A Xihuangcao gyógynövények négy eredeti növényének UPLC jellegzetes spektrumának azonosítása
A Xihuang Grass az Öt Hegyhát déli részén található egyedülálló kínai gyógynövény, amelynek hatása a hőtisztítás és a nedvesség eltávolítása, a vér hűtése és a pangás megszüntetése. Nedves hőségsárgaság, hasi puffadás és hipochondriás fájdalom, nedves hőség hasmenés, hőtoxin hasmenés és traumás sérülések esetén alkalmazzák. Az Öt Hegyhát déli részén gyakran használt klinikai gyógyszer, és a híres hagyományos kínai szabadalmi gyógyszerek és egyszerű készítmények nagy választékú "gyulladáscsökkentő és epehajtó tabletták" receptjeinek nyersanyaga is. A Kínai Gyógyszerkönyv (2020-as kiadás, 4. kötet) a Rabdosia lophanthoides (Buch. - Ham. ex D. DON) H. Hara vagy Rabdosia serora (Maxim.) H. Hrar, a Labiatae családba és a Rabdosia nemzetségbe tartozó növény szárított föld feletti részeként tartja nyilván. A Guangdong tartományi kínai gyógynövény-gyógyászati szabványokban szereplő eredeti növény a Rabdosia lophanthoides R serra、 Fonalas mintás illatos tea és zöldség R Lophanthoides és rostos virágú változata R lophanthoides var. graciliflora(Benth.) H. Hrar。 A Xihuangcao gyógyászati anyagok csíraplazmaforrásainak kutatása és rendszerezése során kutatócsoportunk tagjai megállapították, hogy az ugyanahhoz a nemzetséghez tartozó Rabdosia stracheyi (Benth. ex Hook. f.) Hara növényt a népi kultúrában is gyakran használják Xihuangcao gyógyászati anyagként. E növények hasonló morfológiai jellemzői miatt nehéz megkülönböztetni a száraz gyógyászati anyagokat megjelenésük alapján, és mindig is fennállt a zűrzavar jelensége a Xihuangcao kereskedelmi gyógyászati anyagok fajtakészleteiben. Ezért nagy jelentőséggel bír a különböző Huangcao-típusok azonosítási módszereinek kidolgozása a klinikai gyógyszerbiztonság és hatékonyság biztosítása és javítása érdekében.

A Xihuangcao gyógyászati anyagok különböző eredeti növényeinek azonosítását hagyományosan a morfológia és a mikroszkópia szempontjai alapján tanulmányozták. Mivel azonban a száraz gyógyászati anyagok gyakran gyűröttek és töröttek, nehéz a pontos és gyors azonosításuk. Az elmúlt években a tudósok a DNS-molekulák és a kémiai összetevők szintjén végeztek azonosítási vizsgálatokat az eredeti növényeken. A molekuláris azonosítás azonban csak fajszinten képes különbséget tenni a Rabdosia serora és a Lycaena angustifolia között, így nehéz megkülönböztetni a Lycaena angustifolia eredeti és változatos fajtáit. Ami a kémiai összetétel kutatását illeti, egyes tudósok úgy vélik, hogy a Fourier-transzformációs infravörös spektroszkópia és a kétdimenziós korrelációs infravörös spektroszkópia képes elérni a Xihuangcao, a bélelt illatos teás zöldség és a szálas virágú és keskeny alapon termő fajták azonosítását. Néhány tudós a kémiai összetétel-tartalom és az ujjlenyomat-spektrumok azonosítására is végzett kutatásokat, de a kísérleti eredmények nem tudják jól megkülönböztetni a bélelt illatos teás zöldség eredeti fajtáját a változataitól. Az utóbbi években a kemometriai módszereket egyre szélesebb körben használják a hagyományos kínai gyógyászat kromatográfiás elemzésében. A kromatográfiás elemzés által generált nagy mennyiségű adat további elemzésére és feldolgozására alkalmasak, és a kromatográfiás elemzéssel kombinálva egyre fontosabb szerepet játszanak a hagyományos kínai gyógyászat minőségellenőrzésében. Az ultra nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (UPLC) előnye a rövid elemzési idő, a jó elválasztási hatás és a nagy érzékenység. Ezért ez a tanulmány az UPLC-t használta a négy különböző alapnövényből, nevezetesen a Xihuangcao, a Xianwen Xiangchacai, a Xianxiang Xiangchacai és a Longye Xiangchacai 32 tétel összegyűjtött gyógyászati anyagának jellemző spektrumának vizsgálatára, és kemometriai módszerekkel, például klaszterelemzéssel, főkomponens-elemzéssel és részleges legkisebb négyzetek diszkriminancia-elemzéssel kombinálva, hogy megkülönböztesse és azonosítsa ezt a négy alapnövényt, annak érdekében, hogy értékes betekintést nyújtson a Xixi számára. Referenciát nyújt a Huangcao gyógyászati anyagok azonosításához, valamint minőségük elemzéséhez és értékeléséhez.

