A kutyamájból származó poliszacharidok hatásmechanizmusának vizsgálata a LIN28A/NF - κ B jelátviteli útvonalon alapuló májfibrózis enyhítésében
A májfibrózist (HF) különböző káros ingerek, többek között vírusfertőzések, gyógyszeres toxicitás, alkohol és autoimmun májbetegségre adott tartós sebgyógyulási válaszok okozzák, amelyek májkárosodáshoz vezetnek. Ez a krónikus májbetegség fontos patológiai markere, a májzsugor kialakulásának kulcsfontosságú eseménye, valamint a végstádiumú hepatocelluláris karcinóma és az előrehaladott májzsugor egyik fő oka. A májfibrózis és májzsugor klinikai gyógyszerként a kolhicin elsősorban a máj sztellatussejtek korai aktiválódását és proliferációját gátolja, elősegíti a máj sztellatussejtek apoptózisát, beavatkozik a kollagén anyagcserébe, és különböző etiológiájú HF-re eltérő terápiás hatással van. A kolhicin számos mellékhatást is okozhat, mint például hasi fájdalom, hányinger, étvágytalanság stb. A nagy dózisú kolhicin máj- és veseelégtelenséghez is vezethet. Ezért új, biztonságos és hatékony terápiás gyógyszereket kell még kutatni és kifejleszteni. A Dicliptera cinensis (L.) Juss, mint hagyományos kínai gyógynövény, édes ízű és hűvös természetű. Hőtisztító, vérhűtő, vizelethajtó, méregtelenítő és májnyugtató hatású. Enyhítő hatással van különböző típusú májkárosodási modellekre, mint például a CCl4, a D-galaktozamin-hidroklorid és a lipopoliszacharid. Korábbi tanulmányokban megállapították, hogy a kutyamáj növényi poliszacharidok (DCP) jó gátló hatással vannak a máj lipidanyagcsere-zavaraira, elsősorban a gyulladásos reakciók enyhítésével és az oxidatív stressz gátlásával összefüggésben. A LIN28A egy erősen konzervált RNS-kötő fehérje, amely fontos szerepet játszik a pluripotens őssejtek indukálásában, a fejlődés, a sejtnövekedés és az anyagcsere szabályozásában. A LIN28A overexpresszióját különböző rákos sejtekben, például nyelőcsőrákban és petefészekrákban találták. Vizsgálatok kimutatták, hogy a LIN28A májspecifikus deléciója enyhítheti az egér hepatocelluláris karcinómát és hatékonyan meghosszabbíthatja a rákos egerek élettartamát, ami arra utal, hogy a LIN28A potenciális célpont lehet a hepatocelluláris karcinóma vagy a májbetegségek kezelésében. Jelenleg azonban nincs olyan irodalom, amely beszámolna a HF-hez való társulásáról. E tanulmány célja a LIN28A és a HF közötti kapcsolat feltárása, és annak vizsgálata, hogy a DCP a LIN28A gátlásával megvédi-e a májat.

A májfibrózis olyan kóros elváltozás, amelyet az extracelluláris mátrix (ECM) progresszív felhalmozódása jellemez a perihepatikus térben, és a krónikus májbetegség fő problémája. Végső oka a májzsugorodás, a májcirrózis, amely világszerte a megbetegedések és a halálozás vezető okává vált, mivel a becslések szerint a világ népességének 2%-ét érinti a májzsugorodás. Ezért a DCP májvédő hatásának tanulmányozása nagy jelentőséggel bír.
A kísérletben CCl4-et használtak a máj fibrózisának kiváltására, amely a humán klinikai HF-hez nagyon hasonló patológiai változásokat okozott. A HA, LN, PCIII és IV-C a májsejtek extracelluláris mátrixának fő összetevői. Májfibrózisban az extracelluláris mátrix fokozott szintézise és elégtelen lebontása miatt az indikátorszintjük emelkedésének mértéke pozitívan korrelál a májfibrózis mértékével. A vizsgálatban a HA, LN, PC Ⅲ és Ⅳ - C szintje a modellcsoportba tartozó patkányokban szignifikánsan emelkedett. A H&E festés és a Masson-festés eredményei azt mutatták, hogy a modellcsoportba tartozó patkányok májszövete jelentős lipiddegenerációt és kollagénlerakódást mutatott, ami a sikeres modellezésre utal. A DCP beadása után a patkányok szérumában a HA, LN, PC Ⅲ és Ⅳ szintje jelentősen csökkent, és a H&E festéses patológiai változások enyhültek, ami azt jelzi, hogy a DCP védő hatással van a májra és a májsejtekre.
