Создание карты отпечатков белков и молекулярное исследование по идентификации происхождения лекарственного сырья Bombyx mori
Bombyx Batryticatus - побочный продукт, образующийся при заражении (или искусственной инокуляции) личинок шелкопряда Beauveria bassiana (Bals.) Vuillart во время размножения, что приводит к их гибели. Он обладает эффектами облегчения ветра и спазмов, рассеивания ветра и боли, а также рассасывания мокроты и узлов. В связи с реализацией в Китае промышленной схемы "перемещения шелковицы с востока на запад" Сычуань и Юньнань стали основными провинциями в шелководстве, а значит, и основными районами производства лекарственного сырья для шелкопряда. Благодаря тому, что шелкопряды, производимые в Сычуани, имеют лучшие морфологические характеристики, чем шелкопряды, производимые в Юньнани, которые соответствуют стандартам высококачественного шелкопряда: "прямое и пухлое тело, твердая текстура, белый цвет и яркое поперечное сечение", как описано в предыдущих китайских сборниках трав и фармакопеях 63-го и 77-го изданий, их признание на рынке выше, и их продажные цены также выше. В ходе маркетинговых исследований было обнаружено, что торговцы часто намеренно путают происхождение этих двух продуктов для получения прибыли при продаже. Чтобы повысить безопасность и эффективность клинических препаратов, необходимо провести исследование метода определения происхождения шелкопряда.

Как известно, образование и накопление эффективных ингредиентов в китайских лекарственных материалах тесно связано с естественными условиями их произрастания. Поэтому происхождение является одним из важных факторов, влияющих на качество китайских лекарственных средств. Создание методов идентификации и отслеживания происхождения играет важную роль в удовлетворении потребностей потребителей в понимании информации о продукте, защите прав и интересов предприятий по производству, переработке и продаже, а также в повышении конкурентоспособности китайских лекарственных средств на международном рынке. Ляо Баошэн и другие предложили, чтобы идентификация происхождения и прослеживаемость китайских лекарственных средств осуществлялась на основе технологии молекулярной биологии, технологии отпечатков пальцев традиционной китайской медицины, технологии отслеживания изотопов, технологии беспроводной радиочастотной идентификации и технологии штрих-кодов. Электрофорез белка является стандартным методом идентификации сортов, принятым Международной ассоциацией инспекции семян, но этот метод все еще имеет недостатки, такие как низкое разрешение и сложность внутривидовой идентификации, что затрудняет его использование для идентификации происхождения и отслеживания традиционных китайских лекарственных материалов. В связи с этим в данной статье предполагается изучить возможность сочетания методов иерархического осаждения и электрофореза белков для создания технологии иерархических отпечатков пальцев, чтобы проанализировать различия в протеоме юньнаньского и сычуаньского шелкопрядов, определить полученные дифференциальные молекулы и провести биоинформатический анализ для выявления соответствующих молекул для идентификации происхождения, обеспечивая экспериментальную основу для создания простого, осуществимого и научно точного метода идентификации происхождения.

В данной статье были выделены кислоторастворимые, щелочерастворимые, водорастворимые и спирторастворимые белки из юньнаньского и сычуаньского шелкопрядов и изучены их спектры общего белка и спектры отпечатков градации. Результаты показали, что спектры отпечатков общего белка двух видов шелкопрядов очень похожи, что затрудняет их использование для идентификации происхождения; существует значительная разница в спектрах отпечатков градации между двумя видами шелкопрядов, которые, как ожидается, будут использоваться для идентификации происхождения; богатство информации, предоставляемой иерархическим спектром отпечатков, находится в порядке спирторастворимые белки>кислоторастворимые белки>водорастворимые белки>щелочерастворимые белки. На основе различий в иерархических картах отпечатков было обнаружено 273 характерных белковых молекулы, включая β-глюкозидазу, антихимотрипсин, антитрипсин и белки с липазным доменом. Эти молекулы обладают такими активностями, как трансфераза, каталаза и тиоредоксин пероксидаза, и участвуют в различных клеточных процессах, процессах метаболизма, ответах на стимулы, биологической регуляции и процессах развития. Они вовлекают такие пути, как синтез вторичных метаболитов, метаболизм микроорганизмов в различных средах, биосинтез антибиотиков и механизмы биологической защиты, отражая важное влияние различных факторов среды обитания на взаимодействие шелкопрядов с Beauveria bassiana и формирование Beauveria bassiana. Они имеют потенциальное значение для выявления происхождения Beauveria bassiana.
Аутентичные лекарственные травы являются уникальным комплексным критерием контроля качества лекарственных трав в традиционной китайской медицине, который глубоко отражает тесную взаимосвязь между качеством китайских лекарственных трав и местом их происхождения. Создание научного метода идентификации происхождения может оказать важную техническую поддержку в надзоре за рынком китайских лекарственных трав. Ян Цзянь, Чжан Хункун, Сун Цзюнь и другие провели исследования по идентификации происхождения Dendrobium officinale, Anemarrhena chinensis и Auricularia auricula на основе стабильных изотопов, отпечатков минеральных элементов и штрих-кодов ДНК, соответственно. Исследования в области молекулярной фармакогнозии показали, что влияние места происхождения на качество традиционной китайской медицины достигается за счет изменения факторов среды обитания, таких как температура, влажность и свет, которые влияют на экспрессию соответствующих генов. Белки являются продуктами экспрессии генов, и изменения факторов среды обитания неизбежно влияют на типы их экспрессии и количество. Поэтому стоит обратить внимание на перспективы их применения для идентификации происхождения. Результаты данного исследования показывают, что различные факторы среды обитания в Юньнани и Сычуани оказывают значительное влияние на экспрессию белков шелкопряда, произведенного в этих двух регионах, и соответствующие различия могут быть обнаружены с помощью иерархического дактилоскопирования. По сравнению с SDS-PAGE и двумерным гель-электрофорезом, технология иерархических отпечатков пальцев сначала обрабатывает образцы ацетоном, чтобы разложить их по степени гидрофобности, а затем сравнивает аналогичные образцы на одном и том же геле. Преимуществами этого метода являются простота работы, высокое разрешение, точность результатов и высокая воспроизводимость, что позволяет использовать его для идентификации происхождения других китайских лекарственных материалов. Кроме того, в спирторастворимых белках Bombyx mori нет молекул с высоким содержанием. При построении иерархического отпечатка пальца можно избежать взаимных помех и перекрытия полос, что обеспечивает более богатую информацию об отпечатке и лучшее разрешение по сравнению с другими типами белков. Приведенные выше результаты также дают идеи для выбора молекул, связанных с идентификацией происхождения других китайских лекарственных материалов.