Ebegümeci yapraklarında etil asetatın antioksidan ve anti-inflamatuar etkileri üzerine çalışma ve UPLC-Q-Orbitrap HRMS analizi
Hibiscus mutabilis yaprakları, Malvaceae familyasından bir bitki olan Hibiscus mutabilis L.'nin kurutulmuş yapraklarıdır. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısına dahil edilmiştir ve çoğunlukla Sichuan, Hunan, Guangdong, Yunnan ve Çin'in diğer bölgelerinde üretilmektedir. Qi hafiftir, tadı keskin ve düzdür ve kanı soğutma, detoksifikasyon, şişliği azaltma ve ağrıyı hafifletme etkilerine sahiptir. "Shennong Bencao Jing" kayıtlarına göre: "Yaz sonu ve sonbahar başı qi'si ile keskin bir tada sahiptir ve akciğerleri temizleyebilen Jin Hua kategorisine aittir. Qi'si sakin ve serindir, kanı soğutabilir, ısıyı dağıtabilir, detoks yapabilir ve her türlü karbonkül, şişlik, toksin ve ülseri tedavi edebilir, ayrıca irin ve ağrıyı ve çocukların yetersiz beslenmesini hafifletebilir." Modern farmakolojik araştırmalar, Mufu Rong Ye'nin iyi antibakteriyel, anti enfektif ve antiviral etkilere sahip olduğunu ve renal iskemi-reperfüzyon hasarı ve kronik karaciğer hasarı üzerinde koruyucu bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. Hibiskus yapraklarındaki ana kimyasal bileşenler arasında flavonoidler, organik asitler, fenoller, amino asitler, tanenler, şekerler, steroidler ve uçucu yağlar bulunur.
Araştırma ekibi, hibiskus yapraklarının etil asetat fraksiyonunun DPPH ve ABTS serbest radikallerine karşı süpürme oranlarına dayanarak iyi antioksidan aktiviteye sahip olduğunu önceden belirlemiştir. Flavonoidler hibiskus yapraklarının farmakolojik maddelerinden biri olabilir. Bununla birlikte, in vitro kimyasal yöntemler organizmalardaki aktif maddelerin gerçek rolünü tam olarak yansıtamaz. Bu nedenle, bu çalışmada HaCaT hücrelerinde H2O2 kaynaklı oksidatif stres hasar modeli oluşturulmuş, reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimi ölçülmüş, Hibiscus yapraklarının farklı polar kısımlarının HaCaT hücrelerinde oksidatif stres hasarı üzerindeki koruyucu etkisi araştırılmış, LPS kaynaklı RAW 264.7 hücre inflamasyon modeli oluşturulmuş, etil asetat kısmı tarafından hücre inflamatuar faktör ekspresyonunun inhibisyon derecesi ölçülmüş ve ayrıca hücresel düzeyde antioksidan ve anti-inflamatuar etkileri incelenmiştir. UPLC-Q-Orbitrap HRMS teknolojisine dayanarak, Hibiscus yapraklarının etil asetat kısmının kimyasal bileşimi tanımlanmış ve aktif kısımların hassas analizi, etil asetat kısmının ana bileşenlerinin flavonoidler ve bunların glikozitleri olduğunu ortaya koymuştur. Bu çalışma, Hibiskus yapraklarının farmakolojik madde temelini kapsamlı bir şekilde açıklamayı amaçlamaktadır. Geliştirilmesi ve kullanımı için bilimsel temel sağlamak.

ROS hücresel oksidatif metabolizmanın bir ürünüdür ve aşırı artışı veya sürekli varlığı hücresel oksidatif hasara neden olabilir. H2O2 aşırı ROS üretimini indükleyebilir, bu da onu oksidatif stres hasarı modellerinde ideal bir indükleyici yapar. HaCaT hücrelerinin elde edilmesi kolay, uyarlanabilir ve stabildir. HaCaT hücre oksidatif stres hasarı modellerini indüklemek için H2O2 kullanımı, antioksidan aktiviteyi değerlendirmek için yaygın bir hücre modelidir. TNF - α, IL-6, iNOS ve COX-2 tipik enflamatuar faktörlerdir, LPS yaygın bir pro-enflamatuar faktördür ve makrofajlar enflamatuar yanıtta önemli katılımcılardır ve enflamasyon sırasında çeşitli immünopatolojik süreçlerin gelişmesine aracılık ederler. RAW 264.7 hücrelerini indüklemek için LPS kullanımı, enflamatuar faktörleri incelemek için klasik bir hücre modelidir. Günümüzde bu iki yöntem, yayınlanmış grup standartlarında kozmetiklerin kırışıklık karşıtı ve yatıştırıcı etkileri için isimlendirilmesini destekleyen kanıtlar olarak kabul edilmiştir. Bu çalışmada HaCaT hücre oksidatif hasar modeli oluşturulmuş ve hibiskus yapraklarının farklı polar kısımlarındaki etil asetat fraksiyonunun güçlü antioksidan aktiviteye sahip olduğu bulunmuştur. 25-200 μg/mL konsantrasyon aralığında, ebegümeci yapraklarındaki etil asetat fraksiyonu ROS (P<0.001) içeriğini önemli ölçüde azaltmış, oksidatif stresi hafifletmiş ve hücre oksidatif hasar modeli üzerinde iyi bir koruyucu etkiye sahip olmuştur; Hibiscus syringae yapraklarından elde edilen etil asetat ekstraktının anti-enflamatuar etkisinin daha fazla araştırılması yapılmış ve bir RAW264.7 hücre enflamasyon modeli oluşturulmuştur. Etil asetat ekstresi konsantrasyonu 200 μg/mL olduğunda, RAW 264.7 hücrelerinde TNF - α, IL-6, iNOS ve COX-2 mRNA ekspresyonunu önemli ölçüde inhibe ederek (P<0.001) iyi bir anti-inflamatuar aktivite göstermiştir. Bu da Hibiscus syringae yapraklarının antioksidan ve anti-inflamatuar aktif bölgelerini daha da aydınlatarak farmakolojik aktivite ve kozmetik uygulama geliştirme üzerine daha fazla araştırma için teorik bir temel sağlamıştır.

Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi kuadrupol elektrostatik alan orbital tuzak yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi teknolojisi, geleneksel Çin tıbbındaki karmaşık çok bileşenli sistemlerin analizi için uygundur ve yüksek çözünürlük, yüksek kalite doğruluğu ve yüksek tespit verimliliği özelliklerine sahiptir. Bu çalışmada ilk kez UPLC-Q-Orbitrap HRMS teknolojisi kullanılarak ebegümeci yapraklarındaki etil asetatın etkili kısımlarındaki karmaşık bileşenler kapsamlı bir şekilde kalitatif olarak analiz edilmiştir. Başta rutin, naringin, isoquercitrin olmak üzere 10 flavonoid dahil 28 kimyasal bileşen tanımlanmıştır; Başta ferulik asit, kafeik asit, salisilik asit vb. olmak üzere 9 organik asit bileşeni vardır; Ayrıca kumarinler, fenoller, nükleositler, her biri 2 ve ebegümeci yapraklarının flavonoidler ve fenolik asitler açısından zengin olduğu raporlarıyla tutarlı olan diğer 3 bileşen vardır. Flavonoidler, hidrojen donörü olarak hareket edebilen fenolik hidrojen molekülleri içerir ve bu da onları mükemmel anti-enflamatuar aktiviteye sahip güçlü antioksidanlar haline getirir. Rutin, Parkinson hastalığı (PD) modellerinde katalaz (CAT) ve süperoksit dismutaz (SOD) aktivitesini artırabilir; Gümüş ıhlamur prostaglandin E2 (PGE2) üretimini ve NF - κ B ve MAPK sinyal yollarının aktivasyonunu inhibe edebilir; Quercetin, SOD ve CAT gibi enzimlerin yanı sıra glutatyon (GSH) gibi enzimatik olmayan antioksidan savunma sistemlerini yukarı doğru düzenleyerek ROS aracılı karaciğer kanserini inhibe edebilir; Isoquercetin, SOD'yi artırabilir ve MDA seviyelerini düşürebilir, MEK / ERK sinyal yolunu inhibe edebilir ve oksidatif stres yanıtını baskılayabilir. Azelaik asit hariç, tüm organik asit bileşenleri fenolik asitlerdir. Çok sayıda çalışma, fenolik asitlerin moleküler yapılarındaki polifenolik hidroksil grupları nedeniyle güçlü indirgeyici özelliklere sahip olduğunu göstermiştir, bu da onları serbest radikal süpürücü etkilere sahip tipik bir bileşik sınıfı haline getirmektedir. Örneğin, ferulik asit fare serumunun antioksidan kapasitesini artırabilir ve antibiyotiklerin bağırsak metabolizması ve farelerde enflamatuar yanıt üzerindeki olumsuz etkilerini iyileştirebilir; Salisilik asit antioksidan enzim aktivitesinin iyileşmesini indükleyebilir ve reaktif oksijen türlerinin biyolojik oksidasyonunu hafifletebilir. Bu çalışma, bu iki tür bileşenin ebegümeci yapraklarının etil asetat kısmının ana kimyasal bileşenleri olduğunu bulmuş ve ebegümeci yapraklarının antioksidan ve anti-enflamatuar etkileri için farmakolojik madde temelinin esas olarak flavonoidler ve organik asitlerden oluştuğunu ortaya koymuştur. Çalışma aynı zamanda Hibiscus syringae yapraklarında daha önce rapor edilmemiş yeni bir flavonoid bileşen olan trifoliat glukozit, iki yeni fenolik bileşen olan 4-nitrofenol ve 4-nitrokateşol, bir yeni nükleozit bileşen olan adenin ve iki yeni aldehit bileşen olan 2,5-dihidroksibenzaldehit ve vanilin keşfederek Hibiscus syringae yapraklarının kimyasal bileşim kütüphanesini zenginleştirmiştir.

Özetle, Hibiscus syringae yapraklarından elde edilen etil asetat ekstresi, hücresel oksidatif hasarı büyük ölçüde hafifletebilir, oksidatif stres tepkisine direnebilir ve enflamatuar faktörlerin ekspresyonunu engelleyebilir. Flavonoidler ve organik asitler, farmakolojik maddelerinin temeli olabilir ve Hibiscus syringae yapraklarının antioksidan ve anti-enflamatuar mekanizmaları ve doğal ürünlerin geliştirilmesi ve kullanımı üzerine daha fazla araştırma için teorik bir temel sağlar.