Идентификация Ficus microcarpa и родственных ему видов на основе последовательности ITS2 и ВЭЖХ-отпечатков пальцев
Фикус пандурата Ханса, также известный как молочное дерево или молочное семя, - это растение из рода Фикус семейства Морские (Moraceae). Оно распространено в основном в Гуандуне, Гуанси, Цзянси, Хайнане, Фуцзяне, Хунани, Хубэе, Цзянси, Аньхой, Чжэцзяне и других местах. Согласно "Словарю традиционной китайской медицины", "Лекарственным записям Фуцзяня" и "Испытанию формул народных трав Цзянси", корень и листья Ficus microcarpa используются в качестве лекарства. Он обладает мягким характером, сладким и слегка прохладным вкусом, нетоксичен. Он обладает эффектами очищения от жара, оживления селезенки, стимулирования аппетита, питания ци и выработки жидкостей, а также рассеивания сырости и застоя. Его используют для рассеивания ветра, сырости, детоксикации, лечения малярии и стимулирования лактации. Например, в "Испытании формул народных трав Цзянси" говорится, что умеренное количество корней Ficus microcarpa и малана может использоваться для лечения желтухи при приеме внутрь в отваре чистой воды; соответствующее количество корня баньяна, корня брахмы, Stephania tetrandra, корня Acanthopanax senticosus и стебля полыни может использоваться для лечения боли в поясничном отделе позвоночника в смеси с байцзюй и водой того же объема. В Гуандуне Ficus microcarpa имеет долгую историю употребления в пищу и медицины, а также глубокую массовую базу, которая стала важной частью местной характерной тонизирующей диеты и сырьем для диетической медицины. Современные исследования показали, что Ficus microcarpa содержит такие активные ингредиенты, как тритерпеноиды, флавоноиды, кумарины и фенольные кислоты. Среди них лактон бергамота обладает различными фармакологическими свойствами, такими как противоопухолевое действие, регуляция уровня сахара в крови, улучшение бессонницы, профилактика и лечение остеопороза, антивозрастное, противовоспалительное и противоаллергическое действие; псорален обладает такими фармакологическими свойствами, как противоостеопорозное, нейропротекторное, противоопухолевое, эстрогеноподобное, противовоспалительное и т.д. Оба вещества обладают противоостеопорозным действием, многочисленны и легко доступны, и являются представителями активных компонентов Ficus microcarpa.
В настоящее время на рынке представлено три основных вида смешанных продуктов из лекарственных растений Ficus microcarpa: Ficus microcarpa var. holophylla, Ficus microcarpa var. angustifolia и Ficus microcarpa var. hirta. Фикус Цинье (Quanyuan Qinye Ficus) и фикус Тяое (Tiaoye Ficus) - разновидности фикуса Цинье, с переходной формой листьев между тремя видами; кроме того, корни фикуса микрокарпа и фикуса микрокарпа используются в качестве лекарственного средства и обладают молочным ароматом. Они часто продаются на рынке под торговым названием "корни молочного дерева", что приводит к неравномерному качеству лекарственного сырья. В настоящее время современные исследования Ficus microcarpa в основном сосредоточены на фармакогнозии, химическом составе и фармакологической активности, и нет никаких отчетов о стандартах качества Ficus microcarpa. Идентификация по штрих-коду ДНК - это молекулярно-биологический метод идентификации, который использует стандартную, относительно короткую последовательность ДНК для определения вида. Этот метод имеет большое значение для содействия развитию и использованию новых ресурсов китайской медицины, облегчения нехватки талантов в области идентификации китайской медицины, управления оборотом на рынках китайской медицины и решения скрытых проблем семян, которые трудно преодолеть с помощью морфологии. ВЭЖХ-фингерпринт - это надежный метод идентификации подлинности, оценки постоянства качества и стабильности химических компонентов традиционной китайской медицины, полученных с помощью хроматографических методов, основанный на понимании общего действия групп веществ. В этом эксперименте последовательности ITS2 были использованы для молекулярной идентификации Ficus microcarpa и родственных ему видов. ВЭЖХ-спектры отпечатков пальцев были установлены для определения различий в содержании псоралена и бергамотового лактона, а также для идентификации Ficus microcarpa и родственных ему видов из разных мест происхождения. Это создает научную основу для контроля качества и оценки лекарственного сырья Ficus microcarpa.

