Идентификация фенилэтаноловых гликозидов из вонючего пиона и изучение механизма их действия in vitro против клеток аденокарциномы легких человека A549
Рак легких - это злокачественная опухоль, возникающая в слизистой оболочке бронхов и железах. По данным Национального онкологического центра, в 2022 году уровень заболеваемости раком легких в Китае составит 10,6%, а уровень смертности - 24%, занимая первое место по уровню смертности от злокачественных опухолей в Китае, причем доля пациентов женского пола будет увеличиваться год от года и, как правило, моложе. Традиционная китайская медицина, благодаря своим многокомпонентным и многоцелевым преимуществам, может задерживать прогрессирование опухоли, повышать чувствительность опухолевых клеток к радиотерапии и химиотерапии, уменьшать количество послеоперационных инфекций и минимизировать побочные реакции, вызванные радиотерапией и химиотерапией через различные пути, тем самым достигая цели предотвращения и лечения рецидивов и метастазов опухоли, а также долгосрочной стабильной опухоли. Вонючий пион - эффективное средство традиционной китайской медицины, открытое в народной медицине провинции Хунань для лечения злокачественных опухолей и отобранное в результате более чем 40-летней многократной клинической и научно-исследовательской практики. Вонючий пион обладает мягким характером, резким и горьким вкусом, а также эффектами "рассеивания ветра и сырости, детоксикации и рассеивания застоя крови, уменьшения отеков и боли". Он широко используется при лечении различных опухолей в регионе Хунань, особенно рака легких. Однако эффективные ингредиенты и механизмы действия вонючего пиона в противоопухолевой терапии пока не ясны. В ходе предварительных экспериментов исследовательской группы было установлено, что Paeonia lactiflora богата фенилэтаноловыми гликозидами и обладает хорошей противоопухолевой активностью. В данном исследовании мы продолжим идентификацию фенилэтаноловых гликозидов в Paeonia lactiflora и изучим их механизм ингибирования пролиферации клеток A549 in vitro, чтобы продолжить изучение противоопухолевого эффекта и механизма фенилэтаноловых гликозидов Paeonia lactiflora и заложить основу для разработки эффективных и низкотоксичных препаратов традиционной китайской медицины.

Рак легких - это злокачественная опухоль, возникающая в слизистой оболочке бронхов и железах, относящаяся к категориям "скопление в легких" и "камень в легких" в традиционной китайской медицине. Современные медики считают, что постоянный рост заболеваемости раком легких связан с загрязнением окружающей среды или длительным курением, что приводит к накоплению токсичных патогенов в легких. Движение ци в легких нарушается, и сочетание токсинов с ци и кровью со временем приводит к их накоплению в легких. Самый основной патологический механизм - это объединение ракового токсина, мокроты и застоя крови, при этом основными патологическими изменениями являются сочетание недостатка и избытка. Опираясь на опыт профессора Оуян Ци, известного врача традиционной китайской медицины и наследника школы различных заболеваний Ху Сян Оуяна, в лечении рака легких и профилактике послеоперационных рецидивов, Мы считаем, что этиология и патогенез рака легких обусловлены вторжением патогенных токсинов, недостаточной положительной ци, приводящей к потере функции легких, накоплению флегмы и застою крови с течением времени, что приводит к дефициту ци и крови инь и ян в организме, в конечном итоге приводя к возникновению рака легких. Основной патогенез рака легких характеризуется накоплением патогенных факторов, таких как патогенные факторы, флегма, коагуляция и токсины, а также застоем ци и застоем крови. Принцип лечения заключается в детоксикации и устранении застоя крови, устранении флегмы и рассеивании узлов. Вонючий пион - это стебель и листья Clerodendrum bungei Steud, растения семейства Verbenaceae. Он широко распространен в Китае и обладает богатыми лекарственными ресурсами. Его природа спокойная, с резким и горьким вкусом. В древней литературе говорится, что он обладает функциями "рассеивания ветра и сырости, детоксикации и рассеивания застоя крови, уменьшения отеков и снятия боли", что соответствует принципу лечения рака легких "детоксикация и устранение застоя крови, устранение мокроты и рассеивание узлов". Исследования показали, что и соединение пиона вонючего, и его экстракт обладают хорошей противоопухолевой активностью, особенно лучшей противоопухолевой активностью в отношении рака легких. В ходе предварительных исследований исследовательская группа провела многочисленные анализы качества отвара и различных экстрагированных компонентов пиона вонючего, и обнаружила, что основными компонентами пиона вонючего являются фенилэтаноловые гликозиды, среди которых основными компонентами являются гликозиды, подобные листьям, и гетерогенные гликозиды, подобные листьям. После экспериментальной проверки и демонстрации было установлено, что фенилэтаноловые гликозиды пиона вонючего обладают хорошим противоопухолевым действием. Поэтому можно предположить, что фенилэтаноловые гликозиды, состоящие в основном из листоподобных и гетерогенных листоподобных гликозидов, могут быть основными компонентами противоопухолевого действия пиона вонючего.