 

Ebben a tanulmányban a vizsgálati oldat előállítási módszereit és kromatográfiás körülményeit vizsgálták és optimalizálták. Az extrakciós oldószerek (metanol, 80% metanol, 60% metanol) vizsgálati eredményei azt mutatták, hogy amikor metanolt használtak extrakciós oldószerként, a kapott minta kromatogramja több kromatográfiás csúcsot, viszonylag nagyobb csúcsterületeket és stabil alapvonalat mutatott, ami jobban tükrözte a Xihuangcao gyógyászati anyag kémiai összetételét. Ezért a Xihuangcao gyógyászati anyag jellegzetes spektrumához a metanolt választották extrakciós oldószerként; A hullámhosszok (250, 254, 260, 280 nm) mérési eredményei azt mutatták, hogy 254 nm-en sok kromatográfiás csúcs volt, és az egyes csúcsok mérete egyenletes volt. Ezért a 254nm-t választottuk detektálási hullámhossznak; A mobil fázisok (metanol -0,1% hangyasav víz, acetonitril -0,1% hangyasav víz, 0,1% hangyasav metanol -0,1% hangyasav víz és 0,1% hangyasav acetonitril -0,1% hangyasav víz) vizsgálati eredményei azt mutatták, hogy metanol -0.1% hangyasav-vizet használtunk mobilfázisként az elúcióhoz, az alapvonal lapos volt, és az elválasztási fok és a csúcs alakja jó volt; Az oszlophőmérséklet és az áramlási sebesség vizsgálatának eredményei azt mutatták, hogy az egyes kromatográfiás módszerek elválasztási hatékonysága akkor volt a legjobb, amikor az oszlop hőmérséklete 30 ℃ és az áramlási sebesség 0,3mL/min volt.

Ebben a tanulmányban az UPLC-t használták a Xihuangcao gyógynövény négy alapnövényének azonosítására alkalmazható jellegzetes térkép létrehozására. Az alapvonal lapos volt, az elválasztási fok jó volt, és a közös csúcsok száma nagy volt. A Xihuangcao, a Xianwen Xiangchacai, a Xianxiang Xiangchacai és a Longye Xiangchacai megállapított kontrolltérképén 19, 24, 26 és 21 közös csúcsot kalibráltak. A közös csúcsok különbségei alapján a négy alapnövényt előzetesen meg lehet különböztetni. A Xianwen Xiangchacai és a Longye Xiangchacai begyűjtött tételeinek kis száma miatt, a kutatási folyamat hibáinak elkerülése érdekében a közös csúcsok vizsgálatakor a magasabb válaszértékekkel, jobb elválasztási fokkal és csúcsformával rendelkező kromatográfiás csúcsokat választottuk ki a kalibráláshoz. A hasonlóságértékelés eredményei azt mutatják, hogy a származási helybeli különbségek miatt bizonyos különbségek vannak az azonos eredeti gyógyászati anyagok között; a különböző alapgyógyászati anyagok között is vannak különbségek, amelyek közül a Xihuangcao és a másik három alapgyógyászati anyag közötti hasonlóság viszonylag alacsony és egyértelműen megkülönböztethető; a Xianhua illatos teás zöldség és a Xianwen illatos teás zöldség közötti hasonlóság viszonylag magas, és a Changye illatos teás zöldség és a Xianhua illatos teás zöldség közötti hasonlóság szintén viszonylag magas. Ennek oka az lehet, hogy a Xianhua illatos teanövény, a Xianwen illatos teanövény és a Changye illatos teanövény mind a ráncos levelű illatos teanövények csoportjába tartozó növények, hasonló kémiai összetételű típusokkal. A meglévő kutatások kimutatták, hogy a Xihuangcao gyógyászati anyagok eredeti növényeiben található kémiai összetevők típusai között kevés különbség van, amelyek főként terpéneket, flavonoidokat, fenolsavakat és szterolokat tartalmaznak. Ezek közül a diterpének a Xihuangcao gyógynövény fontos összetevői. Az eredeti Xihuangcao növényben található diterpének fő típusa az enantiomer kaempferol típus, míg a lineáris illatos teanövény és annak rostos virágú változata, valamint a hosszú levelű illatos teanövény főként a gyanta típusú és az enantiomer gyanta típusú diterpéneket tartalmazza. Feltételezhető, hogy a Xihuangcao és a lineáris illatos teanövény, a rostos illatos teanövény, valamint a hosszú levelű illatos teanövény közötti alacsony hasonlóság a diterpének típusainak különbségével függhet össze, míg a lineáris illatos teanövény, a rostos illatos teanövény és a hosszú levelű illatos teanövény közötti különbségek a megfelelő összetevők tartalmával és típusával függhetnek össze.
A főkomponens-elemzés kimutatta, hogy a Xihuangcao az egyes alapelemek főkomponens-pontszámának különbsége alapján tovább különböztethető meg a bélelt illatos teás zöldségtől, az illatos teás zöldségtől és a hosszú levelű illatos teás zöldségtől. A részleges legkisebb négyzetek diszkriminanciaanalízise háromféle ősnövényt, nevezetesen a vonalas mintázatú illatos teanövényt, a szálas illatos teanövényt és a hosszú levelű illatos teanövényt képes megkülönböztetni, jelentős osztályozási hatásokkal. A kapott 15 osztályozási marker a fő jellemző komponensek, amelyek különbséget okoznak a három között, és amelyek nagy jelentőséggel bírnak e három különböző primitív növény megkülönböztetésében. Ennek a 15 kromatográfiás csúcsnak az azonosítása még további kutatásokat és azonosítást igényel.
Összefoglalva, a Xihuangcao négy alapnövényének UPLC jellegzetes térképei, amelyeket ebben a tanulmányban állítottak fel, a jellegzetes csúcsok kalibrálása és a hasonlóság értékelése révén előzetesen megkülönböztethetik a négy különböző alapnövényt. Az eredeti növények négy típusának jobb megkülönböztetése és a differenciális komponensek keresése érdekében ez a tanulmány a továbbiakban klaszterelemzést, főkomponens-elemzést és részleges legkisebb négyzetek diszkriminancia-elemzést alkalmazott a négy Xihuangcao-i eredeti növénytípus teljes megkülönböztetésére. A kutatási eredmények tudományos módszert és referenciát nyújtanak a Xihuangcao gyógyászati anyagokban található eredeti növények azonosításához, minőségelemzéséhez és értékeléséhez.