Исследование оценки качества стандартного супа из корня баймао разного происхождения на основе UPLC-фингерпринта и многоиндексного количественного определения компонентов
Выбор показателей содержания. Стандартный отвар традиционной китайской медицины - это отвар из одной травы, приготовленный с использованием кусочков китайской травяной медицины в качестве сырья, с учетом традиционных привычек отвара китайской травяной медицины, с использованием воды в качестве растворителя и с применением стандартизированного режима отвара. В качестве стандартного вещества или системы стандартный отвар традиционной китайской медицины обычно используется для стандартизации клинического использования традиционной китайской медицины, стандартизации использования новых частей отвара традиционной китайской медицины, таких как гранулы формулы, и обеспечения точности клинического использования традиционной китайской медицины. Поэтому установление стандартов качества стандартных отваров традиционной китайской медицины может послужить важным ориентиром для установления стандартов качества современных рецептур китайской медицины, таких как соответствующие гранулы формул китайской медицины и классические формулы.
Корень растения семейства Poaceae Imperata cylindrica Beauv. Высушенное корневище var. major (Nees) C. E. Hubb. обладает эффектами охлаждения крови, остановки кровотечения, очищения от жара и диуреза. Современные исследования показали, что корни Houttuynia cordata содержат различные химические компоненты, такие как тритерпеноиды, флавоноиды, органические кислоты, фенилпропаноиды, эндосульфаны и полиолы, которые обладают различными фармакологическими свойствами, такими как гемостаз, диурез, анальгезия, антибактериальное, противовоспалительное, антиоксидантное, понижающее кровяное давление, защита печени и регуляция иммунной функции. В издании Китайской фармакопеи 2020 года отсутствуют показатели содержания для стандартов качества лекарственного сырья корня Houttuynia cordata, а существующие стандарты качества не могут в полной мере отразить внутреннее качество корня Houttuynia cordata. В предыдущих исследованиях для контроля качества корней Polygonatum sibiricum в основном использовался спектр отпечатков пальцев/характеристик в сочетании с определением содержания хлорогеновой кислоты, однако количественное исследование сочетания спектра отпечатков пальцев и нескольких индикаторных компонентов не проводилось. Исследования показали, что компоненты фенольных кислот в традиционной китайской медицине обладают противовоспалительным, антибактериальным, антиоксидантным, противоопухолевым и другими эффектами, и являются натуральными активными продуктами с большой исследовательской ценностью и потенциалом применения. Корень Houttuynia cordata содержит большое количество компонентов фенольной кислоты, и его фармакологическая активность, такая как противовоспалительная, антибактериальная и антиоксидантная, тесно связана с функциональными показаниями корня Houttuynia cordata. Таким образом, в данном исследовании был получен UPLC-отпечаток стандартного отвара корня Houttuynia cordata и впервые было проведено одновременное определение содержания хлорогеновой кислоты, неохлорогеновой кислоты, криптохлорогеновой кислоты и p-светлой коричной кислоты в стандартном отваре. В сочетании с методами хемометрического анализа это дает основу для оценки качества стандартного отвара корня Houttuynia cordata в различных областях производства.

Выбор показателей содержания. В настоящее время существует относительно мало исследований по показателям определения содержания корней Polygonatum sibiricum, в основном они посвящены определению фенольных кислот и сахаров. Также имеются сообщения об определении содержания в корнях Polygonatum sibiricum и кариофиллина. Однако содержание Polygonatum sibiricum и кариофиллина в лекарственном сырье очень низкое. В стандартном отваре корней Polygonatum sibiricum в качестве растворителя используется вода, а активные ингредиенты в основном состоят из водорастворимых компонентов. Polygonatum sibiricum и кариофиллин имеют не только низкое содержание, но и жирорастворимые компоненты, поэтому они не подходят в качестве индикаторных компонентов. Специфичность сахарных компонентов низкая, и они также не подходят для использования в качестве индикаторных компонентов. При изучении спектров отпечатков пальцев было также установлено, что, хотя корни Polygonatum sibiricum содержат много химических компонентов, содержание эффективных ингредиентов относительно невелико. Выявили два хроматографических пика с более высокими типами пиков из спектра отпечатков пальцев, оба из которых являются компонентами фенольных кислот и тесно связаны с фармакологической активностью стандартного отвара Houttuynia cordata. Поэтому при выборе показателей содержания предпочтительным является определение компонентов фенольных кислот. Исследования показали, что хлорогеновая, неохлорогеновая и криптохлорогеновая кислоты относительно стабильны в кислых условиях pH, но нестабильны в нейтральных и щелочных условиях, с определенной степенью превращения между ними. В процессе изучения спектров отпечатков корня Houttuynia cordata и стандартного отвара мы обнаружили, что по сравнению с корнем Houttuynia cordata в спектрах отпечатков стандартного отвара корня Houttuynia cordata наблюдается значительное увеличение соотношения площадей пиков 1 (неохлорогеновая кислота), 8 (криптохлорогеновая кислота) и 5. Таким образом, мы предполагаем, что в процессе отваривания корня Houttuynia cordata повышается вероятность превращения хлорогеновой, неохлорогеновой и криптохлорогеновой кислот. Хлорогеновая, неохлорогеновая и криптохлорогеновая кислоты имеют сходную структуру и фармакологическую активность. Поэтому мы считаем, что при выборе показателей содержания стандартного отвара корня Чжимао лучше всего определять общее количество хлорогеновой, неохлорогеновой и криптохлорогеновой кислот, а не просто измерять отдельные компоненты хлорогеновой кислоты. Результаты исследования показывают, что существуют значительные различия в общем количестве четырех компонентов фенольной кислоты в стандартном отваре Polygonatum sibiricum из разных районов производства, что отражает качество лекарственного сырья Polygonatum sibiricum из разных районов производства, что может быть связано с разным временем сбора и методами обработки лекарственного сырья из разных районов производства.

