A rózsa minőségének elemzése UPLC ujjlenyomat és két kémiai komponens meghatározása alapján
A rózsavirág a rózsafélék családjába tartozó Rosa chinensis Jacq. szárított virága. Rózsavörös, győzedelmes hó, karcsú vendég, harcias hóvörös, négy évszakos virág, értékes holdvirág és fényes hópehely néven is ismert, és a virágok királynőjeként is ismert. A rózsavirágot először a Compendium of Materia Medica-ban jegyezték fel. Édes ízű, meleg természetű, és a máj meridiánjához tartozik. Hatásuk a vérkeringés elősegítése, a menstruáció szabályozása, a máj megnyugtatása és a depresszió enyhítése. Használhatók menstruációs zavarok, dysmenorrhoea és amenorrhoea kezelésére; vér pangás, duzzanat és fájdalom, égési sérülések, esésből származó sérülések, tályogok és scrofula kezelésére. Országszerte ültetik, főleg Yunnanban, Hubeiban, Sichuanban és Gansuban, és egész évben betakarítható. A rózsa kémiai összetétele gazdag és változatos, beleértve a flavonoidokat, tanninokat, fenolsavakat, illóolajokat, pigmenteket és glikozid vegyületeket.
Az elmúlt években a rózsák kutatása bizonyos előrelépést ért el. Wu és munkatársai az UPLC-Q-Tof-MS technológiát használták a rózsák és a rózsák közötti nem illékony kémiai komponensek közötti különbségek tanulmányozására. Az eredmények azt mutatták, hogy a rózsában 43 vegyületet, a rózsában pedig 25 vegyületet mutattak ki. A rózsában kimutatott fő komponensek azonban fenolos glikozidok, tanninok és foszfolipidek voltak, az egyetlen kimutatott flavonoid komponens pedig a kaempferol-glükozid volt. Az irodalmi kutatási jelentések szerint a rózsavirágok fő aktív összetevői a flavonoidok. Shangguan és munkatársai a rózsavirágokat különböző betakarítási időpontokban vizsgálták, mérték a rózsavirágok teljes flavonoidtartalmát különböző betakarítási időszakokban, és értékelték antioxidáns aktivitásukat a DPPH- és hidroxilgyökök elnyelésére való képességük alapján. Feltárták az összefüggést az összes flavonoidtartalom és az antioxidáns aktivitás között, de nem vizsgálták a különböző eredetű rózsavirágok összes flavonoidjait. Jelenleg sok tanulmány foglalkozik a rózsával, de kevés jelentés szól a rózsa minőségi szabványairól. A modern farmakológiai kutatások megállapították, hogy a hiperozid és az izoquercitrin antioxidáns stressz és sejt apoptózis, akut májkárosodás elleni, gyulladáscsökkentő, antidepresszáns, érvédő és egyéb hatásokkal rendelkezik, amelyek összhangban vannak a rózsák májnyugtató és depresszió enyhítő hatásával. Ez azt jelzi, hogy a hiperozid és az izoquercitrin a rózsák egyik fő hatóanyaga. A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadásában a rózsavirágok beltartalmának meghatározása során csak az izokratikus elúciós módszert alkalmazzák a hiperozid és az izoquercitrin teljes mennyiségének korlátozására. Ez a kromatográfiás feltétel csak a hiperozid és az izokeritrin információit tükrözi, de nem képes teljes mértékben tükrözni a rózsavirágok minőségét. Az egyéb jellemző komponensek, például a flavonoidok és fenolsavak információi nem tükröződnek átfogóan. Az ujjlenyomat-spektrum átfogóan képes tükrözni a hagyományos kínai gyógyászatban található kémiai komponenseket, és a hagyományos kínai gyógyászat átfogó minőségellenőrzésének fontos eszközévé vált. Ennek alapján ez a kísérlet UPLC-ujjlenyomatos módszert hozott létre a rózsavirágok számára, és egyidejűleg mérte a flavonoid komponensek, a hiperozid és az izoquercitrin teljes mennyiségét az ujjlenyomatos körülmények között, annak érdekében, hogy a rózsavirágok minőségi és mennyiségi ellenőrzését kizárólag ujjlenyomatos módszerekkel érje el. A klaszterelemzést és a főkomponens-elemzést kombinálták a különböző eredetű rózsavirágok értékeléséhez, megalapozva ezzel a rózsavirágok minőségellenőrzési kutatását. Ezenkívül ez a módszer alkalmazható az azonos családba és nemzetségbe tartozó rózsák minőségi szabványaira is, és alkalmazható a rózsák és rózsák azonosítási kutatására.

