Идентификация характерных спектров ВЭЖХ четырех оригинальных растений лекарственных трав Сихуанчао
Трава Сихуан - это уникальное китайское лекарственное растение на юге Пяти Хребтов, которое обладает эффектом очищения от жара и устранения сырости, охлаждения крови и устранения застоев. Она используется для лечения желтухи от влажного тепла, распирания живота и болей в ипохондрии, диареи от влажного тепла, диареи от токсинов тепла, а также при травматических повреждениях. Это широко используемое клиническое лекарство на юге Пяти Хребтов, а также сырье для рецептов знаменитых традиционных китайских патентованных лекарств и простых препаратов большой разновидности "противовоспалительных и желчегонных таблеток". В Китайской фармакопее (издание 2020 г., том 4) он указан как высушенная надземная часть Rabdosia lophanthoides (Buch. - Ham. ex D. DON) H. Hara или Rabdosia serora (Maxim.) H. Hrar, растения, относящегося к семейству Labiatae и роду Rabdosia. Оригинальным растением, включенным в Стандарты китайской травяной медицины провинции Гуандун, является Rabdosia lophanthoides R serra、 Нитевидный узорчатый ароматный чай и овощ R Lophanthoides и его волокнистая разновидность цветков R lophanthoides var. graciliflora(Benth.) H. Hrar。 В процессе исследования и организации ресурсов зародышевой плазмы лекарственных материалов Сихуанцао члены нашей исследовательской группы обнаружили, что Rabdosia stracheyi (Benth. ex Hook. f.) Hara, растение, принадлежащее к тому же роду, также широко используется в качестве лекарственных материалов Сихуанцао в народной культуре. Из-за схожих морфологических характеристик этих растений трудно отличить сухие лекарственные материалы по их внешнему виду, и всегда существовало явление путаницы в сортовых ресурсах коммерческих лекарственных материалов Сихуанцао. Поэтому очень важно разработать методы идентификации различных видов хуанчао, чтобы обеспечить и повысить его клиническую безопасность и эффективность.

Традиционно идентификация различных оригинальных растений лекарственного сырья Сихуанчао изучалась с точки зрения морфологии и микроскопии. Однако из-за того, что сухие лекарственные материалы часто мнутся и ломаются, их трудно точно и быстро идентифицировать. В последние годы ученые проводят идентификационные исследования оригинальных растений на уровне молекул ДНК и химических компонентов. Однако молекулярная идентификация позволяет различать Rabdosia serora и Lycaena angustifolia только на видовом уровне, что затрудняет различие между оригинальными и разновидностями Lycaena angustifolia. Что касается исследования химического состава, некоторые ученые считают, что инфракрасная спектроскопия с преобразованием Фурье и двумерная корреляционная инфракрасная спектроскопия позволяют идентифицировать Сихуанцао, Линейный ароматный чайный овощ и его волокнистые цветки и узколистные сорта. Некоторые ученые также проводили исследования по идентификации содержания химического состава и спектров отпечатков пальцев, но экспериментальные результаты не могут хорошо отличить оригинальный сорт выложенного душистого чая от его разновидностей. В последние годы хемометрические методы находят все более широкое применение в хроматографическом анализе традиционной китайской медицины. Они позволяют дополнительно анализировать и обрабатывать большой объем данных, полученных в результате хроматографического анализа, и играют все более важную роль в контроле качества традиционной китайской медицины в сочетании с хроматографическим анализом. Ультравысокоэффективная жидкостная хроматография (УВЭЖХ) обладает такими преимуществами, как короткое время анализа, хороший эффект разделения и высокая чувствительность. Поэтому в данном исследовании использовалась УПЖХ для изучения характерных спектров 32 партий собранных лекарственных материалов из четырех различных базовых растений, а именно Сихуанцао, Сяньвэнь Сянчацай, Сяньсянь Сянчацай и Лонгье Сянчацай, и в сочетании с хемометрическими методами, такими как кластерный анализ, анализ главных компонент и дискриминантный анализ частичных наименьших квадратов, для различения и идентификации этих четырех базовых растений, чтобы предоставить ценные сведения для Сиси. Предоставить ссылку для идентификации лекарственных материалов Хуанчао, а также для анализа и оценки их качества.

