Исследование химических компонентов лигнанов и их защитного действия на клетки печени в китайской волчьей ягоде
Leonuri Fructus получают из высушенных и спелых плодов Leonurus japonicus Houtt, растения семейства Lamiaceae. Лечебные свойства этого растения заключаются в стимулировании кровообращения, регулировании менструаций, очищении печени и улучшении зрения. Впервые он был записан в "Шэньнун бэнькао цзин" и известен своим резким и мягким вкусом, а также способностью улучшать зрение, питать сущность и выводить влагу. Он имеет долгую историю использования в медицине. Имукао и Увэйцзы - два традиционных китайских препарата из одного и того же растения с разными лекарственными частями. Их традиционные эффекты также имеют сходства и различия. В "Компендиуме лекарственных средств" различаются функции и показания к применению этих двух китайских препаратов: "Имукао способствует циркуляции крови и питает ее... Это поистине священное лекарство семейства кровеносных. Увэйцзы прекрасно подходит для лечения женских неправильных меридианов, рождения плода и всех видов заболеваний крови и ци. Его корни, стебли, цветы и листья используются как лекарство и могут применяться вместе. Если речь идет о застое в руках и ногах, разделении инь и крови, ветре и жаре, очищении и очистке печени от жара, улучшении зрения и сущности, регулировании женских меридианов, то хорошо использовать только Увэйцзы. Если он лечит отеки, токсины, язвы и раны, то может устранить воспаление. Вода способствует циркуляции крови, и если женщина страдает от различных заболеваний во время беременности, то рекомендуется использовать ее в сочетании с другими средствами. Из этого видно, что и пустырник, и волчья ягода обладают функцией стимулирования кровообращения и устранения застоя крови, но первый хорош для стимулирования кровообращения и устранения застоя крови, а второй - для очищения печени и улучшения зрения. Однако широта и глубина современных исследований Polygonatum sibiricum гораздо меньше, чем у Leonurus heterophyllus. Химические исследования показали, что в Leonurus heterophyllus было выделено и идентифицировано более 300 химических компонентов, и существует множество литературы, объясняющей его фармакологические эффекты и механизмы в вазодилатации, антитромбоцитарной агрегации и регуляции гладкой мускулатуры матки. Однако в Polygonatum sibiricum обнаружено менее 70 соединений, основными компонентами которых являются тритерпеноиды, циклические пептиды, флавоноиды, стерины, фенилпропаноиды, лигнаны и алкалоиды. Современные фармакологические исследования показали, что Polygonatum sibiricum обладает такими эффектами, как сокращение матки, защита клеток печени, ингибирование активности тирозиназы и ацетилхолинэстеразы, противораковое, противовоспалительное, нейропротекторное действие и др. Однако большинство фармакологических исследований посвящено только фармакологическим эффектам экстракта, а фармакологические эффекты и механизмы действия отдельных компонентов изучены сравнительно мало. В ходе предварительного исследования исследовательская группа обнаружила, что тетрагидрофурановые лигнаны в семенах китайской волчьей ягоды обладают значительной защитной активностью клеток печени, и изучила возможный механизм действия с помощью флуоресцентного окрашивания, вестерн-блота и других методов. Поэтому для дальнейшего изучения активных ингредиентов с защитным действием на печень в Fructus Polygonatum sibiricum, в данном исследовании использовались различные хроматографические и спектроскопические методы для выделения и идентификации 8 лигнанов из н-бутанольной фракции Fructus Polygonatum sibiricum. Затем были использованы методы МТТ, флуоресцентного окрашивания Hoechst 33342 и вестерн-блот для характеристики защитных эффектов и механизмов соединений при повреждении клеток печени.

 

В данном исследовании из н-бутанольной фракции Polygonatum sibiricum были выделены и идентифицированы восемь лигнанов, причем все соединения 1-8 были выделены из Polygonatum sibiricum впервые. В настоящее время тритерпеноиды являются основными соединениями, выделенными из семян Polygonatum sibiricum, и к настоящему времени исследовательская группа выделила 23 лигнана из Polygonatum sibiricum. Согласно литературным данным, мономерные соединения, выделенные из Leonurus и Leonurus, в основном являются терпеноидами, но о лигнанах в Leonurus сообщений мало. Поэтому можно предположить, что лигнаны являются дифференциальными веществами между Leonurus и Leonurus.

Ацетаминофен, также известный как парацетамол, - это жаропонижающее и обезболивающее лекарство на основе анилина. Чрезмерное употребление может легко вызвать повреждение печени или даже печеночную недостаточность, в основном вызывая дисфункцию митохондрий и апоптоз клеток печени, что приводит к тяжелой печеночной токсичности. Поэтому APAP часто используется в качестве моделирующего препарата для лекарственно-индуцированного повреждения печени. В данном эксперименте на основе APAP была создана модель повреждения печени in vitro и проведен скрининг выделенных соединений на защитную активность клеток печени. Результаты показали, что соединения 1 и 3 значительно ингибировали повреждение клеток печени, вызванное APAP, со значениями EC50 10,23 ± 2,45 мк моль/л и 5,20 ± 1,28 мк моль/л, соответственно. Кроме того, с помощью флуоресцентного окрашивания было обнаружено, что соединение 3 может ингибировать апоптоз в клетках HL-7702.

Внутренний путь клеточного апоптоза регулируется белками семейства B-клеточной лимфомы (Bcl-2), которые образуют сеть белково-белковых взаимодействий и регулируют клеточный апоптоз, влияя на проницаемость внешней мембраны митохондрий. Bcl-2 и Bax - пара ключевых белков, регулирующих клеточный апоптоз. Bcl-2 - антиапоптотический белок, повышающий устойчивость клеток печени к большинству факторов повреждения ДНК, а Bax - проапоптотический белок, вызывающий повышение проницаемости митохондриальной мембраны и высвобождение цитохрома c, что приводит к апоптозу клеток. Соотношение экспрессии белков Bcl-2 и Bax отражает способность клеток к выживанию после стимуляции апоптоза. Для дальнейшего изучения механизма ингибирования апоптоза клеток соединением 3 была использована технология Вестерн-блот для определения уровня экспрессии белков Bcl-2 и Bax. Результаты показали, что соединение 3 может повышать экспрессию белка Bcl-2, снижать экспрессию белка Bax и увеличивать соотношение Bcl-2/Bax, что позволяет предположить, что соединение 3 может оказывать антиапоптотическое действие, регулируя уровни экспрессии белков Bcl-2 и Bax, тем самым оказывая защитное действие на клетки печени.

В данном исследовании изучена основа фармакологического вещества и механизм действия защитной активности клеток печени в Radix Polygonatum sibiricum, что создает основу для выяснения традиционной эффективности Radix Polygonatum sibiricum и способствует рациональному развитию и использованию лекарственных ресурсов в будущем. На данный момент исследовательская группа выделила шесть лигнанов с защитной активностью клеток печени из Fructus Ranunculi, включая фрутолигид A фрутолигид B, ларицирезинол-4-O-β-D-глюкозид, ларицирезинол-4′-O-β-D-глюкозид, (+) - изокверцетин -9 '- O - β - D-глюкозид, артемизинин. В "Сборнике лекарственных средств" говорится о том, что китайская волчья ягода хорошо очищает печень и улучшает зрение, но в настоящее время существует мало исследований о ее материальной основе и механизме действия для очищения печени и улучшения зрения. В результате исследований группы ученых было установлено, что лигнаны, содержащиеся в китайской волчьей ягоде, обладают хорошим защитным действием на клетки печени, что может быть активным веществом, на основе которого китайская волчья ягода очищает печень и улучшает зрение.