Összehasonlító tanulmány az UPLC jellemző spektrumokról és a Qingpi gyógyászati anyagok különböző specifikációinak multi index komponens tartalmáról
Qingpi először a "Pearl Sac" című könyvben jelent meg. Li Shizhen azt mondta: "A Qingju héja az ókorban haszontalan volt, de csak a Song-dinasztia idején kezdték el használni az orvosszakértők". Csak a Song-dinasztia idején hasonlították össze az éretlen és az érett narancshéjat, és megállapították, hogy kissé eltérő gyógyhatással rendelkeznek, ezért tettek különbséget a Qingju-héj és a Huangju-héj között. A Qingpi a Rutaceae családba tartozó Citrus reticulata Blanco és termesztett fajtáinak szárított vagy éretlen gyümölcshéjára utal. A gyógyászatban használt Qingpi két különböző specifikációja létezik: a fiatal, május és június között a földről lehulló gyümölcsök begyűjtése, napon történő szárítása, amelyet általában "Geqingpi" néven ismernek; az éretlen gyümölcsök július-augusztus közötti begyűjtése, hosszanti irányban négy sziromra vágása a héjtól a tövükig, az összes szirom eltávolítása és napon történő szárítása, amelyet általában "Négy virág zöld héjaként" ismernek. A zöld héj meleg természetű, keserű és csípős ízű. Visszatér a máj, az epehólyag és a gyomor meridiánjaihoz. Hatására nyugtatja a májat és lebontja a qi-t, csökkenti a felhalmozódást és feloldja a stagnálást. Mellkasi és bordafájdalom, sérvfájdalom, mellfétis, melltályog, ételfelhalmozódás és qi stagnálás, valamint hasi puffadás és fájdalom esetén alkalmazható. A Qingpi fő összetevői az illóolajok, flavonoidok, aminosavak stb. A modern farmakológiai vizsgálatok kimutatták, hogy a Qingpi gyomor-bélrendszeri szabályozó, epeáramlást elősegítő, ritmuszavar-ellenes, köptető és emlőgyulladás-gyógyító hatású. A zöldbőr két specifikációja kissé eltérő funkcionális javallatokkal rendelkezik. A zöld bőr egyik típusa elsősorban a qi stagnálásának megtörésére, míg a másik típus a máj szabályozására és a qi szabályozására összpontosít.
Ezenkívül a kettő összetételében is vannak kisebb különbségek. A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása különböző szabályokat hozott a zöld héj különböző specifikációinak jellemzőire és azonosítására vonatkozóan, és a tartalom meghatározására vonatkozó tételek csak a heszperidinre vonatkozó határértékekkel rendelkeznek. Li et al. kutatási eredményei azt mutatták, hogy a Geqingpiben a hezperidin és a szinomenin tartalma magasabb volt, mint a Sihuaqingpiben, míg az N-metil-amin és az illóolaj tartalma alacsonyabb volt. A négy komponens magas és alacsony tartalmának tendenciája a két különböző régióból származó specifikációban alapvetően azonos volt. Zhao és munkatársai GC-MS-t használtak az Eucommia ulmoides és az Eucommia ulmoides illóolajainak elemzésére, és megállapították, hogy kilenc vegyület, köztük a geraniol, a nerolidol és az α - izoterpinén, csak az Eucommia ulmoidesre jellemző. A fő komponensek, a limonén és a linalool több mint kétszerese volt az Eucommia ulmoidesének, míg a többi komponens tartalma nagymértékben változott. Yi és munkatársai arra is rámutattak, hogy a Geqingpi és a Sihuaqingpi összetételében bizonyos különbségek vannak, amikor gázkromatográfiával és folyadékkromatográfiával vizsgálták összetevőiket. A fenti tanulmányok mind arra utalnak, hogy a Geqingpi és a Sihuaqingpi kémiai összetétele között különbségek vannak.
Ez a tanulmány létrehozta a Qingpi és a Sihua Qingpi ultra nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (UPLC) jellemző spektrumát, kemometriai módszerekkel kombinálva, hogy összehasonlítsa a Qingpi két specifikációja közötti különbségeket, és összehasonlítsa az öt hatékony összetevő tartalmát a Qingpi gyógyászati anyagok két specifikációjában, referenciát biztosítva a Qingpi mennyiségi szabványainak javításához a két specifikációban.

 

A vizsgálati oldat elkészítése. Ebben a vizsgálatban egyfaktoros analízist alkalmaztunk az extrakciós oldószerek (metanol, 70% metanol, 50% metanol, etanol, 70% etanol, 50% etanol), az extrakciós módszerek (ultrahangos extrakció, melegítő reflux) és az extrakciós idők (15, 30, 45 perc) az egyes komponensek jellegzetes spektrumaira és tartalmi meghatározására, a kromatográfiás csúcs "teljes csúcsfelület/mintaméret" és a sinomenin, hesperidin, naringin és hesperidin tartalma értékelő indikátorok. Az eredmények azt mutatták, hogy a 70% metil-alkohol 30 percig tartó reflux melegítése volt a legjobb hatású.
