Az etil-acetát antioxidáns és gyulladáscsökkentő hatásának vizsgálata hibiszkuszlevelekben és UPLC-Q-Orbitrap HRMS analízis
A Hibiscus mutabilis levelek a Malvaceae családba tartozó Hibiscus mutabilis L. növény szárított levelei. A kínai gyógyszerkönyv 2020-as kiadásában szerepel, és főként Szecsuánban, Hunanban, Guangdongban, Yunnanban és Kína más régióiban termesztik. A Qi enyhe, íze csípős és lapos, hatása a vér hűtése, méregtelenítés, duzzanatcsökkentés és fájdalomcsillapítás. A "Shennong Bencao Jing" feljegyzések: "A késő nyári és kora őszi qi-vel csípős ízű, és a Jin Hua kategóriájába tartozik, amely képes megtisztítani a tüdőt. A qi nyugodt és hűvös, ami képes lehűteni a vért, elvezetni a hőt, méregteleníteni, és kezelni mindenféle karbunkulust, duzzanatot, mérget és fekélyt, valamint enyhíteni a gennyet és a fájdalmat, és a gyermekek alultápláltságát.". A modern farmakológiai kutatások kimutatták, hogy a Mufu Rong Ye jó antibakteriális, fertőzésgátló és vírusellenes hatással rendelkezik, valamint védőhatással bír a vese iszkémiás-reperfúziós sérülése és a krónikus májkárosodás esetén. A hibiszkuszlevelek fő kémiai összetevői közé tartoznak a flavonoidok, szerves savak, fenolok, aminosavak, tanninok, cukrok, szteroidok és illóolajok.
A kutatócsoport előzetesen megállapította, hogy a hibiszkuszlevelek etil-acetát frakciója jó antioxidáns aktivitással rendelkezik a DPPH és az ABTS szabadgyökökkel szemben mért kioldási arányok alapján. A hibiszkuszlevelek egyik farmakológiai hatóanyaga a flavonoidok lehetnek. Az in vitro kémiai módszerek azonban nem képesek pontosan tükrözni a hatóanyagok valódi szerepét a szervezetekben. Ezért ebben a tanulmányban H2O2 által indukált oxidatív stresszkárosodási modellt építettünk HaCaT sejtekben, mértük a reaktív oxigénfajok (ROS) termelődését, feltártuk a hibiszkusz levelek különböző poláris részeinek védő hatását az oxidatív stresszkárosodásra HaCaT sejtekben, LPS által indukált RAW 264.7 sejt gyulladásos modellt hoztunk létre, mértük a sejtek gyulladásos faktor expressziójának gátlásának mértékét az etil-acetát rész által, és tovább vizsgáltuk az antioxidáns és gyulladáscsökkentő hatását sejtszinten. Az UPLC-Q-Orbitrap HRMS technológia alapján azonosították a Hibiszkusz levelek etil-acetát részének kémiai összetételét, és az aktív részek pontos elemzése kimutatta, hogy az etil-acetát rész fő összetevői flavonoidok és glikozidjaik voltak. E tanulmány célja, hogy átfogóan megmagyarázza a Hibiszkusz levelek farmakológiai anyagalapját. Tudományos alapot nyújt a fejlesztéséhez és felhasználásához.

A ROS a sejtek oxidatív anyagcseréjének terméke, és túlzott növekedése vagy tartós jelenléte sejtoxidatív károsodást okozhat. A H2O2 képes a túlzott ROS-termelés indukálására, így ideális induktor az oxidatív stressz okozta károsodási modellekben. A HaCaT sejtek könnyen beszerezhetők, alkalmazkodóképesek és stabilak. A H2O2 használata HaCaT sejtek oxidatív stressz okozta károsodási modellek indukálására az antioxidáns aktivitás értékelésének gyakori sejtmodellje. A TNF - α, az IL-6, az iNOS és a COX-2 tipikus gyulladásos faktorok, az LPS egy gyakori gyulladáskeltő faktor, a makrofágok pedig a gyulladásos válasz fontos résztvevői, amelyek a gyulladás során különböző immunpatológiai folyamatok kialakulását közvetítik. A RAW 264.7 sejtek LPS indukciója a gyulladásos faktorok tanulmányozásának klasszikus sejtmodellje. Jelenleg ezt a két módszert a kozmetikumok ránctalanító és nyugtató hatásainak megnevezését alátámasztó bizonyítékként ismerik el a közzétett csoportnormákban. Ez a tanulmány HaCaT sejtek oxidatív károsodási modelljét hozta létre, és megállapította, hogy a hibiszkuszlevelek különböző poláris részeinek etil-acetát frakciója erős antioxidáns aktivitással rendelkezik. A 25-200 μ g/ml koncentrációtartományban a hibiszkuszlevelek etil-acetát frakciója jelentősen csökkentette a ROS (P<0,001) tartalmát, enyhítette az oxidatív stresszt, és jó védőhatást gyakorolt a sejtek oxidatív károsodási modelljére; A Hibiscus syringae levelek etil-acetát kivonatának gyulladáscsökkentő hatásának további feltárását végeztük, és RAW264.7 sejt gyulladásos modellt építettünk. Amikor az etil-acetát kivonat koncentrációja 200 μ g/ml volt, jelentősen gátolta a TNF - α, IL-6, iNOS és COX-2 mRNS expresszióját a RAW 264.7 sejtekben (P<0,001), ami jó gyulladáscsökkentő aktivitást mutat. Ez tovább tisztázta a Hibiscus syringae levelek antioxidáns és gyulladáscsökkentő aktív helyeit, elméleti alapot biztosítva a farmakológiai aktivitás további kutatásához és a kozmetikai alkalmazások fejlesztéséhez.

