Анализ качества роз на основе UPLC-отпечатка и определения двух химических компонентов
Цветок розы - это высушенный цветок Rosa chinensis Jacq., растения семейства розоцветных. Он также известен как роза красная, победный снег, стройный гость, боевой снежный красный, цветок четырех сезонов, драгоценный лунный цветок, яркая снежинка и известен как королева цветов. Цветы розы впервые были занесены в "Сборник лекарственных средств". Они обладают сладким вкусом, теплым характером и относятся к меридиану печени. Они способствуют циркуляции крови, регулируют менструации, успокаивают печень и снимают депрессию. Их можно использовать для лечения нарушений менструального цикла, дисменореи и аменореи; застоя крови, отеков и болей, ожогов, травм от падений, абсцессов и золотухи. Ее выращивают по всей стране, в основном в провинциях Юньнань, Хубэй, Сычуань и Ганьсу, а урожай можно собирать в течение всего года. Химический состав розы богат и разнообразен, в него входят флавоноиды, дубильные вещества, фенольные кислоты, летучие масла, пигменты и гликозидные соединения.
В последние годы исследования роз достигли определенного прогресса. Ву и др. использовали технологию UPLC-Q-Tof-MS для изучения различий в нелетучих химических компонентах между розами и розанами. Результаты показали, что в розах было обнаружено 43 соединения, а в розах - 25. Однако основными компонентами, обнаруженными в розах, были фенольные гликозиды, дубильные вещества и фосфолипиды, а единственным обнаруженным флавоноидным компонентом был глюкозид каэмпферола. Согласно литературным исследованиям, флавоноиды являются основными активными компонентами цветков роз. Shangguan et al. изучали цветки роз в разные периоды сбора, измеряли общее содержание флавоноидов в цветках роз в разные периоды сбора и оценивали их антиоксидантную активность по способности поглощать DPPH и гидроксильные радикалы. Они исследовали корреляцию между общим содержанием флавоноидов и антиоксидантной активностью, но не изучали общее содержание флавоноидов в цветках роз разного происхождения. В настоящее время существует множество исследований, посвященных розам, но мало сообщений о стандартах качества роз. Современные фармакологические исследования показали, что гиперозид и изокверцитрин обладают антиоксидантным действием против стресса и апоптоза клеток, против острого повреждения печени, противовоспалительным, антидепрессивным, сосудозащитным и другими эффектами, которые согласуются с эффектом успокоения печени и снятия депрессии в розах. Это свидетельствует о том, что гиперозид и изокверцитрин являются одними из основных активных компонентов в розах. При определении содержания цветков розы в китайской фармакопее издания 2020 года для ограничения общего количества гиперозида и изокверцитрина используется только метод изократического элюирования. При таких условиях хроматографирования отражается только информация о гиперозиде и изокверцитрине, но она не может полностью отразить качество цветков розы. Информация о других характерных компонентах, таких как флавоноиды и фенольные кислоты, не может быть отражена в полном объеме. Спектр отпечатков пальцев может всесторонне отразить химические компоненты, содержащиеся в традиционной китайской медицине, и стал важным средством всестороннего контроля качества традиционной китайской медицины. Исходя из этого, в данном эксперименте был разработан метод отпечатков UPLC для цветков розы и одновременно измерено общее количество флавоноидных компонентов, гиперозида и изокверцитрина, в условиях отпечатков, чтобы достичь качественного и количественного контроля цветков розы исключительно с помощью методов отпечатков. Кластерный анализ и анализ главных компонент были объединены для оценки цветков роз различного происхождения, что заложило основу для исследования контроля качества цветков роз. Кроме того, этот метод применим к стандартам качества роз одного семейства и рода, а также может быть использован для идентификационных исследований роз и розариев.

 

Определение метода подготовки и хроматографических условий для исследуемого образца. В данном эксперименте исследовались растворитель для экстракции, метод экстракции, время экстракции и соотношение твердого и жидкого вещества. Хроматографический метод использовался для максимизации информационного содержания, достижения наилучшей эффективности экстракции и обеспечения стабильности метода. В качестве растворителя для экстракции использовали метанол 50%, затем 30 минут ультразвуковой обработки и соотношение твердого вещества и жидкости 1,0 г: 50 мл в качестве метода пробоподготовки. Что касается условий хроматографирования, то были исследованы различные хроматографические колонки, системы подвижной фазы, температура колонок, скорость потока и длина волны обнаружения. После сравнения было установлено, что при выборе Agilent SB C18 в качестве хроматографической колонки, ацетонитрила 0,2% фосфорной кислоты в качестве подвижной фазы, температуры колонки 35 ℃, скорости потока 0,4 мл/мин, форма пиков и степень разделения хроматографических пиков были хорошими; тестовый раствор сканировался на полной длине волны под УФ видимым светом при 190-400 нм, и результаты показали, что общие пики спектра отпечатков пальцев при 254 нм имели высокие значения отклика и хорошие формы пиков. Более того, максимальное поглощение гиперозида и изокверцитрина наблюдалось при 254 нм, поэтому 254 нм было выбрано в качестве длины волны обнаружения.
Анализ спектров отпечатков пальцев и результаты определения содержания. В данном исследовании использовалась программа "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (версия 2012 года) для проведения анализа сходства спектров отпечатков пальцев 15 партий цветков розы. Было обнаружено в общей сложности 30 общих пиков, а сходство спектров отпечатков пальцев 15 партий образцов превышало 0,95, что свидетельствует о постоянстве химического состава цветков розы из разных партий. В общей сложности 10 характерных пиков были идентифицированы путем сравнения с эталонными стандартами, из которых 8 были флавоноидами. С помощью кластерного анализа и анализа главных компонент для анализа спектров отпечатков пальцев роз разного происхождения, когда расстояние кластеризации составляет 10, розы из разных партий можно разделить на 5 категорий, что указывает на то, что розы разного происхождения имеют определенные различия. Анализ PCA показывает, что существуют определенные различия в качестве роз из разных регионов. Измеряя содержание гиперозида и изокверцитрина в 15 партиях цветков роз, общее содержание гиперозида и изокверцитрина составило 3,88-8,67 мг/г, что выше фармакопейного значения 0,38%. Это указывает на то, что все 15 партий цветков розы являются квалифицированным лекарственным сырьем, с самым высоким общим содержанием гиперозида и изокверцитрина в городе Чжоукоу, провинция Хэнань.
Разработанный метод отпечатков пальцев может быть применен для оценки качества роз. Спектры отпечатков пальцев 15 партий лекарственного сырья розы были проанализированы с помощью программы "Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (версия 2012 года), и в общей сложности было выявлено 22 общих пика. Сходство спектров отпечатков пальцев 15 партий лекарственного сырья розы составило более 0,95. Роза и шиповник относятся к семейству Rosaceae и могут быть различимы по морфологическим, микроскопическим и физико-химическим характеристикам. Однако до сих пор не было сообщений об идентификации по отпечаткам пальцев. Отпечаток пальца, полученный с помощью UPLC в данном исследовании, может быть использован для идентификации розы и розария. Из сравнения спектров отпечатков видно, что они имеют 15 общих компонентов, при этом роза имеет 10 эксклюзивных компонентов, а роза - 5 эксклюзивных компонентов.
На основе создания UPLC отпечатков пальцев цветков роз, это исследование идентифицировало несколько флавоноидных компонентов и оценило их с помощью химического метода распознавания образов; Создан метод определения содержания гиперозида и изокверцитрина в розах, обеспечивающий основу для контроля качества роз. Этот метод прост, точен и может послужить основой для последующих исследований роз.