Оптимизация процесса экстракции и очистки суммарных флавоноидов из листьев сафлора и изучение их активности против острого повреждения печени
Высушенный цветок растения Carthamus tinctorius L. из семейства Asteraceae - ценное традиционное китайское лекарственное растение и одно из наиболее широко используемых лекарственных растений в клинической практике монгольской медицины. Это прохладное по своей природе, слегка горьковатое на вкус лекарство оказывает питательное воздействие на меридианы сердца и печени. Это хорошее лекарство для улучшения циркуляции крови, устранения застоя крови и снятия боли. Традиционно использование и исследование растения сафлор было сосредоточено только на его лекарственных цветках. Однако урожайность цветков сафлора очень низкая, что приводит к тому, что большое количество листьев, образующихся после сбора его лекарственных частей - "цветков", - выбрасывается, что приводит к нерациональному использованию ресурсов. Ученые изучали химический состав надземных частей сафлора, но большинство из них сосредоточились на алкалоидах и терпенах. Однако сравнительно мало исследований посвящено флавоноидам, которые обладают фармакологической активностью, такой как антиоксидантная, противовирусная, гепатопротекторная, противораковая и противовоспалительная. Флавоноиды растительного происхождения также обладают естественными и малотоксичными свойствами и имеют широкие перспективы для разработки эффективных и безопасных натуральных лекарств, средств по уходу за кожей и товаров для здоровья. В настоящее время нет исследований, посвященных процессу экстракции и очистки, а также биологической активности флавоноидов из листьев сафлора. Проведенные исследования показали, что спиртовой экстракт стеблей сафлора оказывает значительное противодействие CCI4-индуцированному острому повреждению печени. Поэтому стоит изучить, обладает ли экстракт листьев сафлора также защитным действием на печень. Поэтому, с точки зрения полного использования нелекарственных ресурсов сафлора, в данном эксперименте оптимизирован процесс экстракции и очистки для получения общих флавоноидов из листьев Carthamus tinctorius L., TFCTLL)， и дальнейшего изучения его гепатопротекторного эффекта, обеспечивая поддержку данных для полного использования нелекарственных ресурсов частей сафлора и исследования его фармакологической активности.

 

В данном исследовании впервые в качестве экспериментального материала использовались отходы листьев сафлора, а общие флавоноиды были извлечены из листьев сафлора методом нагревания на рефлюксе. На основе однофакторных экспериментов был разработан тест поверхности отклика Бокса-Бенкена для оптимизации оптимального процесса экстракции общих флавоноидов из листьев сафлора. Соотношение твердой и жидкой фаз было определено как 1:27, концентрация этанола - 80%, время экстракции - 65 минут. Фактическая скорость экстракции составила 4,921%, что на 0,014% меньше теоретического значения. Статистический анализ был проведен для результатов однофакторной модели и модели поверхности отклика, и было обнаружено, что между ними нет существенной разницы (P>0,05). Данная модель хорошо и стабильно предсказывает и может быть использована для экстракции общих флавоноидов из листьев сафлора. В связи с низкой степенью извлечения сырого экстракта, содержащего общие флавоноиды из листьев сафлора, полученного с помощью оптимального процесса экстракции, для последующих исследований активности требуется дальнейшее обогащение и очистка сырого экстракта.

