aktive olan bir protein kinaz olan JNK'nın fosforilasyonunu teşvik edebilirdi. Aktive edilen JNK yolu apoptozla ilgili hedef genlerin ekspresyonunu düzenleyebilir ve böylece hücre apoptozunu indükleyebilir. Bax ve EnDOG, JNK yolunun aşağı akış hedef genleridir. J8 ile muamele edildikten sonra, ifade seviyeleri de artar, bu da J8'in VEGF/JNK yolunun aktivitesini zayıflatarak hücre ölümüne neden olabileceğini düşündürür. Bu çalışmanın sonuçları, J8'in JNK sinyal yolunu düzenleyerek vasküler endotelyal hücrelerin apoptozunu teşvik edebileceğini, diğer bilim adamları tarafından gelecekteki araştırmalar için fikirler sağlayabileceğini ve tümör anjiyogenez tedavisini inhibe etmek için yeni araştırma ilaçları sunabileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, bu çalışmanın da bazı eksiklikleri vardır ve gelecekteki araştırmalarda JNK sinyal yolunun yukarı ve aşağı yönündeki proteinlerin kapsamlı bir şekilde tespit edilmesi gerekmektedir. In vitro hücre deneylerinde bazı sapmalar olabilir ve deneysel sonuçların klinik ve hayvan deneylerinde doğrulanması gerekir.
Özetle, J8 VEGF üzerinde etkili olarak hücre proliferasyonunu inhibe edebilirken, JNK sinyal yolunu düzenleyerek vasküler endotelyal hücrelerin apoptozunu teşvik eder ve apoptoz oranı artan konsantrasyonla önemli ölçüde artar.