Исследование оценки качества Bombyx mori методом химического распознавания образов в сочетании с ВЭЖХ-фингерпринтом
Bombyx mori - один из широко используемых в клинической практике препаратов для животных, применяемый в основном для лечения таких заболеваний, как ветряная мокрота печени, судороги, инфантильная пугливость, столбняк и др. Его источником является высушенное тело личинок 4-5-го возраста шелкопряда Bombyx mori Linnaeus, которые были заражены Beauveria bassiana (Bals.) Vuillart и погибли. Химические исследования показали, что его основными действующими веществами являются белки, аминокислоты, флавоноиды и другие компоненты. Современные фармакологические исследования показали, что богатый белками экстракт Bombyx mori оказывает противоэпилептическое, иммуномодулирующее и ингибирующее действие на рост опухоли G7 у мышей-носителей, усиливает защитный эффект, способствует восстановлению двигательных нарушений, вызванных MPTP у мышей с болезнью Паркинсона, предотвращает истощение дофамина и так далее.
Особенность шелкопряда, питающегося только листьями шелковицы, обусловливает богатое и разнообразное поглощение, трансформацию и метаболизм основных флавоноидов, содержащихся в листьях шелковицы, в его организме. Исследования показали, что после заражения Fusarium oxysporum флавоноиды в организме шелкопряда подвергаются биотрансформации. Например, такие флавоноиды, как кверцетин и каэмпферол, превращаются в кверцетин-7-O - β - D-4-O-метилглюкозид и каэмпферол-7-O - β - D-4-O-метилглюкозид посредством реакции 4-O-метилглюкозилирования. Xing et al. обнаружили, что с увеличением времени смерти содержание и трансформация флавоноидов в организме также изменяются, и предположили, что кверцетин 7-O - β - D-4-O-метилглюкозид и каэмпферол-7-O - β - D-4-O-метилглюкозид могут быть использованы в качестве одного из показателей контроля качества. Таким образом, флавоноиды могут служить важными индикаторами для оценки качества шелкопряда.

Сочетание спектра отпечатков пальцев и распознавания химических образов является эффективным методом оценки качества традиционной китайской медицины, который широко используется для оценки качества традиционной китайской медицины, отваров китайской медицины, гранул формулы и т.д. В настоящее время проводятся различные исследования спектров отпечатков пальцев, связанных с шелкопрядом, включая ультрафиолетовые отпечатки пальцев, инфракрасные отпечатки пальцев, ВЭЖХ, ВЭЖХ и спектры отпечатков белков. Категории состава включают водорастворимые компоненты, липидорастворимые компоненты, спирторастворимые компоненты и т.д. Однако существуют проблемы, связанные с низкой эффективностью разделения и ограниченным количеством идентификационных пиков, что затрудняет определение их качественных характеристик. Исследователи показали, что шелкопряды, произведенные в Сычуани, имеют лучшее качество и более высокий уровень Beauveria bassiana по сравнению с другими регионами, такими как Гуанси, Юньнань и Чжэцзян. Несмотря на то, что было проведено несколько исследований химического состава и контроля качества Bombyx mori, в настоящее время не существует хорошего метода контроля качества из-за его сложного состава и низкого содержания. Поэтому в данном исследовании с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии были получены спектры отпечатков пальцев 20 партий лекарственного сырья шелкопряда различного происхождения, а также проведено исследование дифференциации путем сочетания таких методов химической идентификации, как анализ сходства, кластерный анализ и анализ главных компонент. В соответствии с требованиями к препарату шелкопряда, изложенными в Китайской фармакопее издания 2020 года, были определены содержание влаги, общая зольность, содержание нерастворимой в кислоте золы и экстракт. Содержание эффективного ингредиента Beauveria bassiana определялось по предыдущему методу исследовательской группы. Цель исследования - всесторонне оценить качество лекарственных материалов различного происхождения, обеспечить научную основу для контроля качества и улучшения стандартов лекарственных материалов шелкопряда, а также предоставить ссылку для исследования других лекарственных материалов.

В данном эксперименте исследовались условия предварительной обработки, такие как метод экстракции, растворитель для экстракции и время экстракции, и было установлено, что метод экстракции (экстракция под рефлюксом, ультразвуковая экстракция) оптимален для ультразвуковой экстракции, растворитель для экстракции (метанол, метанол 80%, ацетонитрил и вода) оптимален для метанола 80%, а время экстракции (15, 30, 45 минут) оптимально для 30 минут. Установленный отпечаток пальца шелкопряда имеет сходство от 0,92 до 0,99, что является относительно высоким показателем и служит основой для оценки качества шелкопряда.
Спектр отпечатков пальцев, созданный нашим исследовательским институтом, в основном сосредоточен на флавоноидах, содержащихся в лекарственном сырье Bombyx mori. Ванг и др. использовали методы сетевой фармакологии и молекулярного докинга для изучения результатов, которые показали, что кверцетин, каэмпферол и другие компоненты могут быть основной материальной базой для способности Bombyx mori снимать духоту и спазмы. Многочисленные исследования также показали, что кверцетин и каэмпферол являются одними из основных активных ингредиентов при лечении эпилепсии. Поскольку Bombyx mori является ключевой травой для облегчения ветра и спазмов, одной из субстанций, обусловливающих ее действие, могут быть флавоноиды. Кроме того, в данном исследовании был проведен корреляционный анализ между площадью каждого общего пика и характеристиками, экстрактами, общей зольностью и содержанием белого мускардина в лекарственном сырье. Результаты показали, что характеристики поперечного сечения положительно коррелировали с характеристиками поверхности, длиной лекарственного сырья и содержанием белого мускардина, а также положительно коррелировали с площадями пиков 1, 2, 3, 4, 6 и 7. После сравнения пики 1, 2, 4, 6 и 7 были идентифицированы как рутин, гиперозид, астрагалозид, кверцетин и каэмпферол, которые являются основными флавоноидами в листьях шелковицы. Это указывает на то, что трансформация флавоноидов в процессе формирования шелковицы связана со "стекловидным телом" поперечного сечения. Существует сильная корреляция между качеством лекарственных трав и формикарием, что также подтверждает характерный для качества пункт "белый цвет, прямые полосы, черные и яркие поперечные сечения предпочтительны для шелкопряда" с древних времен.

Таким образом, спектр отпечатков пальцев, установленный в данной статье, не только включает возможные компоненты материальной основы фармакологического эффекта "Сифэн Чжицзин" шелкопряда, но и имеет определенную корреляцию с показателями качества самого лекарственного сырья шелкопряда, что может всесторонне отразить качество лекарственного сырья шелкопряда и обеспечить научную основу для контроля качества лекарственного сырья шелкопряда. При разработке стандартов контроля качества лекарственного сырья Cordyceps sinensis следует в полной мере учитывать, что оно представляет собой комплекс "бактерий насекомого-листоеда", и для всесторонней оценки его качества следует использовать множество показателей, устанавливая более научный и обоснованный стандарт качества лекарственного сырья.