 

A vizsgálati minta előállítási módszerének és kromatográfiás körülményeinek meghatározása. Ebben a kísérletben az extrakciós oldószert, az extrakciós módszert, az extrakciós időt és a szilárd-folyadék arányt vizsgálták. A kromatográfiás módszert az információtartalom maximalizálása, a legjobb extrakciós hatékonyság elérése és a módszer stabilitásának biztosítása érdekében alkalmaztuk. Végül extrakciós oldószerként 50% metanolt használtak, amelyet 30 perces ultrahangos kezelés és 1,0 g szilárd-folyadék arány követett: 50ml mint mintaelőkészítési módszer. A kromatográfiás feltételek tekintetében különböző kromatográfiás oszlopokat, mobilfázis-rendszereket, oszlophőmérsékleteket, áramlási sebességeket és detektálási hullámhosszakat vizsgáltak. Összehasonlítás után megállapították, hogy az Agilent SB C18 kromatográfiás oszlopot, az acetonitril 0,2% foszforsavat mozgófázisként, az oszlop 35 ℃ hőmérsékletét, 0,4 ml/perc áramlási sebességet választva a kromatográfiás csúcsok csúcsformája és elválasztási foka jó volt; A tesztoldatot teljes hullámhosszon, UV látható fényben 190-400 nm-en szkennelték, és az eredmények azt mutatták, hogy a 254 nm-es ujjlenyomat spektrum közös csúcsai magas válaszértékekkel és jó csúcsformákkal rendelkeztek. Ezenkívül a hiperozid és az izokeritrin maximális abszorpcióját 254 nm-en figyelték meg, ezért 254 nm-t választották detektálási hullámhossznak.
Az ujjlenyomat-spektrum és a tartalom meghatározásának eredményeinek elemzése. Ez a tanulmány a "Kínai gyógynövénykromatográfiás ujjlenyomat hasonlóságértékelő szoftver" (2012-es verzió) segítségével végezte el a hasonlósági elemzést 15 tétel rózsavirág ujjlenyomat-spektrumán. Összesen 30 közös csúcsot detektáltak, és a 15 tételnyi minta ujjlenyomat-spektrumának hasonlósága nagyobb volt, mint 0,95, ami a különböző tételekből származó rózsavirágok kémiai összetételének következetességét jelzi. Összesen 10 jellegzetes csúcsot azonosítottak a referenciastandardokkal való összehasonlítás révén, amelyek közül 8 flavonoid volt. A különböző eredetű rózsák ujjlenyomat-spektrumának elemzéséhez használt klaszterelemzés és főkomponens-elemzés segítségével, ha a klaszterezési távolság 10, a különböző tételekből származó rózsák 5 kategóriába sorolhatók, ami azt jelzi, hogy a különböző eredetű rózsák bizonyos különbségekkel rendelkeznek. A PCA-elemzés azt mutatja, hogy a különböző régiókból származó rózsák minőségében bizonyos különbségek vannak. A hiperozid- és izoquercitrin-tartalom mérésével 15 tétel rózsavirágban a hiperozid- és izoquercitrin-tartalom összesen 3,88-8,67 mg/g volt, ami magasabb, mint a gyógyszerkönyvben szereplő 0,38% érték. Ez azt jelzi, hogy mind a 15 tétel rózsavirág minősített gyógyászati anyag, a legmagasabb hiperozid- és izoquercitrin-tartalommal Zhoukou városban, Henan tartományban.
A létrehozott ujjlenyomat-módszer alkalmazható a rózsák minőségének értékelésére. A "Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (2012-es verzió) segítségével 15 tétel rózsa gyógyászati anyag ujjlenyomat-spektrumát elemeztük, és összesen 22 közös csúcsot azonosítottunk. A 15 tétel rózsa gyógyászati anyag ujjlenyomat-spektrumának hasonlósága nagyobb volt, mint 0,95. A rózsa és a rózsa egyaránt a Rosaceae család tagjai, és morfológiai, mikroszkópos és fizikai-kémiai jellemzőik alapján megkülönböztethetők. Az ujjlenyomatos azonosításról azonban nem készültek jelentések. Az ebben a tanulmányban megállapított UPLC-ujjlenyomat felhasználható a rózsa és a rózsa azonosítására. Az ujjlenyomat-spektrumok összehasonlításából látható, hogy a kettőnek 15 közös összetevője van, a rózsának 10 kizárólagos összetevője, a rózsának pedig 5 kizárólagos összetevője.
A rózsavirágok UPLC-ujjlenyomatának megállapítása alapján ez a tanulmány több flavonoid komponenst azonosított és értékelte őket kémiai mintafelismerési módszerrel; Módszer létrehozása a hiperozid és az izokeritrin tartalmának meghatározására a rózsákban, ami alapot nyújt a rózsák minőségellenőrzéséhez. Ez a módszer egyszerű, pontos, és referenciaként szolgálhat a rózsákkal kapcsolatos későbbi kutatásokhoz.