Исследование ключевых компонентов суммарных флавоноидов из Angelica sinensis для борьбы с ревматоидным артритом на основе спектрально-эффекторной зависимости и нокаута компонентов
Lamiophlomis Herba (LH), традиционное китайское лекарство, представляет собой высушенную надземную часть Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo, растения семейства Lamiaceae. Это лекарственное растение широко используется тибетцами, а также широко применяется в качестве традиционной китайской медицины. В Фармакопее Китайской Народной Республики издания 2020 года говорится, что она способствует циркуляции крови, останавливает кровотечение, рассеивает ветер и снимает боль. Его можно использовать для лечения травм, полученных при падении, ревматизма и болезни желтой воды. Названия тибетской медицины - "Даба" и "Дабуба", которые были записаны в тибетских медицинских трудах, таких как "Юэ Ванг Яо Цзянь", "Четыре классика медицины", "Цзин Чжу Бэнь Цао" и др. История его применения насчитывает 1200 лет; в "Цзинчжу Бэнькао" записано, что "Ду И Вэй укрепляет сущность и отводит желтую воду", что указывает на возможность использования Ду И Вэя для лечения "болезни желтой воды". По клиническим проявлениям "болезнь желтой воды", зафиксированная в тибетской медицине, может быть классифицирована как "синдром би" в традиционной китайской медицине. "Костная болезнь би" и "болезнь ли цзе", развившиеся из "синдрома би", более близки к клиническим характеристикам "ревматоидного артрита (РА)" в современной медицине. Поэтому Ду И Вэй обладает потенциалом для лечения РА, а существующие исследования также показали, что Ду И Вэй обладает противораковым действием.
РА - это аутоиммунное заболевание, характеризующееся хроническими и множественными воспалениями суставов. Его патологические особенности включают опухолеподобную пролиферацию синовиальных клеток и образование сосудистых помутнений, а основными эффекторными клетками являются фибробластоподобные синовиоциты (ФЛС). В настоящее время патогенез РА остается неясным. Уровень заболеваемости и инвалидизации высок, а само заболевание обычно протекает латентно. Поздняя стадия заболевания может приводить к различным степеням необратимой инвалидизации, что является современным рефрактерным заболеванием, определенным Всемирной организацией здравоохранения. В клинической практике для лечения РА обычно используются такие химиопрепараты, как нестероидные противовоспалительные средства, иммунодепрессанты, глюкокортикоиды и биопрепараты. Первые три химиопрепарата имеют значительные побочные реакции, а дороговизна биопрепаратов ограничивает их длительное применение. Поэтому особенно необходимо разработать новые клинические противораковые препараты с низким уровнем побочных эффектов и стабильным терапевтическим действием.
Исследовательская группа впервые использовала сетевую фармакологию для изучения основ фармакологических веществ и механизма действия Ду И Вэй при лечении РА. Было установлено, что терапевтический эффект Ду И Вэй при РА связан с его 23 компонентами, среди которых флавоноиды составляют почти 40%, что указывает на то, что флавоноиды играют важную роль в противораковом процессе Ду И Вэй, особенно лютеолин; и предполагается, что основным механизмом противоракового эффекта Ду И Вэй может быть индуцирование апоптоза синовиальных клеток путем ингибирования сигнального пути PI3K Akt. Между тем, противораковый эффект и фармакологическая основа Ду И Вэй были изучены на модели адъювантного артрита у крыс, и результаты показали, что общие флавоноиды Ду И Вэй обладают хорошим противораковым эффектом. Общие флавоноиды Ду И Вэя могут быть одним из основных фармакологических веществ для его противоракового эффекта, но ключевые противораковые компоненты в общих флавоноидах Ду И Вэя все еще неясны и требуют дальнейшего изучения. Поэтому данное исследование направлено на изучение ключевых компонентов против РА в общих флавоноидах Angelica sinensis с помощью спектрально-эффекторных отношений и методов нокаута компонентов, с целью обеспечения теоретической основы и ссылки для клинического применения Angelica sinensis в лечении РА.

Обсуждение и заключение
Предварительное исследование фингерпринта общих флавоноидов в Angelica sinensis было проведено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с детектором на диодной матрице (HPLC-DAD). Сходство между спектрами отпечатков каждой партии образцов суммарных флавоноидов Angelica sinensis и установленными контрольными спектрами отпечатков было более 0,9, что указывает на соответствие химических компонентов, содержащихся в разных партиях образцов суммарных флавоноидов Angelica sinensis. Исследовательская группа изучила влияние различных концентраций и времени введения суммарных флавоноидов Angelica sinensis на жизнеспособность клеток FLS на ранней стадии. Исходя из этого, метод CCK-8 использовался для обработки клеток FLS в концентрации 64 мк г/мл в течение 48 часов, чтобы исследовать влияние различных партий общих флавоноидов Angelica sinensis на жизнеспособность клеток FLS. Результаты показали, что все 13 партий общих флавоноидов в Angelica sinensis могут значительно подавлять жизнеспособность клеток FLS. На основе спектра отпечатков пальцев общих флавоноидов в Angelica sinensis и результатов экспериментов по эффективности клеток, серого реляционного анализа и частичных наименьших квадратов (PLS) регрессионного анализа были использованы для установления зависимости спектр-эффект общих флавоноидов в Angelica sinensis против РА. Результаты показали, что компоненты вербаскозид и вербаскозид в общих флавоноидах Angelica sinensis играют основную роль в его противораковой эффективности. На основе тонкослойной хроматографии было эффективно выбито высокое содержание вербаскозида в общих флавоноидах Angelica sinensis, а также определено влияние каждого образца на жизнеспособность клеток FLS методом CCK-8. Результаты показали, что образцы цельного компонента и целевого компонента могли значительно подавлять жизнеспособность клеток FLS, в то время как образец целевого отрицательного компонента не оказывал значительного ингибирующего действия на жизнеспособность клеток FLS. В то же время было проведено сравнение влияния эквимолярных количеств вербаскозида и вербаскозида на жизнеспособность клеток РА-FLS. Результаты показали, что и вербаскозид, и вербаскозид могли значительно подавлять жизнеспособность клеток FLS, но существенной разницы между группой вербаскозида и группой вербаскозида не было.
Таким образом, результаты данного исследования показывают, что компоненты вербаскозид и вербаскозид играют основную роль в противораковой эффективности общих флавоноидов в Angelica sinensis. В сочетании с анализом отпечатков пальцев общих флавоноидов в Angelica sinensis, содержание вербаскозида значительно выше, чем вербаскозида, что указывает на то, что вербаскозид (C21H20O11) является ключевым компонентом общих флавоноидов в Angelica sinensis для борьбы с РА. Это может послужить научной основой для клинического применения общих флавоноидов из Ду И Вэй в лечении РА. Гликозиды османтуса широко представлены в различных лекарственных растениях и оказывают значительное противовоспалительное, антиоксидантное, противораковое и гипогликемическое действие с минимальными побочными токсическими эффектами. Несмотря на то, что компоненты вербаскозида относительно распространены, в настоящее время в литературе отсутствуют данные о противораковых эффектах вербаскозида. В данном исследовании для изучения влияния вербаскозида на жизнеспособность клеток РА-FLS был использован метод CCK-8, и было четко продемонстрировано, что вербаскозид оказывает ингибирующее действие на жизнеспособность клеток FLS. Впоследствии можно создать модель артрита на крысах для проверки эффективности в естественных условиях и объяснить путь его действия, что дает больше оснований для клинического использования флавоноидов Angelica sinensis в лечении РА.