Разработка аналитических методов. В настоящее время нет исследований по контролю качества корня Houttuynia cordata с использованием спектра отпечатков пальцев в сочетании с многокомпонентным количественным определением. Сублимированный порошок стандартного отвара корня Houttuynia cordata содержит большое количество сахаров, а структура компонентов фенольных кислот схожа, что требует высокого хроматографического разделения. Поэтому при создании метода необходимо полностью изучить влияние различных соотношений подвижной фазы, хроматографических колонок, температуры колонок и скорости потока на каждый пик отпечатка, особенно на хроматографический пик для определения содержания, и выбрать оптимальные условия хроматографирования и колонки; выбрать 280, 300, 325 и 350 нм в качестве длин волн обнаружения и провести полноволновое сканирование для регистрации спектров поглощения образца в диапазоне 200-400 нм. Результаты показывают, что нет существенной разницы в количестве и типах пиков на каждой хроматограмме при разных длинах волн. При использовании 325 нм в качестве длины волны обнаружения значение поглощения пика хроматограммы является самым высоким. Поэтому 325 нм выбрано в качестве длины волны обнаружения для данного характеристического спектра. С помощью метода однофакторного анализа были исследованы растворители для экстракции (метанол, 10% метанол, 50% метанол, 70% метанол, 70% этанол, 50% этанол, 10% этанол), методы экстракции (ультразвук и нагревание под рефлюксом), дозировка растворителя (15, 25, 50 мл) и время экстракции (15, 30, 45 мин) для определения рационального метода приготовления тестового раствора.

Оценка сходства и хемометрический анализ. Результаты расчета сходства спектров отпечатков пальцев показывают, что значения сходства трех партий стандартного отвара Polygonatum sibiricum в производственном районе Хэнань значительно ниже, чем в других производственных районах, что указывает на значительные различия в соотношении химического состава корней Polygonatum sibiricum в Хэнани по сравнению с другими производственными районами. Результаты HCA и PCA позволяют эффективно различать образцы из производственных районов Хэбэй, Аньхой и Хэнань, но дифференциация образцов из производственного района Цзянсу не очевидна. Компоненты фенольных кислот, такие как хлорогеновая кислота, легко растворяются в воде и нестабильны при воздействии тепла. Поэтому обработка, хранение и транспортировка в разных районах производства могут влиять на качество лекарственного сырья, что приводит к различиям в качестве стандартного отвара Polygonatum sibiricum из разных районов производства. С помощью OPLS-DA были выявлены три дифференциальных биомаркера, которые были ранжированы в соответствии с VIP-значениями, а именно: пик 9>пик 6>пик 5. Это указывает на значительные различия в пике 9, пике 6 и пике 5 стандартного отвара Houttuynia cordata из разных районов производства. Было подтверждено, что пик 9 - это p-светлая коричная кислота, пик 5 - хлорогеновая кислота, а пик 6 нуждается в дальнейшем исследовании. В настоящее время во многих провинциях введена местная политика, направленная на поощрение свежей срезки лекарственных трав в местах их производства и снижение потерь эффективных ингредиентов. Исследования показали, что содержание хлорогеновой, неохлорогеновой и криптохлорогеновой кислот в ломтиках, приготовленных путем промывания и нарезки травы коралла в свежем виде, значительно выше, чем в ломтиках, приготовленных традиционными методами обработки. Противовоспалительный и обезболивающий эффекты ломтиков травы коралла, обработанных в свежем виде, значительно выше, чем у традиционных ломтиков, что указывает на целесообразность сочетания обработки травы коралла с обработкой производственных площадей. Корень цзюмао богат компонентами фенольной кислоты, особенно подходит для переработки в свежем виде на производственном участке, тем самым увеличивая содержание лекарственных веществ.

В данном исследовании был разработан метод UPLC-отпечатков для стандартного отвара Polygonatum sibiricum и одновременно определены четыре компонента фенольных кислот. Метод прост в применении, стабилен, надежен и обладает хорошей воспроизводимостью, что позволяет использовать его для оценки качества стандартного отвара Polygonatum sibiricum, лекарственного сырья, отваров и сопутствующих препаратов.