ВЭЖХ спектры отпечатков пальцев и определение содержания четырех алкалоидов в различных областях железного молотка Фу Мао
Аконит флавум (Aconitum flavum Hand. - Mazz. принадлежит к роду Aconitum семейства Ranunculaceae. Он также известен под названиями Duanchongcao, Wuyao и Yizhihao и является традиционным китайским лекарственным растением и народной травой. Его корни и проростки используются в медицине, а высушенные корни широко известны как "железный молоток". В китайской травяной медицине Шэньси говорится, что молоток с железным стержнем Фумао способствует циркуляции крови, устраняет застой крови, снимает боль, рассеивает ветер и сырость, уменьшает отеки и токсины, останавливает кровотечение, лечит травмы, полученные при падениях, ревматоидный артрит, боли в пояснице и ногах.

Согласно литературным данным, основными действующими веществами китайской лекарственной травы Aconitum carmichaelii являются алкалоиды, а основным химическим компонентом с относительно высоким содержанием является аконитин. Основными компонентами, отличающимися по содержанию между Fumao Iron Hammer и Iron Hammer, являются 12 эпиаконитин и аконитин. В Fumao Iron Hammer содержание 12-эпиаконитина и аконитина выше, чем в Iron Hammer. Современные фармакологические экспериментальные исследования показали, что аконитин, 12-эпиаконитин, софокарпин и 3-ацетилаконитин обладают анальгетической, противовоспалительной и противораковой активностью.

В настоящее время существует мало сообщений о стандартах качества Fumao Iron Hammer. Для оценки качества традиционной китайской медицины широко используется спектр отпечатков пальцев, который может всесторонне отразить типы и количество химических компонентов, содержащихся в традиционной китайской медицине. Поэтому в данном исследовании были получены ВЭЖХ хроматограммы отпечатков пальцев для 15 партий лекарственного сырья Фумао Тибанг Хаммер различного происхождения и определено содержание четырех алкалоидов, включая 12-эпиаконитин, Сун Гуолин, аконитин и 3-ацетилаконитин; Во-вторых, для оценки сходства использовалась хроматографическая система оценки сходства отпечатков пальцев китайской медицины (версия 2012A), а для кластерного анализа и анализа главных компонент - программное обеспечение SPSS, чтобы обеспечить научную основу для скрининга индикаторных компонентов и комплексного контроля качества китайской медицины Fumao Tiebang Hammer.

 

 

Определение условий хроматографирования. Максимальная длина волны поглощения 12-аконитина и Song Guoling составляет 210 нм, а максимальная длина волны поглощения аконитина и 3-ацетилаконитина - 235 нм. 210, 215, 220 и 230 нм были исследованы, чтобы сбалансировать четыре пика и достичь наибольшего значения отклика. В итоге в качестве длины волны обнаружения была выбрана 215 нм. Мы исследовали Agilent Eclipse Plus C18 (50 мм × 4,6 мм, 5 мкм), Unitary C18 (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм), JADE-PAK ODS (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм) и ACE Excel C18PFP (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм). Сравнив коэффициент симметрии, разрешение и форму пика, мы остановили свой выбор на хроматографической колонке ACE Excel C18 PFP. Мы исследовали добавление 2,0, 2,5 и 3,0 мл триэтиламина в водную фазу и обнаружили, что добавление 2,5 мл триэтиламина приводит к лучшей форме хроматографических пиков и эффекту градиентного элюирования. Поэтому мы добавили 2,5 мл триэтиламина в водную фазу. В соответствии с фармакопеей и литературными данными были исследованы такие подвижные фазы, как ацетонитрил: 0,1% ацетат аммония, ацетонитрил: 0,2% ледяная уксусная кислота (отрегулированная до pH=6,2 с помощью триэтиламина), ацетонитрил и вода, а также ацетонитрил: 0,1% фосфорная кислота. В итоге было выбрано градиентное элюирование водным раствором ацетонитрила: 0,1% фосфорной кислоты, что позволило получить плавную базовую линию, равномерное распределение пиков и хороший эффект разделения.

