A Dengzhanhua standard főzet minőségének értékelése az ujjlenyomat atlasz és az in vitro antioxidáns aktivitási teszt alapján
A Dengzhan Hua, más néven Dengzhan Xixin az Asteraceae családba tartozó Erigeron breviscapus (Vant.) Hand- Mazz. szárított egész növénye, amelyet tavasszal és ősszel szüretelnek, és a Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadásában szerepel. Hatásai: elősegíti a vérkeringést, feloldja a kollaterálisok elzáródását, enyhíti a fájdalmat, elűzi a szelet és elűzi a hideget. A modern farmakológiai vizsgálatok kimutatták, hogy a Scutellaria baicalensis neuroprotektív, szív- és érrendszeri és agyi érrendszeri védő, antioxidáns, rákellenes és egyéb farmakológiai hatásokkal rendelkezik. A rák, a szív- és érrendszeri, valamint az agyi érrendszeri megbetegedések szorosan kapcsolódnak a szervezetben a túlzott reaktív oxigénfajok, például a szuperoxid-anion gyökök, a hidroxilgyökök és a lipidgyökök által okozott oxidatív károsodáshoz. Az antioxidánsok megfelelő szedése megszüntetheti a szervezetben lévő túlzott szabad gyököket, ami előnyös az emberi egészség, valamint a betegségek megelőzése és ellenőrzése szempontjából. A szakirodalom szerint a Lamplighter kiváló antioxidáns aktivitással rendelkezik. A Lamplighter kémiai összetétele összetett, és a kémiai összetétel és az aktív dózis hatása közötti kapcsolat még nem teljesen világos. A hagyományos kínai orvoslás kémiai ujjlenyomatát széles körben használják a kínai orvoslás minőségének értékelésére, mivel képes jellemezni a kínai orvoslásban található anyagkomponenseket, ami megfelel a hagyományos kínai orvoslás elméletének átfogó és homályos természetének. Alkalmazása azonban egyre korlátozottabb, mivel csak a hagyományos kínai orvoslás kémiai információit tükrözi, és nem tud kapcsolatot teremteni a terápiás hatásokkal. 2020-ban a Nemzeti Orvostechnikai Termékfelügyelet Gyógyszerértékelési Központja kiadta a "Technikai útmutató a hagyományos kínai gyógyászat biológiai hatásainak kimutatásához (Trial)" című dokumentumot, amely az aktivitással kapcsolatos minőségellenőrzési módszerek létrehozását szorgalmazza a hagyományos kínai gyógyászat biztonságának és hatékonyságának biztosítása érdekében a klinikai alkalmazásokban. A hagyományos kínai gyógyászat "spektrum-hatás kapcsolatának" vizsgálata szorosan összekapcsolhatja a hatóanyagok általános jellegzetes kifejeződését több mutató és célpont hatásával, és ésszerűen meghatározhatja a farmakológiai anyag alapját, ami szintén összhangban van a hagyományos kínai gyógyászat jellemzőivel.

A kínai gyógyszer standard főzet a hagyományos kínai orvoslás egyetlen főzete, amelyet szabványosított eljárásokkal állítanak elő, és amelyet szabványosított klinikai gyógyszereléshez használnak, biztosítva a gyógyszerelés pontosságát és a mérés következetességét. Standard referenciaként szolgál annak mérésére, hogy a kínai gyógyszerkészítmény részecskéi alapvetően összhangban vannak-e a klinikai főzettel. A szabványos főzetre vonatkozó javaslat anyagi viszonyítási alapot biztosít a hagyományos kínai orvoslás főzetén alapuló adagolási formák minőségi konzisztenciájának eléréséhez és hatékony minőségértékelési módszerek kialakításához. Ez a cikk a Dianzhanhua standard főzetét tekinti kutatási tárgynak, és a DPPH és ABTS szabadgyökök elszívására irányuló in vitro kísérletekkel igazolja antioxidáns hatását. Ugyanakkor a HPLC-ujjlenyomatát megállapítják és meghatározzák az összes flavonoidtartalmat; Bivariáns korrelációs elemzéssel szignifikánsan korreláló antioxidáns komponensek szűrésére, klaszterelemzést (CA) és főkomponens-elemzést (PCA) végeztek a kiszűrt komponenseken, és ortogonális részleges legkisebb négyzetek diszkrimináns analízisét (OPLS-DA) használták továbbá a differenciális komponensek azonosítására; Értékeljük antioxidáns hatásának minőségét, hogy alapot biztosítsunk a lámpagyújtó és készítményei minőségellenőrzéséhez.