Az NF kB egy nukleáris transzkripciós faktor, amely számos olyan gént szabályoz, amelyek fontos szerepet játszanak a sejtek apoptózisának és gyulladásának szabályozásában. Amikor a máj gyulladásos válaszon megy keresztül, az NF kB aktiválódik, és olyan gyulladásos faktorokat szabadít fel, mint a TNF - α, IL-6 és IL-1 β, ami a májszöveti gyulladás súlyosbodásához vezet. A gyulladás helyén a COX-2 és az iNOS enzimek expressziójának indukálása is fokozódik. A túlzott gyulladásos válasz a gyulladás markereként is szolgál. A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az NF-kBp65/\ COX-2 és iN-OS mRNS relatív tartalma és fehérje expressziós szintje a modellcsoportba tartozó patkányok májszövetében jelentősen megnövekedett, és a TNF - α, IL-6 és IL-1 β mRNS relatív tartalma is jelentősen megnövekedett; A modellcsoporttal összehasonlítva az NF-2kBp65, COX-2 és iNOS mRNS relatív tartalma és fehérje expressziós szintje a DCP alacsony, közepes és magas dózisú csoportjában lévő patkányok májszövetében jelentősen csökkent. A TNF - α, az IL-6 és az IL-1 β gyulladásos faktorok mRNS relatív tartalma szintén különböző mértékben csökkent. Ez az eredmény azt jelzi, hogy a DCP gyulladáscsökkentő hatást fejthet ki az NF-kBp65 fehérje expressziójának gátlásával és a downstream gyulladásos faktorok felszabadulásának csökkentésével.
A TGF - β 1 egy multifunkcionális citokin (pro-fibrotikus és gyulladásos faktor), amely részt vesz az immunválaszban és a májfibrózis kialakulásában. A TGF - β 1 a máj csillagsejtjeinek (HSC) aktivációjához, proliferációjához és fibrózisához vezethet. Az alfa SMA tükrözheti a HSC aktivációs állapotát, és a HSC aktiváció markerfehérjéjeként szolgálhat. A májfibrózis mértékének értékelésére is használható. A mátrix metalloproteinázok (MMP-k) kulcsfontosságú tényezők az extracelluláris mátrix lebontásában és átalakításában. Az MMP9 az egyik legfontosabb MMP a normális májmátrix lebontásában, ami elősegítheti a májfibrózis kialakulását. A Western blot elemzés kimutatta, hogy a TGF - β 1, α - SMA és az MMP9 fehérje expressziós szintje a modellcsoportba tartozó patkányok májszövetében jelentősen megnövekedett; A modellcsoporttal összehasonlítva a TGF-21, a - SMA és az MMP9 fehérje expressziós szintje a DCP alacsony, közepes és magas dózisú csoportjába tartozó patkányok májszövetében jelentősen csökkent. Ez az eredmény azt jelzi, hogy a DCP enyhítheti a HF-et azáltal, hogy csökkenti a TGF - β 1 és az MMP9 fehérjék kifejeződését a CCl4 által indukált májszövetben, lelassítva a kollagén lerakódás sebességét a májban.
A LIN28A gén egyedi hidegsokk-doménje (CSD) és cisztein-cisztein-hisztidin-cisztein-cinkujj-domén párosítása révén felismerhető, és fontos szerepet játszik a szekvenciaspecifikus mRNS-kötésben, a miNNA-kötésben, a miNNA előfeldolgozásában és a miNNA által szabályozott géncsendesítésben. Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy a LIN28A az NF-kBp65 jelátviteli útvonalon keresztül részt vesz a gyulladásos válaszokban, és az NF-kBp65 expressziójának csökkentése segít a HF enyhítésében. A kísérletben a normál csoporthoz képest a LIN28A és az NF-kBp65 fehérjeexpressziós szintje és mRNS relatív tartalma a modellcsoportba tartozó patkányok májában szignifikánsan megnövekedett, a DCP alacsony, közepes és magas dózisú csoportjaiban lévő patkányok májszöveteiben pedig a LIN28A és az NF-kBp65 fehérjeexpressziós szintje és mRNS relatív tartalma jelentősen csökkent, és koncentrációfüggést mutatott. A fenti eredmények arra utalnak, hogy a HF-gyulladás folyamata a LIN28A aktiválásához kapcsolódhat. A DCP-vel való kombinálás gátolhatja a LIN28A és az NF-kBp65 expresszióját, valamint a downstream gyulladásos faktorok, mint például a COX-2, iNOS, TNF - α, IL-6 és IL-1 β expresszióját. Feltételezhető, hogy a DCP gyulladáscsökkentő és terápiás mechanizmusai a HF esetében a LIN28A/NF kB jelátviteli útvonal gátlásához kapcsolódhatnak.
Összefoglalva, a DCP jelentős javító hatással van a patkányok HF-jára, és farmakológiai mechanizmusa a LIN28A / NF kB jelátviteli útvonal szabályozásával érhető el a gyulladásos válasz megelőzése érdekében.