Анализ спектра отпечатков пальцев и определение содержания. Имеются различия в количестве хроматографических пиков, времени удерживания и площади пика при одном и том же времени удерживания в спектре отпечатков пальцев образцов разного происхождения железного молотка Фу Мао; результаты оценки сходства спектров отпечатков пальцев 15 партий лекарственного сырья варьируются от 0,769 до 0,952; кластерный анализ классифицирует образцы S1 и S2 как класс I; образцы S3~S5 классифицируются как класс II; S6~S13 классифицируются как класс III; S14 и S15 классифицируются как класс IV. Согласуется с результатами анализа главных компонент. Анализ главных компонент был использован для отсеивания общих характерных компонентов, выявления определяющих факторов и обеспечения справочной информации для оценки качества лекарственного сырья Fumao Iron Rod Hammer. Анализ главных компонент использует собственные значения более 1,2 в качестве критерия извлечения, и когда кумулятивный коэффициент вклада дисперсии превышает 80%, получается пять главных компонент, которые могут представлять большую часть информации общих пиков в спектре отпечатков пальцев молотка железного стержня Фу Мао. По результатам определения содержания видно, что содержание 12-эпиаконитина, Сун Гуолина и аконитина относительно высоко, и предыдущие обзоры литературы показали, что все они обладают противовоспалительной и обезболивающей активностью. Однако содержание 3-ацетилаконитина в различных образцах обычно низкое и не используется в качестве показателя контроля качества для Fuzhong Iron Hammer. Поэтому, основываясь на результатах определения содержания и анализа главных компонент, в данном эксперименте одновременно использовались шесть характерных компонентов, а именно 2, 3, 4 (12-эпиаконитин), 5 (Song Guoling), 6 и 15 (аконитин), которые вносят значительный вклад в пять главных компонент и имеют большие площади пиков. Среди них пики 2, 3 и 6 неизвестны и могут быть дополнительно подтверждены с помощью масс-спектрометрии для изучения возможности их использования в качестве индикаторов контроля качества на поздней стадии производства Fu Mao Iron Hammer.

Результаты определения содержания показывают, что в Юшу (S3), Цзючжи (S4) и Мацине (S5) в районе производства Цинхай содержание алкалоидов выше; Ван Ронг и др. определили содержание алкалоидов в железном молотке Фумао в Гуолуо, Юшу, Хайдуне и Гуюане, Нинся. Результаты показали, что содержание алкалоидов было самым высоким в железном молотке Фумао в Гуолуо Банма и Юшу, что согласуется с результатами данного исследования. Общее количество аконитина является самым высоким среди четырех компонентов, а общее количество 3-ацетилаконитина - самым низким, что согласуется с результатами исследования Чжао Мейю. Районы производства с самым высоким содержанием 12-аконитина, Сонг Гуолинга, аконитина и 3-ацетилаконитина - это Цзянсиская лесная ферма в Юшу, Цинхай, аэропорт Мацинь в Цинхае, Аба в Сычуани и Гуйнань в Цинхае; общее количество четырех алкалоидов в образцах из Цзянсиской лесной фермы и аэропорта Мацинь также было самым высоким. Существуют различия в качестве лекарственных материалов, таких как Fu Mao Tie Ban Hammer, в разных регионах, что может быть связано с такими факторами, как среда произрастания, климат, почва, время сбора и годы роста лекарственных материалов, которые влияют на накопление вторичных метаболитов в лекарственных материалах, что приводит к различиям в сходстве и содержании лекарственных материалов.

В Китайской фармакопее не описаны методы ВЭЖХ контроля качества лекарственного растения Фу Мао Тие Бань Чжун. Поэтому в данном исследовании для определения спектра отпечатков пальцев Фу Мао Тие Бань Чжуна был использован метод ВЭЖХ-ДАД, а также определено содержание четырех алкалоидных компонентов. В то же время, оценка сходства, кластерный анализ и анализ главных компонент были использованы для комплексной оценки качества Фу Мао Тие Бань Чжун из разных мест происхождения. Три метода были взаимно проверены и дополнены, что позволило избежать недостатка оценки качества лекарственных трав на основе содержания одного компонента и послужило основой для оценки качества лекарственных трав Фу Мао Тие Бань Чжун.