 

 

A DPPH és az ABTS szabadgyököket gyakran használják indikátorként a hatóanyagok in vitro antioxidáns aktivitásának mérésére. A DPPH módszer a gyógyászati anyagok antioxidáns kapacitását a magányos elektronpárral rendelkező anyagokhoz kötődve határozza meg, míg az ABTS módszer a hidrofil és lipofil anyagokhoz kötődve határozza meg az antioxidáns kapacitást. A Scutellaria baicalensis fő hatóanyagai közé tartoznak a flavonoidok. Ebben a vizsgálatban a Scutellaria baicalensis standard főzet 16 tételének teljes flavonoidtartalmát 2,85-11,28 mg/ml között határozták meg. In vitro antioxidáns aktivitását a DPPH és az ABTS szabadgyökök mint antioxidáns indikátorok elszívásával értékelték. A DPPH IC50 értéke 1,00-3,39mg/ml, az ABTS IC50 értéke pedig 0,254-2,16mg/ml volt, ami azt jelzi, hogy a Scutellaria baicalensis standard főzet ABTS szabadgyökfogó képessége erősebb, mint a DPPH szabadgyökfogó képessége. A Pearson-féle kétváltozós korrelációs elemzés segítségével megállapítottuk, hogy a két in vitro antioxidáns aktivitás (IC50 értékek) szignifikánsan negatívan korrelált az összes flavonoidtartalommal (P<0,01), -0,714 és -0,841 korrelációs együtthatóval, ami azt jelzi, hogy minél kisebb az IC50 érték és minél magasabb az összes flavonoidtartalom, annál erősebb a kivonat antioxidáns kapacitása. Ezért az összes flavonoidtartalom az egyik olyan mutató, amely befolyásolja a Scutellaria baicalensis antioxidáns erejét, és a Scutellaria baicalensis antioxidáns erejének értékelésére használható.
Az ujjlenyomat-spektrumok megállapítása során az Agilent ZORBAX-SB C18, az Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 és az Agilent Extend C18 kromatográfiás oszlopokat vizsgálták kísérletileg. A kromatográfiás csúcsok számának és az elválasztási foknak az összehasonlítása alapján megállapítottuk, hogy az Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 jobb teljesítményt nyújtott; Vizsgáltuk a különböző áramlási sebességeket (0,8, 1, 1,2 ml/perc) és megállapítottuk, hogy a 0.8 mL/min jobb elválasztási hatást mutatott; Vizsgáltuk a 0,1% hangyasav víz metanol, 0,1% hangyasav víz acetonitril és 0,1% hangyasav víz acetonitril tetrahidrofurán bináris rendszereket különböző gradiensekkel. Megállapítottuk, hogy a 0,1% hangyasav-víz-acetonitril-tetrahidrofurán elválasztó hatása jobb volt, és az alapvonal viszonylag stabil volt; A 200-400 nm-es detektálási hullámhossz szűrése során az eredmények azt mutatták, hogy a hullámhossz különböző időszakokban történő változtatásával kapott kromatográfiás csúcsok többszörösek voltak, és az alapvonal stabil volt. Végül megállapították, hogy a hullámhossz 0-9 perc között 252 nm, 9-60 perc között pedig 330 nm volt.
