Исследование качественных различий между фритиллярией Чжэцзян и фритиллярией Хубэй на основе ВЭЖХ-ELSD фингерпринта и многокомпонентного количественного анализа
Fritillaria thunbergii Miq., высушенная луковица растения семейства лилейных Fritillaria thunbergii Miq., входит в список "Восьми ароматов Чжэцзяна" и была включена в различные издания Фармакопеи Китайской Народной Республики (далее - "Китайская фармакопея"). Его собирают, моют, увлажняют, нарезают толстыми ломтиками и сушат, когда растение увядает в начале лета; Си назвал его "Чжэ Бэй Пянь". Чжэцзянская фритиллярия обладает функциями очищения от жара, рассасывания мокроты, облегчения кашля, детоксикации и рассеивания узелков, а также устранения карбункулов. Клинически используется для лечения жара, кашля, абсцесса легких, абсцесса груди и язв.

Хубэйская фритиллария - это высушенная луковица Fritillaria hupehensis Hsiao et K.C. Hsiao, растения из семейства лилейных. Его основными функциями являются очищение от жара и мокроты, облегчение кашля и рассасывание узелков. Он широко используется в клинической практике для лечения таких симптомов, как кашель с жаром в легких и кашель с мокротой. Чжэцзянская фритиллария и хубэйская фритиллария принадлежат к роду Fritillaria и могут использоваться в традиционной китайской медицине в лечебных целях; активными ингредиентами обоих являются алкалоиды, но их типы различны. Основные действующие вещества чжэцзянской фритиллярии включают фритиллярию А, фритиллярию В, изофритиллярию А и т.д. Основные действующие вещества хубейской фритиллярии включают фритиллярию А, фритиллярию В, хубейцзя, хубейи, хубейсин и т.д. Поэтому существуют определенные различия в фармакологических эффектах между чжэцзянской фритиллярией и хубейской фритиллярией. В китайской фармакопее 2020 года в категории лекарственных трав чжэцзянская фритиллярия и хубэйская фритиллярия были перечислены отдельно, что указывает на наличие определенных различий между этими двумя лекарственными травами.

Из-за большого разнообразия и разницы в цене видов Fritillaria на рынке существует феномен взаимного замещения или подмены поддельной Fritillaria и Hubei Fritillaria. Из-за ограничений в морфологической, микроскопической и физико-химической идентификации невозможно эффективно продемонстрировать сходства и различия в качестве двух лекарственных материалов. Поэтому необходимо разработать более конкретный и точный метод, позволяющий эффективно различать и дифференцировать эти два вида.

В Китайской фармакопее издания 2020 года указано, что показателями определения содержания Fritillaria thunbergii являются Fritillaria A и Fritillaria B, а показателем определения содержания Fritillaria thunbergii в провинции Хубэй выбрана Fritillaria B, а предельное содержание Fritillaria thunbergii B в провинции Хубэй значительно превышает суммарное предельное содержание Fritillaria thunbergii A и Fritillaria thunbergii B в провинции Чжэцзян, что создает объективные условия для фальсификации и использования Fritillaria thunbergii. В условиях сложной системы химического состава традиционной китайской медицины использование одной количественной модели уже недостаточно для удовлетворения потребностей современной китайской медицины в контроле качества. В настоящее время имеется мало сообщений о различиях в содержании активных ингредиентов между двумя видами Fritillaria. Поэтому в данном исследовании метод ВЭЖХ-ELSD был использован для определения спектров отпечатков пальцев Fritillariae Thunbergii Bulbus (FTB) и Fritillariae Hupehensis Bulbus (FHB) в Fritillariae thunbergii и Fritillariae Hupehensis Bulbus в Хубэе, соответственно. В то же время были определены пять идентичных алкалоидных компонентов, и было проведено комплексное сравнительное исследование Fritillariae thunbergii и Hubei с качественной и количественной точек зрения, что послужило основой для идентификации и оценки качества двух лекарственных материалов.