В ходе эксперимента были проанализированы последовательность ITS2, генетическое расстояние K2P, кластерный анализ NJ-дерева и вторичная структура Ficus microcarpa и родственных ему видов. Анализ кластеризации деревьев NJ и вторичная структура позволяют эффективно различать Ficus microcarpa и родственные виды. Однако генетическое расстояние внутри и между видами K2P имеет определенные ограничения при идентификации Ficus microcarpa и родственных видов, и для идентификации требуется сочетание анализа кластеризации деревьев NJ и вторичной структуры.

В ходе эксперимента изучались такие условия хроматографирования, как различные экстракционные растворители, длина волны детекции, температура колонок, системы подвижной фазы и хроматографические колонки. Результаты показали, что при использовании экстракции этанолом 95%, хроматографической колонки XBridge Peptide BEH C18 (5 мкм, 4,6 мм × 250 мм), длины волны детектирования 330 нм, температуры колонки 30 ℃, скорости потока 1,0 мл/мин и подвижной фазы метанол-фосфатный буферный раствор pH8, формы пиков и степень разделения каждого цветового спектра были хорошими. Мы создали ВЭЖХ спектры отпечатков пальцев Ficus microcarpa и родственных ему видов, заполнив пробел в исследовании ВЭЖХ спектров характеристик Ficus microcarpa. Спектры отпечатков пальцев Ficus microcarpa и родственных видов демонстрируют значительные различия в количестве характерных пиков и относительном времени удерживания, что позволяет интуитивно отличить Ficus microcarpa от родственных видов и применить для оценки качества Ficus microcarpa. В общей сложности в Ficus microcarpa различного происхождения наблюдается 10 хроматографических пиков, большинство из которых не были обнаружены в Ficus microcarpa и Ficus microcarpa. Сходство между близкородственными видами и Ficus microcarpa составляет менее 0,807; Существует значительная разница в содержании псоралена и бергамотового лактона между Ficus microcarpa и близкородственными видами. Содержание псоралена и лактона бергамота в Ficus microcarpa и Ficus microcarpa значительно ниже, чем в Ficus microcarpa, что указывает на разницу в качестве Ficus microcarpa и родственных видов. Это имеет важное практическое значение для использования содержания псоралена и бергамотового лактона в качестве индикаторов контроля качества Ficus microcarpa. Таким образом, спектры отпечатков пальцев, сходство и определение содержания могут объективно и точно различать подлинность лекарственного сырья Ficus microcarpa, что может быть эффективно использовано для контроля качества и идентификации подлинности лекарственного сырья Ficus microcarpa.

Таким образом, были получены штрих-код ДНК и ВЭЖХ-отпечатки пальцев Ficus microcarpa и родственных ему видов. Метод прост, надежен, стабилен и обладает хорошей воспроизводимостью, что может быть использовано для исследования отпечатков пальцев и идентификации подлинности Ficus microcarpa и родственных видов. В то же время он обеспечивает научную основу для дальнейшего улучшения качества Ficus microcarpa.
В сети PPI на основе ранжирования по степени важности были отобраны 42 важные цели, которые в основном были разделены на 5 категорий: белковые тирозиновые фосфатазы (PTPN1, PTPN2, PTPN6, PTPN11 и др.), фосфатидилинозитол-3-киназы (PIK3R1, PIK3CB, PIK3CA и др.), митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK1, MAPK3, MAPK8, MAPK14 и др.), циклин-зависимые киназы (CDK1, CDK2, CDK4 и др.) и другие важные мишени (VEGFA, HSP90AA1, LCK и др.). Эти важные мишени могут послужить основой для таргетной терапии ЯК.