Jellemzőtérképek létrehozása és elemzése. A jellemzőtérkép-vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy mind a Geqingpi, mind a Sihuaqingpi UPLC jellemzőtérképén 7 közös csúcs volt. A Geqingpi és a Sihuaqingpi öt jellegzetes komponensét azonosították referencia standardok segítségével, nevezetesen a sinomenint, a naringint, a hesperidint, a naringint és a hesperidint. Vizsgáltunk különböző vizes fázisokat (0,1% foszforsav és 0,1% hangyasav), két különböző típusú kromatográfiás oszlopot Waters ACQUITY HSS T3 (100mm × 2,1mm, 1,8 μ m), YMC Triart C18 (100mm × 2,1mm, 1.9 μ m), és összehasonlítottuk a különböző detektálási hullámhosszok (275 nm és 284 nm), oszlophőmérsékletek (38, 40, 42 ℃) és áramlási sebességek (0,28, 0,30, 0,32mL/min) hatását a Qingpi jellegzetes spektrumának kromatográfiás csúcsaira. Az eredmények azt mutatták, hogy a Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μ m) kromatográfiás oszlopot használva, 0,1% hangyasavval mint vizes fázissal, a 275 nm detektálási hullámhossz, 40 ℃ oszlophőmérséklet és 0,30mL/perc áramlási sebesség kromatográfiás körülmények között a kromatográfiás csúcsokat kaptuk. Az elválasztási fok jó, az alapvonal stabil, a kromatográfiás csúcsok száma magas, és a jel ennek megfelelően magas.
A Geqingpi és a Sihuaqingpi közötti kémiai összetételbeli különbség. Az ebben a tanulmányban megállapított Qingpi gyógyászati anyagok különböző specifikációinak UPLC jellegzetes spektrumai 7 közös csúcsot azonosítottak mind a Geqingpi, mind a Sihuaqingpi esetében, amelyek közül 5 jellegzetes csúcsot azonosítottak. Az 1. csúcsot szinomeninnek határozták meg; a 3. csúcs a Yunxiang pomelo héj glikozidja; a 4. csúcs a hesperidin; a 6. csúcs a Chenpi kivonat; a 7. csúcs a narancshéj kivonat. Ebben a tanulmányban a HCA, a PCA és az OPLS-DA segítségével a zöld héjú gyógynövények különböző specifikációit két kategóriába sorolták; a további elemzés azt mutatja, hogy az 1., 4. és 2. csúcsok által képviselt kémiai komponensek a Qingpi gyógynövények e két specifikációja közötti differenciális komponensek. Ezért ez a három komponens a Qingpi gyógynövények e két specifikációja közötti különbségtételhez szükséges további elemzés kiindulópontjaként használható.
A flavonoidok a Qingpi fő hatóanyagai. A Geqingpi és a Sihuaqingpi öt ismert flavonoid tartalmának meghatározási eredményei azt mutatták, hogy a Geqingpiben a sinomenin és a hesperidin tartalma magasabb volt, mint a Sihuaqingpiban, míg a Geqingpiben a naringin és a hesperidin tartalma alacsonyabb volt, mint a Sihuaqingpiban. Összességében a naringin-tartalom a Qingpi Yunxiangyupi két specifikációjában viszonylag hasonló volt. A független mintás t-próba elemzése azt mutatta, hogy a sinomenin, a hesperidin és a naringin tekintetében a különbségek statisztikailag szignifikánsak voltak. Ez az eredmény összhangban van Li et al. kutatási eredményeivel. A kísérletben vizsgált flavonoidok mellett az illóolaj is a Qingpi gyógynövények egyik hatékony összetevője. Zhao kutatása a Geqingpi és a Sihuaqingpi illóolajaival kapcsolatban kimutatta, hogy kilenc vegyület, köztük a geraniol, a nerolidol és az α - izoterpinén, csak a Geqingpiben található. A fő komponensek, a limonén és a linalool több mint kétszerese a Sihuaqingpinek. A klinikai alkalmazásban a Four Flower Green Skin funkcionális jelzései enyhébbek, mint a Geqing Skin-é, ami a Geqing Skin-hez képest a Four Flower Green Skin alacsonyabb hatóanyag-, például hesperidin- és sinomenin-, valamint illóolaj-tartalmával függhet össze. A vonatkozó szakirodalom szerint a Geqingpi egy fiatal gyümölcs, amelyet májustól júniusig gyűjtenek; a Négy virágos zöldbőrt július-augusztusban szedik le éretlen gyümölcsökből, és a kettő közötti különbség a szüreti időben és az érettségi szakaszban rejlik. A fenti eredményekből látható, hogy a különböző növekedési és fejlődési szakaszok befolyásolhatják a Qingpiben lévő hatóanyagok felhalmozódását. A szaporodási és fejlődési időszakban azonban a Qingpiben lévő hatóanyagok nem egyszerűen növekvő vagy csökkenő tendenciát mutatnak, hanem inkább némi növekedést és némi csökkenést: A csenpi kivonat és a heszperidin növekvő tendenciát mutat; a szimulin, a heszperidin és a naringin csökkenő tendenciát mutatott. Annak bizonyítására, hogy az e tartalmak közötti különbségek közvetlenül vagy közvetve a Qingpi különböző specifikációinak különböző hatékonysági fókuszaihoz vezetnek-e, további farmakológiai kísérletekre van szükség. A Qingpi két különböző specifikációjában lévő öt hatóanyag tartalmának különbsége alapján, a két hatás különböző hangsúlyozásával kombinálva, jobban megvalósíthatjuk a hagyományos kínai orvoslás szindróma megkülönböztetését és kezelését, és javíthatjuk a kezelés hatékonyságát, ha a receptet külön címkével látjuk el a klinikai alkalmazásokban való felhasználásra. Eközben, ha a jelenlegi gyógyszerkönyvi szabványok külön minőségi szabványokat állapítanak meg a Geqingpi és a Sihuaqingpi számára, az jobban elősegítheti a Qingpi gyógyászati anyagok minőségellenőrzését.