A rebarbara lipidcsökkentő hatóanyagainak gyors szűrése kémiailag módosított L02 májsejtmembránnal biokompatibilis anyagok felhasználásával
A hagyományos kínai orvoslás hatóanyagainak szűrése főként az aktivitáskövetésre támaszkodik, a monomer komponensekkel mint szűrési objektumokkal, amelynek hátrányai a nagy munkaterhelés, a nehézkes működés és az alacsony hatékonyság. A hagyományos aktivitáskövető módszerekkel összehasonlítva a sejtmembrán-kromatográfia (CMC) az utóbbi években gyorsan fejlődő biológiai affinitáskromatográfiás technika, amelynek jellemzői a specifikus felismerés és a hatékony elválasztás. A CMC alapelve, hogy a sejtmembránt egy szilikagél hordozó felületéhez kötik, hogy állófázist képezzenek. A sejtmembrán-receptor specifikusan képes kötődni a gyógyszermolekulákhoz, és a gyógyszermolekulák és a sejtmembrán-receptorok közötti kölcsönhatás kromatográfiás elemzéssel tanulmányozható. A CMC egyesíti a kromatográfiás technológia, a sejt- és molekuláris biológia, valamint a receptor-farmakológia előnyeit, hogy a kromatográfiás oszlopon belül megközelítőleg dinamikusan szimulálni lehessen a gyógyszerhatóanyagok in vivo hatásfolyamatát; az általánosan használt adszorbensekkel, például az ioncserélő gyantákkal és a makropórusos adszorpciós gyantákkal összehasonlítva a CMC előnye, hogy a kromatográfiás elválasztást aktivitásszűréssel kombinálja. Könnyen kezelhető, gyors és stabil, valamint nagy érzékenységgel rendelkezik, így különösen alkalmas komplex rendszerek, például a hagyományos kínai gyógyászat hatóanyagainak szűrésére.
A sejtmembrán kromatográfia előkészítése során a sejtmembrán és a szilikagél hordozó különböző kötési formái alapján fizikai adszorpcióra és kémiai módosításra osztható. A fizikai adszorpciós sejtmembrán biológiai affinitáskromatográfiát magának a sejtmembránnak az összeolvadási hatását és a szilícium hidroxilcsoportok adszorpciós hatását kihasználva készítik a szilikagél felületén; Ez a fajta erő viszonylag gyenge, ami miatt a sejtmembrán könnyen leválik a hordozóról, ami a kromatográfiás oszlop rövid élettartamát eredményezi. A sejtmembrán kémiai módosítása a biológiai affinitáskromatográfiához kovalens kötést jelent a szilikagél és a sejtmembrán között; A szilikagél szilanolcsoportja kondenzációs reakción megy keresztül szilán kapcsolószerrel, aminocsoportok bevezetése érdekében, amelyek keresztkötést hoznak létre a glutaraldehid molekulákkal. A szabad aldehid funkciós csoport egyik vége a szilikagél felületén kapható; A sejtmembrán nagyszámú aminocsoportot tartalmaz, amelyek szobahőmérsékleten hajlamosak aldohamin-kondenzációs reakciókra, ezáltal megvalósítva a kovalens kapcsolatot a szilikagél és a sejtmembrán között. A kémiailag módosított sejtmembrán bioaffinitás kromatográfiában a hordozó szilikagél kovalensen kötődik a sejtmembránhoz, amely viszonylag stabil, és a sejtmembrán nem válik le könnyen, így meghosszabbítva a kromatográfiás oszlop élettartamát.

A rebarbara egy hiteles gyógynövény Gansu tartományból, és az egyik leggyakrabban használt hagyományos kínai gyógyszer a klinikai gyakorlatban; Farmakológiai hatásai antibakteriális, daganatellenes, gyulladáscsökkentő, vírusellenes és lipidcsökkentő. Számos tudós és kutatócsoport megerősítette a rebarbara lipidcsökkentő hatását korábbi tanulmányokban, és a kutatócsoportunk a 30% etanol kivonatot a lipidcsökkentés hatékony részeként szűrte a hiperlipidémiás patkányokban, de a specifikus farmakológiai anyag alapja még mindig nem világos; A kutatócsoport egy fizikai adszorpciós L02 májsejtmembrán biológiai affinitás kromatográfiás anyagot is készített, de a sejtmembrán leválása súlyos és a használata korlátozott. Ezt figyelembe véve ebben a kísérletben APTES módosított szilikagélt használtak hordozóként az L02 májsejtmembrán biológiai affinitás kromatográfiás anyagának előállításához. A sejtmembrán felületén lévő célpontot a rebarbara 30% etanolos kivonatában lévő kémiai komponensek specifikus adszorbeálására használtuk. HPLC-analízist végeztünk az egyes kémiai komponensek kromatográfiás csúcsainak változásáról az adszorpció előtt és után. A kromatográfiás csúcsterület-változás mértéke alapján a rebarbara lipidcsökkentő aktív összetevőit gyorsan kiszűrtük; És vizsgáljuk meg az anyag újrafelhasználhatóságát, új ötleteket nyújtva a rebarbara lipidcsökkentő hatásának anyagalapjának nagy áteresztőképességű szűréséhez.

A szilikongél APTES-szel és glutaraldehiddel keresztkötési és kondenzációs reakciókon megy keresztül, és kovalensen kapcsolódik a sejtmembránhoz, hogy L02 sejtmembrán bioaffinitású anyagot készítsen, amelyet APTES-szel mint hordozóval módosítottak. Pásztázó elektronmikroszkópia és infravörös spektroszkópia igazolja a sikeres preparálást. Az APTES módosított L02 sejtmembrán bioaffinitási anyagot a rebarbara 30% etanolos kivonatának adszorbeálására használtuk, és az eredmények azt mutatták, hogy 11 komponens specifikusan meg tudott kötődni; Ebből 4 antrakinonglikozid, 5 antrakinonglikozid és 2 ismeretlen komponens, amelyek közül az aloe emodin 😯 - β - D-glükozid, a rhein 😯 - β - D-glükozid, az emodin 😯 - β - D-glükozid és az ismeretlen komponens 1 a fő specifikus komponensek, amelyek potenciális hatóanyagként használhatók a lipidcsökkentő aktivitás ellenőrzésére. A sejtmembránok felszínén található számos célpont miatt azonban ez az anyag csak a lipidcsökkentő hatóanyagok előzetes szűrésére alkalmas; A későbbi szakaszban pedig LC-MS/MS-t kell használni a két ismeretlen komponens előzetes szerkezeti azonosításához. Az L02 sejtmembrán bioaffinitású anyagok fizikai adszorpciójával összehasonlítva ez az anyag bizonyos mértékig kémiai kovalens kötéseket vezet be, elkerülve a sejtmembrán leválását és meghosszabbítva a felhasználási időt. Használható a rebarbara hatóanyagainak gyors szűrésére a vérzsírszint csökkentésére, és referenciaként szolgálhat más hatóanyagok gyors szűréséhez a vérzsírszint csökkentésére.