 

В данном исследовании были отобраны и оптимизированы методы приготовления и условия хроматографирования тестового раствора. Результаты исследования экстрагирующих растворителей (метанол, метанол 80%, метанол 60%) показали, что при использовании метанола в качестве экстрагирующего растворителя полученная хроматограмма образца имеет больше хроматографических пиков, относительно большие площади пиков и стабильную базовую линию, что лучше отражает химический состав лекарственного материала Xihuangcao. Таким образом, метанол был выбран в качестве растворителя для экстракции характерного спектра лекарственного сырья Сихуанцао; Результаты измерения длин волн (250, 254, 260, 280 нм) показали, что существует множество хроматографических пиков при 254 нм, и размеры каждого пика были однородными. Поэтому в качестве длины волны обнаружения была выбрана 254 нм; Результаты исследования подвижных фаз (метанол -0,1% муравьиная кислота вода, ацетонитрил -0,1% муравьиная кислота вода, 0,1% муравьиная кислота метанол -0,1% муравьиная кислота вода, и 0,1% муравьиная кислота ацетонитрил -0,1% муравьиная кислота вода) показали, что при использовании метанола -0.1% муравьиной кислоты воды в качестве подвижной фазы для элюирования, базовая линия была ровной, а степень разделения и форма пика были хорошими; Результаты исследования температуры колонки и скорости потока показали, что эффективность разделения каждого хроматографического метода была наилучшей, когда температура колонки составляла 30 ℃, а скорость потока - 0,3 мл/мин.

В этом исследовании UPLC была использована для создания карты характеристик, применимой для идентификации четырех основных растений лекарственной травы Сихуанчао. Базовая линия была ровной, степень разделения - хорошей, а количество общих пиков - большим. В контрольных картах Сихуанцао, Сяньвэнь Сянчацай, Сянсян Сянчацай и Лонгье Сянчацай было откалибровано 19, 24, 26 и 21 общий пик соответственно. На основании различий в их общих пиках можно предварительно выделить четыре основных растения. Из-за небольшого количества собранных партий сяньвэнь сянчакай и лонъе сянчакай, чтобы избежать ошибок в процессе исследования, для калибровки при изучении общих пиков были выбраны хроматографические пики с более высокими значениями отклика, лучшей степенью разделения и формой пика. Результаты оценки сходства показывают, что из-за различий в месте происхождения существуют определенные различия между одинаковыми исходными лекарственными материалами; также существуют различия между различными базовыми лекарственными материалами, среди которых сходство между Сихуанцао и тремя другими базовыми лекарственными материалами относительно низкое и может быть четко различимо; сходство между Сяньхуа душистый чайный овощ и Сяньвэнь душистый чайный овощ относительно высокое, и сходство между Чангэ душистый чайный овощ и Сяньхуа душистый чайный овощ также относительно высокое. Причина может заключаться в том, что душистый чай Сяньхуа, душистый чай Сяньвэнь и душистый чай Чанъе - это растения, принадлежащие к группе душистых чайных овощей с морщинистыми листьями и имеющие схожие типы химического состава. Существующие исследования показали, что химические компоненты, содержащиеся в исходных растениях лекарственного сырья Сихуанчао, мало чем отличаются друг от друга, в основном это терпены, флавоноиды, фенольные кислоты и стерины. Среди них дитерпены являются важными компонентами лекарственной травы сихуанцао. Основным типом дитерпенов, содержащихся в оригинальном растении Сихуанцао, является энантиомерный тип каэмпферола, в то время как линейный душистый чайный овощ и его волокнисто-цветковая разновидность, а также длиннолистный душистый чайный овощ содержат в основном дитерпены канифольного типа и энантиомерные канифольные дитерпены. Предполагается, что низкое сходство между Сихуанчао и линейным душистым чайным овощем, волокнистым душистым чайным овощем и длиннолистным душистым чайным овощем может быть связано с различиями в типах дитерпенов, а различия между линейным душистым чайным овощем, волокнистым душистым чайным овощем и длиннолистным душистым чайным овощем могут быть связаны с содержанием и типами их соответствующих компонентов.
Анализ главных компонент показал, что по разнице в баллах главных компонент каждого базового элемента сихуанцао можно отличить от линейного душистого чайного растения, душистого чайного растения и длиннолистного душистого чайного растения. Дискриминантный анализ по методу наименьших квадратов позволяет выделить три типа примитивных растений, а именно линейно-узорчатое душистое чайное растение, волокнистое душистое чайное растение и длиннолистное душистое чайное растение, со значительными классификационными эффектами. Полученные 15 классификационных маркеров являются основными характерными компонентами, которые вызывают различия между тремя видами, что имеет большое значение для выделения этих трех различных примитивных растений. Идентификация этих 15 хроматографических пиков все еще нуждается в дальнейшем исследовании и определении.
Таким образом, карты характеристик UPLC четырех базальных растений Сихуанцао, созданные в данном исследовании, позволяют предварительно выделить четыре различных базальных растения путем калибровки характерных пиков и оценки сходства. Для того чтобы лучше различать четыре типа исходных растений и искать дифференциальные компоненты, в данном исследовании были использованы кластерный анализ, анализ главных компонентов и дискриминантный анализ по методу частичных наименьших квадратов для полного различения четырех типов исходных растений в Сихуанцао. Результаты исследования представляют собой научный метод и справочник для идентификации, анализа качества и оценки оригинальных растений в лекарственных материалах Сихуанчао.