Исследование оценки качества вербены и закона передачи стандартной дозировки отвара на основе карты характеристик UPLC и метода множественной оценки одного теста
Вербена лекарственная - сухая надземная часть растения Verbena officinalis L. из семейства Вербеновые (Verbenaceae), впервые была зарегистрирована в "Каталоге знаменитых врачей" и отнесена к низшему сорту. Химические компоненты вербены представлены в основном иридоидными гликозидами, флавоноидами, стеринами, тритерпенами, полифенолами, летучими маслами, дубильными веществами, бета-каротином, кофейной кислотой, сахарами и др. Основными действующими веществами являются иридоидные гликозиды. Обладает прохладным характером, горьким вкусом, относится к меридианам печени и селезенки. Оказывает следующие действия: стимулирует кровообращение, устраняет застой крови, выводит токсины, способствует диурезу, уменьшает желтуху и препятствует малярии. В клинической практике используется для устранения таких симптомов, как дисменорея, аменорея, фарингит, абсцесс, отек, желтуха и малярия. Ресурсы вербены богаты, среди которых иридоидные гликозиды обладают различными эффектами, такими как антиоксидантный, гепатопротекторный, нейропротекторный, защищающий сердце и мозг от ишемии, противовоспалительный и т.д. Отвары китайских трав (стандартные отвары) являются наиболее часто используемыми в клинической практике комбинированными препаратами традиционной китайской медицины, а также самыми длительными и широко используемыми препаратами в истории китайской медицины. Будь то отвары традиционной китайской медицины, отвары ломаной стены, гранулы формулы традиционной китайской медицины и другие отвары новой китайской медицины, все они принимаются в виде отвара или водного промывания. Поэтому очень важно использовать стандартные исследования отваров в качестве предпочтительного контроля для изучения других препаратов китайской медицины. В данном исследовании выясняется закон количественного перехода от отваров к стандартным отварам, что закладывает основу для исследования и оценки качества препаратов традиционной китайской медицины из вербены.
Данное исследование посвящено получению вербаскозида, 5-гидроксивербаскозида и вербаскозида в ломтиках вербаскозида, а также составлению карты их характеристик методом UPLC. Информация карты анализируется с помощью анализа химического режима, и содержание вербаскозида, 5-гидроксивербаскозида и вербаскозида в вербаскозиде одновременно определяется с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с методом многократной оценки одного теста. Полученные результаты сравнивают с результатами, полученными методом внешнего стандарта. А также измеряют выход стандартного отвара, содержание вербаскозида, 5-гидроксивербаскозида и вербаскозида, рассчитывают коэффициент перевода и на основании этого проводят исследование перевода отвара вербаскозида в стандартный отвар, чтобы продемонстрировать рациональность различных показателей качества.

Изократическое элюирование характерного спектра образца вербены не позволяет достичь базового разделения, поэтому использовалось градиентное элюирование. В предварительных экспериментах в данном исследовании сравнивались такие подвижные фазы, как вода с метанолом, вода с ацетонитрилом, ацетонитрил-0,1% раствор фосфорной кислоты и ацетонитрил-0,05% раствор фосфорной кислоты. Наконец, в качестве подвижной фазы был выбран ацетонитрил-0,05% раствор фосфорной кислоты. При указанных выше условиях хроматографического анализа хроматографическое разделение пиков, теоретическое число пластин и параметры формы пиков были хорошими. В данном исследовании использовалась однофакторная экспериментальная система для изучения влияния экстракционного растворителя, метода и времени экстракции, а также соотношения твердой и жидкой фаз на эффективность экстракции. Результаты показали, что эффективность экстракции была наиболее высокой, когда растворителем для экстракции служил метанол 80% , соотношение твердого вещества и жидкости составляло 1:50 (г/мл), а экстракция проводилась под рефлюксом в течение 120 минут. Таким образом, вышеуказанный метод был использован в качестве метода экстракции кусочков вербены.
Общий контроль качества многоиндексных компонентов в традиционной китайской медицине стал неизбежной тенденцией в развитии контроля качества традиционной китайской медицины. Спектр характеристик/отпечатков пальцев является эффективным методом оценки качества, а сочетание его с методом анализа одного теста с несколькими оценками позволяет достичь целостности и точности оценки качества. В данном исследовании была составлена карта характеристик UPLC кусочков отвара вербаскозида, определены 5 общих пиков и идентифицированы 3 компонента. Время анализа значительно сократилось по сравнению с ВЭЖХ, а хроматографические условия можно было использовать для определения содержания 5-гидроксивербаскозида, вербаскозида и вербаскозида. Анализ главных компонент проводился по площади характерных пиков, а модель комплексной оценки главных компонент позволила еще больше улучшить метод оценки качества и анализа вербены.

Показателем определения содержания вербены в Китайской фармакопее 2020 года является общее количество олеаноловой кислоты и урсоловой кислоты, которые являются тритерпеноидами с низкой полярностью и низкой растворимостью в воде. Предварительные результаты экспериментальных исследований показывают, что общее содержание олеаноловой и урсоловой кислот в стандартном отваре вербены составляет менее 2,0 мг/г, а скорость переноса - менее 6%. Поэтому на основе карты признаков был разработан метод мультиоценки для определения содержания 5-гидрокси-вербаскозида, вербаскозида и вербаскозида. Полярные компоненты вербены представлены в основном циклогексеновыми эфирными терпенами, среди которых вербаскозид и 5-гидроксивербаскозид являются основными компонентами с самым высоким содержанием, а стандартный отвар имеет более высокую скорость переноса. Скорость переноса в некоторых партиях превышает 100%, а общий диапазон переноса 5-гидроксивербаскозида и вербаскозида составляет от 56,6% до 91,2%. Возможная причина заключается в том, что подобные компоненты подвергаются структурной трансформации при нагревании, кипячении и других процессах. Существуют различия в содержании и скорости передачи вербаскозида, 5-гидроксивербаскозида и вербаскозида между 18 партиями стандартного отвара вербаскозида, что может быть связано с содержанием и текстурой частей отвара. Некоторые отвары имеют более светлый цвет, более длительное время хранения и большее количество мусора при обработке, что может быть причиной больших колебаний в их содержании и скорости передачи. Три выбранных ингредиента имеют высокое содержание в вербене и обладают хорошей фармакологической активностью в антиоксидантном, гепатопротекторном, нейропротекторном, защитном от ишемии сердца и мозга, противовоспалительном и других аспектах. Они являются одной из главных материальных основ для оказания фармакологических эффектов вербены.

Результаты метода множественной оценки одного теста не показали значительных различий по сравнению с методом внешнего стандарта и могут быть использованы для количественного анализа нескольких компонентов в вербене. Карта характеристик UPLC в сочетании с методом множественной оценки одного измерения многокомпонентных показателей может служить основой для исследования и оценки качества производственного процесса вербены и китайских травяных препаратов из вербены.