Анализ многомерных активных компонентов в различных частях трехлистной лозы Cliff Climbing Vine с использованием технологии UFLC-QTRAP-MS/MS
Сань Е Цин - это корень или целое растение Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg (THDG) из семейства виноградных. Он имеет долгую историю использования в медицине и является одним из "Новых восьми ароматов Чжэцзяна". Он обладает эффектами очищения от жара и детоксикации, способствует циркуляции крови и рассеивает ветер. В основном его используют при судорогах, высокой температуре, пневмонии, астме, гепатите, ревматизме, золотухе и травмах, полученных при падении. Современные фармакологические исследования показали, что Сань Е Цин обладает такими фармакологическими эффектами, как противоопухолевый, антиоксидантный, противовоспалительный, антибактериальный, жаропонижающий, обезболивающий и регулирующий иммунитет.
Трехлистная скалолазная лоза растет в основном в южном регионе реки Янцзы и имеет долгую историю использования в народной медицине Чжэцзяна. Можно использовать как все растение, так и корень. В последние годы исследования выявили значительные различия в химическом составе и фармакологической активности различных лекарственных частей растения. Например, антиоксидантная активность надземного экстракта значительно выше, чем подземного, а активность подземного экстракта по выведению гидроксильных радикалов значительно выше, чем у надземного экстракта. В связи с тем, что в настоящее время Сань Е Цин включен только в местные стандарты и спецификации традиционной китайской медицины, его индикаторные компоненты четко не определены. В последние годы исследования показали, что помимо флавоноидов, фенольных кислот, полифенолов, полисахаридов и других активных компонентов San Ye Qing, дубильные вещества, аминокислоты и нуклеозиды также обладают потенциальной физиологической активностью. Среди них дубильные компоненты, такие как антоцианы B2, оказывают ингибирующее воздействие на рак желудка, аминокислотные компоненты оказывают хорошее терапевтическое воздействие на повреждения печени, а нуклеозидные компоненты обладают хорошим антибактериальным и противовирусным действием. В настоящее время исследования активных ингредиентов различных частей Three Leaf Cliff Climbing Vine в основном сосредоточены на общих флавоноидах, общих фенольных кислотах и общих полисахаридах, при этом одновременное определение содержания нескольких категорий активных ингредиентов практически не проводится. Методы анализа для оценки и контроля качества различных частей в основном включают высокоэффективную жидкостную хроматографию, газовую хроматографию-масс-спектрометрию и технологию жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии. Поэтому для получения справочных данных для контроля качества и рационального использования ресурсов различных частей лозы трехлистной скалолазной необходимо разработать экспресс-метод определения содержания активных ингредиентов в различных частях и проведения оценки качества.
Технология сверхбыстрой высокоэффективной жидкостной хроматографии с тройной квадрупольной линейной ионной ловушкой (UFLC-QTRAP-MS/MS) обладает высокой степенью разделения, высокой селективностью и высокой чувствительностью, позволяет быстро разделять и идентифицировать смешанные соединения. Она подходит для разделения и анализа многокомпонентных сложных систем Trifolium repens. Поэтому в данном исследовании в качестве экспериментальных объектов использовались корни, стебли и листья трехлистной скалолазной лозы, и одновременно определялись 60 активных ингредиентов с помощью технологии UFLC-QTRAP-MS/MS. Многомерные методы статистического анализа, такие как анализ главных компонент (PCA), регрессионный анализ частичных наименьших квадратов (PLS-DA) и дисперсионный анализ, были использованы для выявления различий в активных ингредиентах между различными частями, а серый реляционный анализ (GRA) был применен для оценки качества различных частей. Результаты данного исследования могут послужить методологической основой для быстрого количественного определения и контроля качества различных активных ингредиентов в различных лекарственных частях трехлистной скалолазной лозы, а также заложить основу для рационального развития и использования ее ресурсов.

Результаты исследования показывают, что существуют значительные различия в качестве корней, стеблей и листьев Three Leaf Cliff Climbing Vine, а также значительные различия в содержании некоторых компонентов. Восемь соединений были выбраны с помощью PLS-DA, VIP-значения и дисперсионного анализа в качестве маркеров активных ингредиентов для различения различных частей. Среди них витексин, изовитексин, паэонифлорин и изопаэонифлорин показали тенденцию к увеличению или уменьшению содержания в листьях, стеблях и клубнях, и все они являлись флавоноидными углеродными гликозидными соединениями. Благодаря сильной способности флавоноидных углеродных гликозидов к поглощению радикалов DPPH, результаты этого эксперимента также могут служить основанием для вывода о том, что антиоксидантная активность надземной части Three Leaf Cliff Climbing Vine выше, чем подземной части. Кроме того, содержание проантоцианидина B2 в стеблях достигает 5029,22 мк г/г, что в 4 и 15 раз выше, чем в корнях и листьях, соответственно. Он также обладает значительной антиоксидантной и противоопухолевой активностью, что указывает на то, что проантоцианидиновые компоненты могут играть важную роль в метаболической деятельности в различных частях растения. Значение относительной корреляции (ri) в сером реляционном анализе может быть использовано для ранжирования качества образцов корней, стеблей и листьев. Результаты показывают, что образцы листьев (S7-S12) занимают более высокое место, что указывает на их более высокое качество по сравнению с образцами стеблей и корней.

Таким образом, в данном исследовании был разработан метод сверхбыстрой высокоэффективной жидкостной хроматографии с тройной квадрупольной линейной ионной ловушкой (UFLC-QTRAP-MS/MS) для одновременного определения 60 активных ингредиентов в различных частях Three Leaf Cliff Climbing Vine, а также проведено сравнение и оценка различных частей с помощью многомерного статистического анализа. Результаты определения содержания показывают, что в различных частях имеется большое количество активных ингредиентов, среди которых общее содержание нескольких активных ингредиентов в листьях выше, чем в стеблях и клубнях. Кроме того, многомерный статистический анализ, такой как анализ главных компонент, показал значительные различия в активных ингредиентах различных частей Three Leaf Cliff Climbing Vine, и выявил восемь значительно отличающихся компонентов, а именно витексин, изовитексин, икариин, изоикариин, проантоцианидин B2, тирозин, фенилаланин и лейцин. Анализ серой корреляции показывает, что качество листовых частей относительно выше, затем следуют стебли и клубни. Результаты данного исследования являются методологической основой для определения и контроля качества активных ингредиентов в различных частях трехлистной скалолазной лозы, а также закладывают основу для рационального развития и использования ее ресурсов.