Az ultra-nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás kvadrupolos elektrosztatikus mező orbitális csapda nagyfelbontású tömegspektrometriás technológia alkalmas a hagyományos kínai gyógyászatban található összetett többkomponensű rendszerek elemzésére, és jellemzői a nagy felbontás, a nagy minőségi pontosság és a nagy detektálási hatékonyság. Ebben a tanulmányban először alkalmazták az UPLC-Q-Orbitrap HRMS technológiát a hibiszkuszlevelek etil-acetát hatásos részeiben lévő komplex komponensek átfogó minőségi elemzésére. 28 kémiai komponenst azonosítottak, köztük 10 flavonoidot, főként rutint, naringint, izoquercitrint stb.; 9 szerves savkomponens van, főként ferulasav, kávésav, szalicilsav stb.; Vannak továbbá kumarinok, fenolok, nukleozidok, egyenként 2 és 3 egyéb komponens, amelyek összhangban vannak azokkal a jelentésekkel, amelyek szerint a hibiszkuszlevelek gazdagok flavonoidokban és fenolsavakban. A flavonoidok fenolos hidrogénmolekulákat tartalmaznak, amelyek hidrogéndonorként működhetnek, így erős antioxidánsok, kiváló gyulladáscsökkentő hatással. A rutin növelheti a kataláz (CAT) és a szuperoxid-dizmutáz (SOD) aktivitását Parkinson-kór (PD) modellekben; az ezüsthárs gátolhatja a prosztaglandin E2 (PGE2) termelését és az NF - κ B és MAPK jelátviteli utak aktiválódását; A kvercetin gátolhatja a ROS által közvetített májrákot az olyan enzimek, mint a SOD és a CAT, valamint a nem enzimatikus antioxidáns védelmi rendszerek, mint a glutation (GSH) felszabályozásával; Az izokvercetin növelheti a SOD és csökkentheti az MDA-szintet, gátolhatja a MEK/ERK jelátviteli útvonalat, és elnyomhatja az oxidatív stresszválaszt. Az azelainsav kivételével az összes szerves savkomponens fenolsav. Számos tanulmány kimutatta, hogy a fenolsavak erős redukáló tulajdonságokkal rendelkeznek a molekulaszerkezetükben található polifenolos hidroxilcsoportok miatt, így a szabadgyök-lebontó hatású vegyületek tipikus osztályába tartoznak. Például a ferulasav fokozhatja az egérszérum antioxidáns kapacitását, és javíthatja az antibiotikumok bélanyagcserére és gyulladásos válaszra gyakorolt negatív hatásait egerekben; a szalicilsav az antioxidáns enzimaktivitás javulását idézheti elő, és enyhítheti a reaktív oxigénfajok biológiai oxidációját. Ez a tanulmány megállapította, hogy ez a kétféle komponens a hibiszkuszlevelek etil-acetát részének fő kémiai összetevője, ami tovább mutatja, hogy a hibiszkuszlevelek antioxidáns és gyulladáscsökkentő hatású farmakológiai anyagalapja főként flavonoidokból és szerves savakból áll. Ugyanakkor a tanulmány egy új, eddig nem ismertetett flavonoidkomponenst is felfedezett a Hibiscus syringae leveleiben, amely a trifoliát-glükozid, két új fenolos komponens a 4-nitrofenol és a 4-nitrokatechol, egy új nukleozidkomponens az adenin, és két új aldehidkomponens a 2,5-dihidroxibenzaldehid és a vanillin, gazdagítva a Hibiscus syringae leveleinek kémiai összetételi könyvtárát.

Összefoglalva, a Hibiscus syringae leveleinek etil-acetát kivonata nagymértékben enyhítheti a sejtek oxidatív károsodását, ellenállhat az oxidatív stresszválasznak, és gátolhatja a gyulladásos faktorok kifejeződését. Farmakológiai anyagainak alapját a flavonoidok és a szerves savak képezhetik, ami elméleti alapot biztosít a Hibiscus syringae leveleinek antioxidáns és gyulladáscsökkentő mechanizmusainak további kutatásához, valamint a természetes termékek fejlesztéséhez és felhasználásához.