EphA2 - главный член семейства Eph, крупнейшего подсемейства рецепторных тирозинкиназ (RKTs), сверхэкспрессируется в различных злокачественных опухолях, особенно в опухолях с высокой степенью злокачественности и сильной способностью к инвазии и метастазированию, и участвует в инвазии и метастазировании рака легкого. Исследования показали, что рецепторы EphA2 значительно экспрессируются у больных раком легкого и клеточных линий рака легкого, и чем выше уровень экспрессии, тем хуже прогноз для пациентов. В ткани рака легкого наблюдалась мутация фосфорилированного EphA2 S897 в эпидермальном факторе роста (EGFR), а на клеточной мембране была обнаружена делеция экзона 19. EphA2 оказывает биологические эффекты в двух формах: лиганд-зависимой и лиганд-независимой. С одной стороны, когда лиганд EphrinA1 связывается с рецептором EphA2, EphA2 подвергается интернализации и затем деградирует путем убиквитинирования; в то же время EphA2 активируется тирозинкиназой для фосфорилирования, а участок EphA2 S897 дефосфорилируется, тем самым ингибируя такие сигнальные пути, как PI3K/ATK и Ras/MAPK, оказывая лиганд-зависимый противоопухолевый эффект. С другой стороны, при низкой экспрессии лиганда EphrinA1 и высокой экспрессии EphA2, EphA2 фосфорилируется и активируется через сайт S897, в то время как его уровень фосфорилирования тирозина снижается, тем самым активируя сигнальные пути PI3K/ATK/mTOR и Pyk2/c-Src, оказывая лиганд-независимый противоопухолевый эффект. Нелигандзависимый EphA2-сигналинг может способствовать пролиферации и метастазированию опухоли, повышать ее лекарственную устойчивость и поддерживать характеристики стволовых клеток опухоли. Как видно, EphA2 обладает двойной активностью - лиганд-активируемой противораковой и нелиганд-активируемой противораковой, а дефосфорилирование или фосфорилирование участка EphA2 S897 является переключателем, контролирующим два противоположных биологических эффекта. Дефосфорилирование EphA2 S897 связано с лигандом EphrinA1, а фосфорилирование на EphA2 S897 связано с ATK, который является самым ранним и признанным важным фактором. Фосфорилирование ATK является важным фактором, способствующим миграции и инвазии клеток, в то время как связывание лиганда EphrinA1 с EphrinA1 ингибирует активацию ATK и подавляет миграцию опухолевых клеток. Имеются данные о том, что EphA2 является как негативным регулятором, так и эффектором нисходящего потока АТК. Активация пути PI3K/ATK/mTOR в сочетании с отсутствием лиганда EphrinA1s приводит к превращению EphA2 из опухолевого супрессора в проопухолевый фактор, который фосфорилируется ATK и способствует развитию злокачественной опухоли. По имеющимся данным, EphA2 способствует прогрессированию EMT в клетках рака желудка через Wnt - β - катениновый путь.

Предыдущие исследования исследовательской группы показали, что экстракт пиона вонючего может значительно снизить экспрессию факторов EMT, связанных с Vimentin, Slug, Snail, Twist и Cmyc в раке легкого, и подавить процесс EMT рака легкого путем регулирования Wnt - β - катенинового пути. В этом исследовании мы обнаружили, что экстракты фенилэтаноловых гликозидов Paeonia lactiflora могут значительно подавлять пролиферацию, миграцию и инвазию клеток A549, а также подавлять экспрессию белков EphA2, mTOR, p-mTOR, β - катенина, GSK-3 β, P-GSK-3 β и P-ATK. Среди них особенно значима редукция P-ATK, а редукция белка EphA2 может также повышать экспрессию EphrinA1. Фенилэтаноловый гликозидный экстракт пиона вонючего может индуцировать связывание EphA2 с лигандом EphrinA1, стимулировать лиганд EphrinA1-зависимый противораковый путь и оказывать противоопухолевое действие путем ингибирования EphA2, P-ATK, mTOR и других факторов, блокируя сигнальный путь EphA2/ATK/mTOR. Увеличение P-EphA2 связано с лигандной зависимостью. Хотя участок S897 на EphA2 подвергается дефосфорилированию, тирозинкиназа EphA2 активируется фосфорилированием, поэтому общий уровень P-EphA2 может повышаться. Но механизм противоопухолевого действия очень сложен, и судьба опухолевых клеток не определяется каким-то одним путем. Данное исследование дает экспериментальные данные для определения молекулярного механизма противоопухолевого действия пиона вонючего и разработки высокоэффективных и малотоксичных экстрактов традиционной китайской медицины, направленных на мишени EphA2.