Макропористая смола в последние годы широко используется для разделения и очистки натуральных продуктов, особенно для обогащения флавоноидов. Благодаря простоте эксплуатации, отсутствию загрязнения, низкому энергопотреблению и хорошему эффекту разделения, она широко используется в исследованиях по очистке флавоноидов. Большинство флавоноидов являются слабополярными, поэтому слабополярные и неполярные смолы оказывают лучшее очищающее действие на флавоноиды. Хоу и др. изучали обогащение и очистку общих флавоноидов в Artemisia annua с помощью макропористой адсорбционной смолы. Были проведены статические адсорбционные эксперименты для изучения адсорбционных и десорбционных способностей макропористых адсорбционных смол NKA-9, GPD100, HPD400, HPD600, AB-8, D101, X-5 и GM301 для общих флавоноидов. Результаты показали, что макропористая адсорбционная смола AB-8 обладает наилучшей адсорбционной и десорбционной способностью. В соответствующей литературе также сообщалось о четырех типах макропористых адсорбционных смол: HPD-100, HPD-600, D101 и HP-20, которые имеют значительные преимущества в адсорбции и растворении флавоноидов по сравнению с другими типами смол. Таким образом, в данном эксперименте для очистки ТФКТЛЛ были выбраны пять типов макропористых адсорбционных смол, пригодных для обогащения суммарных флавоноидов: AB-8, HPD-100, HPD-600, D101 и HP-20. После получения оптимального процесса очистки экстракт листьев сафлора, выделенный по оптимальному процессу, адсорбировали на предварительно обработанной макропористой смолой хроматографической колонке AB-8 и элюировали этанолом 95%. Общая чистота флавоноидов достигла 61,42%, элюент был собран и сконцентрирован в сухой экстракт. Обеспечивает основу для последующих исследований активности.

Соответствующие исследования показали, что спиртовые экстракты стеблей сафлора оказывают значительное противодействие острому повреждению печени, вызванному CCI4. Обладает ли экстракт листьев сафлора также защитным действием на печень? В этом исследовании в TFCTLL были обнаружены четыре флавоноида, включая вербаскозид, кверцетин-7-O - β - D-глюкозид, вербаскозид и витексин. Результаты соответствующих исследований показали, что он обладает специфическим противовоспалительным, антиоксидантным и антифибротическим действием, которое может снижать активность АЛТ и АСТ в сыворотке крови, подавлять уровень таких факторов воспаления, как TNF - α и IL-1 β, ингибировать активацию антиоксидантных ферментов и NF - κ B путь, и облегчить повреждение печени путем регулирования липидного обмена, антиоксидантной, противовоспалительной, снижение отложения железа, регулирования пролиферации опухолевых клеток, анти-апоптоз, содействие аутофагии, и другие пути. Его часто используют для лечения острых повреждений печени и сопутствующих заболеваний.

Острое повреждение печени - это внезапное аномальное функциональное заболевание печени, вызванное различными причинами в короткие сроки. Его клинический прогноз неблагоприятен, и если не принять активных мер и не начать лечение, то в дальнейшем оно может перерасти в цирроз и рак печени, угрожая жизни и здоровью человека. Существуют различные факторы, которые могут вызвать повреждение печени, включая химическое повреждение печени, бактериальное и вирусное биологическое повреждение печени. CCI4 является наиболее часто используемым гепатотоксином в экспериментальных исследованиях на животных, чтобы вызвать химическое повреждение печени, и одна доза CCI4 может подготовить повреждение клеток печени типа ALI. Он может вызвать повреждение структуры и функции клеток печени, что приводит к переполнению внутриклеточных АЛТ и АСТ в кровоток, в результате чего повышается активность АЛТ и АСТ в крови, которая положительно коррелирует со степенью повреждения печени. Поэтому активность АЛТ и АСТ часто используется в качестве индикаторов для оценки степени повреждения печени. Результаты эксперимента на животных в данном исследовании показали, что после внутрибрюшинного введения CCI4 активность АЛТ, АСТ и ТБА в сыворотке крови значительно повысилась, а в тканях печени возникли поражения, что свидетельствует об успешном создании мышиной модели острого повреждения печени, вызванного CCI4. После введения TFCTLL активность ALT, AST и TBA в сыворотке крови мышей значительно снизилась, а степень поражения тканей печени уменьшилась, что указывает на то, что TFCTLL оказывает защитное действие на CCI4-индуцированное острое повреждение печени у мышей.

Данное исследование начинается с перспективы использования лекарственных ресурсов сафлора, преобразования традиционных нелекарственных отходов и побочных продуктов в лекарственные средства, полного использования лекарственного сырья сафлора и изучения гепатопротекторного действия листьев сафлора. Полученные результаты свидетельствуют о том, что ТФКТЛЛ, полученный после экстракции и очистки, оказывает влияние на острое повреждение печени у мышей. Данное исследование может послужить основой для последующей разработки и применения ТФКТЛЛ, а также имеет большое значение для высокоэффективного использования ресурсов сафлора.