 

При создании и применении спектров отпечатков пальцев, HPLC-ELSD спектры отпечатков пальцев Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii были созданы на основе характеристик алкалоидных компонентов в Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii. Результаты оценки сходства показали, что спектры отпечатков пальцев одной и той же Fritillaria thunbergii очень похожи. Поэтому спектры отпечатков пальцев могут быть использованы в качестве общих признаков для исследования контроля качества Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii. Сравнивая различия между спектрами отпечатков двух видов Fritillaria, можно заметить, что в спектре отпечатков Fritillaria thunbergii явно отсутствует пик спектра пигмента Hubeijia или содержание пигмента Hubeijia крайне мало, что затрудняет его обнаружение в Fritillaria thunbergii. Таким образом, Hubeijia может служить дифференциальным биомаркером для различения и дифференциации между двумя видами Fritillaria, Zhejiang Fritillaria и Hubei Fritillaria.

Используя площадь общего пика в качестве переменной, HCA, PCA и OPLS-DA анализы были проведены отдельно. Результаты HCA и PCA позволили эффективно различать и дифференцировать Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii, что указывает на то, что сочетание отпечатков пальцев, HCA или PCA является эффективным методом для идентификации Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii. Для дальнейшего выяснения различий в химическом составе между двумя видами Fritillaria thunbergii был использован анализ OPLS-DA для выявления четырех дифференциальных биомаркеров. В соответствии со значимостью различий они были отсортированы как Fritillaria thunbergii>Peak 4>Berberine A>Berberine B, что указывает на значительные различия в содержании указанных компонентов между двумя видами Fritillaria thunbergii. Эти различия отчасти объясняются различиями в самом лекарственном сырье. Различное происхождение также может быть тесно связано с такими факторами, как условия посадки и цикл роста лекарственных растений.

С точки зрения выбора показателей определения содержания, алкалоиды, содержащиеся в Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii, в основном делятся на стероидные алкалоиды и стероидные алкалоиды. Исследования показали, что алкалоиды обладают различными фармакологическими свойствами, такими как отхаркивающее, подавляющее кашель, облегчающее астму, противовоспалительное и противоопухолевое действие, что соответствует функциональным показаниям чжэцзянской и хубэйской фритилларии. Пять идентичных алкалоидов были идентифицированы по спектрам ВЭЖХ-ELSD отпечатков пальцев Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii. Результаты определения содержания показали, что, за исключением разницы в содержании ибупрофена, остальные четыре компонента Fritillaria thunbergii, берберин А, берберин В и изоберберин А имели значительные различия в содержании. Среди них содержание берберина А в Fritillaria thunbergii было значительно выше, чем в Fritillaria thunbergii, в то время как содержание берберина А, берберина В и изоберберина А было значительно ниже, чем в Fritillaria thunbergii. Таким образом, измеряя содержание берберина А, берберина А, берберина В и изоберберина А, можно отличить Fritillaria thunbergii от Fritillaria thunbergii. Полученные результаты исследования в основном согласуются с результатами анализа OPLS-DA. В литературе имеются сведения о том, что различия в содержании и соотношении алкалоидов могут быть важным фактором, приводящим к различиям в кашле, мокроте, антибактериальном и противовоспалительном действии между двумя видами Fritillaria thunbergii. Одновременное определение нескольких алкалоидов имеет большое значение для контроля качества и оценки клинически ориентированных традиционных китайских лекарственных средств, Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii. Поэтому рекомендуется увеличить количество определений берберина и изоберберина при контроле качества лекарственного сырья Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii.

Таким образом, в данном исследовании были разработаны методы ВЭЖХ-ELSD дактилоскопии Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii и одновременно определено содержание пяти алкалоидов, что может служить важным ориентиром для идентификации и контроля качества лекарственного сырья Fritillaria thunbergii и Fritillaria thunbergii.