Характеристика различий в составе и антиоксидантной активности зеленой калины сливы на разных стадиях развития с помощью UPLC-QE-MS в сочетании с UPLC
Зеленая чашелистиковая слива - это высушенные цветочные почки Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc., растения семейства Розовые (Rosaceae). Она включена в издание Китайской фармакопеи 2020 года как широко используемое средство традиционной китайской медицины. Его действие заключается в успокоении печени, стимулировании пищеварения, рассасывании мокроты и рассеивании узлов. Он широко используется для лечения таких заболеваний, как боль в печени и желудочной ци, депрессия и золотуха. Как древние записи, так и современные исследования показывают, что цветки сливы отлично подходят для использования в медицине благодаря своим "зеленым чашелистикам". Они имеют серовато-зеленый чашелистик и желто-белые лепестки, обладают душистым ароматом и хорошей клинической эффективностью. Как лекарственное и съедобное растение, зеленая чашечка сливы также может использоваться для приготовления чая, выпечки и других продуктов. Она цветет зимой, свежая и элегантная, и входит в список лучших цветов с высокой декоративной ценностью. Всестороннему применению зеленой калины уделяется все больше внимания.
Отечественные и зарубежные ученые провели обширные исследования химического состава и фармакологического действия цветков сливы. Фенилпропаноидные и флавоноидные компоненты, представленные хлорогеновой кислотой, являются главной материальной основой фармакологической активности цветков сливы. Широко известны их антиоксидантные, антиагрегационные, антимеланиновые и антидепрессивные эффекты. В последние годы флавоноиды в цветках сливы привлекают все больше внимания благодаря своим антиоксидантным и антидепрессивным свойствам. Из цветков сливы были выделены и идентифицированы хлорогеновая кислота, изорамнетин, кверцетин, изокверцитрин, гиперозид, рутин и другие флавоноиды. Однако имеется мало сообщений об общем химическом составе зеленой чашечки сливы, что препятствует углубленному изучению и разработке ее вторичных метаболитов.
Вторичные метаболиты лекарственных растений обладают различной биологической активностью и являются важной материальной основой для оказания фармакологического действия лекарственных растений. Исследования показали, что различные стадии роста и развития растений являются важными факторами, влияющими на накопление вторичных метаболитов в растениях. Особенно для цветочных лекарственных растений период сбора может существенно повлиять на накопление вторичных метаболитов. Для изучения динамических изменений химических компонентов и различий в антиоксидантной активности в органах зеленой калины сливы на разных стадиях развития сначала использовали сверхвысокоэффективную жидкостную хроматографию с квадрупольной электростатической полевой орбитальной ловушкой (UPLC-QE-MS) для качественного анализа, чтобы уточнить химический состав зеленой калины сливы; через УФ-спектрофотометрию. Видимая спектрофотометрия использовалась для определения общего содержания флавоноидов и фенилпропаноидов в 18 партиях образцов зеленой чашелистной сливы на трех стадиях развития; Далее с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии (UPLC) определяли содержание восьми индикаторных компонентов (неохлорогеновой кислоты, хлорогеновой кислоты, кофейной кислоты, рутина, гиперозида, изокверцитрина, изохлорогеновой кислоты B и кверцитрина) в образцах зеленой калины, и сравнивали различия в содержании восьми компонентов на разных стадиях развития; Для определения антиоксидантной активности использован метод DPPH, проведен корреляционный анализ между содержанием суммарных компонентов и индикаторных компонентов и антиоксидантной активностью. Результаты исследования дают научную основу для уточнения различий в химическом составе и активности зеленой калины на разных стадиях развития и определения оптимальных сроков заготовки лекарственного сырья зеленой калины.

В этом эксперименте с помощью метода UPLC-QE-MS в зеленой чашечке сливы было обнаружено в общей сложности 328 вторичных метаболитов. Большая доля приходилась на флавоноиды и фенилпропаноиды - 67 и 50 соединений соответственно. Среди флавоноидов наибольшая доля приходится на флавонолы, а такие компоненты, как гиперозид и изокверцитрин, которые служат стандартом качества для цветков сливы, относятся к этому классу веществ. Исследования показали, что флавонолы играют важную регулирующую роль в развитии органов цветка; был обнаружен только один компонент антоцианов, что может быть связано с белым цветом зеленой чашечки цветка сливы.

Дальнейшее сравнение изменений в составе зеленой чашечки сливы на разных стадиях развития показало, что содержание общих флавоноидов и общих фенилпропаноидов было наиболее высоким на стадии бутона и постепенно снижалось по мере раскрытия цветка. Результаты определения содержания 8 индикаторных компонентов (неохлорогеновой кислоты, хлорогеновой кислоты, кофейной кислоты, рутина, гиперозида, изокверцитрина, изохлорогеновой кислоты B, кверцитрина) показали значительные различия между стадией бутона и стадией полного раскрытия, причем неохлорогеновая кислота, хлорогеновая кислота, рутин, изокверцитрин и кверцитрин показали чрезвычайно значительные различия (P<0.0001); анализ химической стехиометрии показал, что существуют определенные различия в химическом составе зеленой калины в три периода, и хлорогеновая кислота может быть использована в качестве дифференциального маркера качества. В целом, зеленая чашечка сливы в стадии бутона имеет преимущества по химическому составу и антиоксидантной активности, причем значительные различия наблюдаются по сравнению с полуоткрытой и полностью открытой стадиями. Поэтому следует максимально контролировать период сбора лекарственного сырья на стадии бутонов.
Таким образом, в данном эксперименте с помощью метода UPLC-QE-MS в сочетании с методом UPLC был проведен качественный и количественный анализ химического состава и различий зеленой калины на разных стадиях развития, а также сравнение различий ее антиоксидантной активности с помощью метода DPPH. Это дает научное обоснование динамическим изменениям химического состава зеленой чашечки сливы и оптимальному периоду сбора лекарственного сырья.