Az oleuropein tirozinázra gyakorolt gátló hatásának vizsgálata
A tirozináz (EC. 1.14.18.1) széles körben jelen van mikroorganizmusokban, állatokban, növényekben és emberekben, és fontos sebességkorlátozó enzim, amely részt vesz a melaninszintézis folyamatában. Expressziós szintje és aktivitása határozza meg a melaninszintézis sebességét és hozamát. A tirozináz aktivitásának gátlása javíthatja a bőrben lévő pigmentsejtek tirozináz anyagcseréjét, megakadályozhatja a pigmentáció kialakulását, és szerepet játszhat a szeplők, melaszma, öregségi foltok és a fehérítés kialakulásának megelőzésében. Az általánosan használt tirozináz inhibitorok, mint például a kvercetin és a hidrokinon, jó gátló képességgel rendelkeznek, de mellékhatásokat okozhatnak, mint például dermatitisz, bőrallergia és akár bőrrák. Ezért a biztonságos, hatékony és nem toxikus tirozináz inhibitorok keresése jelenleg forró kutatási téma. Jelenleg a kutatások kimutatták, hogy a fenolok, flavonoidok és származékaik, poliszacharidok, illóolajok, szerves savak, kumarinok és más vegyületek számos növényi kivonatban jó forrása a tirozináz inhibitoroknak.
Az oleuropein egy iridoid glikozid vegyület, amelyet a hidroxitirozol és az olajfa váza alkot, és az olajfa egészén eloszlik, a legnagyobb mennyiségben az olajfalevelekben, majd az olajbogyó termésében található. Az elmúlt években a hazai és külföldi tudósok által az oleuropein folyamatos elmélyült kutatásával megállapították, hogy különböző biológiai aktivitásokkal rendelkezik, mint például vírusellenes, daganatellenes, antibakteriális, antioxidáns, hipoglikémiás, vérnyomáscsökkentő, Alzheimer-kór elleni, bőrsebek védelmét szolgáló stb. tevékenységek. Kevés jelentés szól azonban az oleuropein tirozináz-aktivitásra gyakorolt hatásáról. E cikk célja, hogy elméleti alapot nyújtson az oleuropein mint fehérítő összetevő fejlesztéséhez és felhasználásához a tirozináz aktivitásra gyakorolt hatásának és hatásmechanizmusának tanulmányozásával.

Az enzimatikus reakciókban az enzimatikus reakció sebességét a termékek egységnyi idő alatt történő növekedésének mérésével fejezik ki. A kezdeti sebesség az enzimatikus reakció kezdetén egy bizonyos időn belüli sebességre utal, amelynél a meredekség szinte változatlan marad. Bizonyos szubsztrátkoncentráció mellett a termék-idő kapcsolat görbéjének zéró-tangensének meredekségéből kapjuk. Az enzimatikus reakció kezdeti sebességének mérésére szolgáló módszert általában az enzimaktivitás meghatározására használják, kevesebb zavaró tényezővel. Ebben a kísérletben az A475nm-es időgörbe 0-tól 5,3 perc reakcióidőig megközelítőleg lineáris összefüggést mutatott. Az idő növekedésével a görbe fokozatosan ellaposodott, a meredekség csökkent, és a reakciósebesség is csökkent. Ekkor a mért enzimaktivitás nem képviselhette a valódi enzimaktivitást, ezért az 5,3 perces reakcióidőnél mért reakciósebességet vettük kiindulási sebességnek.
A tirozináz in vitro aktivitásának gátlására irányuló kísérletet sejtkísérletekre és biokémiai kísérletekre osztják. Chan és munkatársai úgy vélik, hogy a sejtek képesek szimulálni a valós fiziológiai környezetet, és a tirozináz aktivitás sejtkísérleteken keresztül történő mérése megbízhatóbb, mint a tirozináz aktivitás közvetlen mérése, és jobban tükrözi a gátló aktivitást. Ebben a vizsgálatban az oleuropein gátló aktivitása a B16-sejtes tirozinázra és a gombai tirozinázra vonatkozóan különbségek mutatkoztak. Sejtszinten az oleuropein jobban gátolta a tirozináz aktivitást, mint a pozitív kontroll kvercetin. Ez összhangban van Li és munkatársai kutatási eredményeivel.
Amikor az emberi bőr ultraibolya sugárzásnak van kitéve, nagy mennyiségű reaktív oxigénfajtát (ROS) és szabad gyököket termel, amelyek felgyorsítják a bőr öregedését, a pigmentációt és a ráncok elmélyülését. A kutatások kimutatták, hogy a megnövekedett ROS aktiválja a tirozinázt azáltal, hogy az epidermiszben mozgósítja az alfa melanocita-stimuláló hormont, ami végül a melanocitákat melanin termelésére serkenti. Az antioxidánsok elősegítik a szervezet normális anyagcseréjét a reaktív oxigénfajok és a szabad gyökök eltávolításával, javítják a bőr állapotát, fokozatosan lebontják a pigmenteket, és így fehérítő szerepet játszanak. Wang és munkatársai megállapították, hogy az antioxidánsok, mint például a glicirrizinsav, a resveratrol, az oxidált resveratrol és a fenetil-rezorcin szinergista hatást fejt ki az antioxidáns aktivitás és a tirozináz gátlása között, amikor L-dopát használnak szubsztrátként, nagymértékben gátolva a tirozináz aktivitást. Az olíva keserű glikozid erős antioxidáns aktivitással rendelkezik. További vizsgálatot érdemel, hogy a tirozináz-aktivitás gátlása összefügg-e az antioxidáns aktivitással, és hogy van-e szinergista hatás az olajbogyó keserűglikozid és az antioxidánsok között.
A tirozináz kulcsfontosságú enzim a melanin szintézisében. A tirozináz aktivitásának gátlásával a melanin termelődése elnyomható, ezáltal elérve a fehérítő hatást. A vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy az oleuropein jelentős gátló hatással van a tirozinázra a B16 sejtekben és a gombai tirozinázra, és jó dózisfüggő összefüggést mutat. A kinetikai elemzés révén az oleuropein gomba tirozinázra gyakorolt gátló hatásának típusa reverzibilis, nem kompetitív gátlás, azaz az oleuropein kötődése a tirozinázhoz a szubsztrátkötőhelyen kívüli esszenciális csoporton történik. Az oleuropein nem csökkenti a tirozináz affinitását a szubsztráthoz (L-dopa), hanem inkább az enzim aktivitását gátolja az enzim katalitikus hatásának blokkolásával, csökkentve a Vm-t. Az olajbogyó keserűglikozid széles forrásspektrummal, nagy biztonsággal és jó antioxidáns aktivitással rendelkezik. Mint a fehérítő termékek potenciális nyersanyaga, széleskörű alkalmazási kilátásokkal rendelkezik.