Az elmúlt években a gyógynövények, például a Scutellaria baicalensis ujjlenyomat-spektrumával foglalkozó irodalom többnyire a HPLC-módszert használta, amely értékeli az ujjlenyomat-spektrumok hasonlóságát és meghatározza a közös csúcsokat; Az irodalom CA-t és PCA-t használt az ujjlenyomat-spektrumok kémiai mintafelismerésére és a gyógyászati anyagok osztályozására, de nem végzett mélyreható elemzést a különbségek okairól. E cikk korai szakaszában a Lampyridis gyógynövény ujjlenyomat-spektruma alapján a Lampyridis standard főzetének ujjlenyomat-spektrumát állapították meg, amelynek hasonlósága 0,770-0,993, és 21 közös csúcsot kaptak. Nyolc ismert komponenst azonosítottak a referenciaanyag segítségével. Ez a tanulmány bivariate korrelációs analízist használt 10 kromatográfiás csúcs szűrésére, nevezetesen a 3., 4. és 6. csúcs (klorogénsav), a 7., 11. és 13. csúcs (szkutellarin B), a 14. csúcs (izoklorogénsav B), a 15. csúcs (szkutellarin A), valamint a 17. és 19. csúcs (izoklorogénsav C), amelyek szignifikánsan negatívan korreláltak a DPPH szabad gyökök elnyelésére való képességgel (azaz minél nagyobb a közös csúcs területe, annál kisebb az IC50 érték). A személyi korrelációs együtthatók -0,552, -0,733, -0,626 és -0, illetve 665, -0,537, -0,518, -0,767, -0,754, -0,541 és -0,748 jelezték, hogy a megfelelő kémiai anyagok a DPPH-gyökök elkapásában a fő hatóanyagok. Tizenhárom kromatográfiás csúcs, köztük a 3, 4, 6, 7, 8, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18 (izoklorogénsav A) és 19-es csúcsok szignifikánsan negatívan korreláltak az ABTS szabadgyök-leválasztással. A személyi korrelációs együtthatók -0,594, -0,861, -0,761, -0,829, -0,645, -0,583, -0,676, -0,721, -0,740, 0,574, -0,652, -0,720 és -0,518 voltak. A megfelelő anyagok voltak az ABTS szabadgyök-leválasztás fő hatóanyagai. A két antioxidáns módszerrel meghatározott antioxidáns aktivitás (IC50 értékek) szignifikánsan korreláltak az ismert komponensekkel, a klorogénsavval, a szkutellarin B-vel, az izoklorogénsav B-vel, a szkutellarin A-val és a klorogénsav C-vel, ami azt jelzi, hogy ez az öt komponens a fő hatóanyagok a szkutellarin antioxidáns aktivitásában.
A kísérletben 10 közös csúcsot használtak, amelyek szignifikánsan korreláltak a DPPH és az összes flavonoidtartalommal, mint változókkal, és 13 közös csúcsot, amelyek szignifikánsan korreláltak az ABTS és az összes flavonoidtartalommal, mint változókkal a CA és PCA elemzéshez. A mintákat két kategóriára osztottuk, nevezetesen a vad S014 és S016, valamint a fennmaradó 14 tétel ültetett mintára. Feltételezhető, hogy ez olyan tényezőkkel függhet össze, mint a növekedési környezet (fény, tengerszint feletti magasság, földrajzi szélesség és hosszúság stb.) és a lámpavirágok betakarítási időszaka. Ugyanakkor a Scutellaria baicalensis standard főzetére vonatkozóan pontozási modellt állítottunk fel, melyben ezeket a komponenseket változóként használtuk. A 16 tétel standard főzetének pontszámok szerinti rangsorolása alapvetően összhangban volt az in vitro antioxidáns aktivitás rangsorolásával. A CA és a PCA alapján a szerző további OPLS-DA elemzést végzett, és négy fő differenciális komponenst azonosított a DPPH szabad gyökök elszívásával kapcsolatban: a 11., 15. (scutellarin), 14. (izoklórsav B) és a 13. csúcs (scutellarin); Az ABTS szabad gyökök eltávolításával kapcsolatos négy fő differenciális komponens a 11., 15., 14. csúcs és a 8. csúcs (scutellarin). A kutatási eredmények azt sugallják, hogy a Scutellaria baicalensis minőségének ellenőrzése során a Scutellaria baicalensis B (azaz a baicalin) magas tartalmának ellenőrzése mellett más, erős farmakológiai aktivitással rendelkező minőségellenőrzési mutatókat is megfelelően hozzá kell adni.
Összefoglalva, ez a tanulmány kombinálja a kémiai ujjlenyomatvételt a biológiai aktivitás értékelésével, és a Lampyridis standard főzetének antioxidáns hatóanyagait vizsgálja a spektrális korreláció kutatásával. A létrehozott módszer könnyen kezelhető és az eredmények megbízhatóak, ami alapot nyújthat a Lampyridis farmakológiai hatásainak és minőségértékelésének további kutatásához. A jövőben a minta mérete növelhető, és a folyadékkromatográfia-tömegspektrometriás technológia felhasználható a standard főzetben lévő ismeretlen komponensek közös csúcsainak azonosítására, farmakológiai aktivitásuk tanulmányozására, valamint több farmakológiai aktivitás spektrum-hatás kapcsolatának átfogó vizsgálatára, ami alapot nyújt a Scutellaria baicalensis minőségi kutatásához.