A krizantém jellegzetes markereinek kutatása HPLC jellegzetes spektrumok és kemometria kombinációján alapuló HPLC jellegzetes spektrumok alapján
A krizantém a Chrysanthemum morifolium Ramat Asteraceae növény szárított fejvirágzata. Elsősorban olyan aktív részeket tartalmaz, mint a flavonoidok, illóolajok, szerves savak és nyomelemek. Hatásai a szelek eloszlatása, a hőtisztítás, a máj megnyugtatása, a látás javítása, a hőtisztítás és a méregtelenítés. A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása származási helyük és feldolgozási módjuk szerint a krizantémfajtákat "Boju", "Chuju", "Gongju", "Hangju" és "Huaiju" néven tartalmazza. A krizantém, mint gyógy- és ehető tulajdonságokkal rendelkező kínai gyógynövény, az összetevők széles skálájának és összetett összetételének jellemzőivel rendelkezik. A különböző krizantémfajták kémiai összetétele azonban jelentősen eltér a különböző növekedési környezetük, termesztési és feldolgozási módszereik, valamint egyenetlen minőségük miatt, ami eltérő klinikai terápiás hatásokat eredményez. Jelenleg a Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása három kémiai összetevő, a klorogénsav, a luteolin-7-O - β - D-glükozid és a 3,5-O-dikafeoilkininsav tartalmát használja értékelési indikátorként, ami megnehezíti a krizantém gyógyászati anyagok minőségének átfogó értékelését.
A hagyományos kínai orvoslás jellegzetes spektruma jellemezheti a hagyományos kínai orvoslás belső minőségének általános változásait. Egyre több hagyományos kínai gyógyszer használja a jellegzetes ujjlenyomat-spektrumok létrehozását a minőségellenőrzéshez, amelyek közül a HPLC jellegzetes ujjlenyomat-technológiát is gyakran használják a krizantémfajták azonosításában és a minőségellenőrzési kutatásban. A hagyományos kínai gyógyszer minőségi marker (Q-Marker) olyan kizárólagos, klinikailag hatékony és ellenőrzött kémiai összetevőkből áll, amelyek a hagyományos kínai gyógyszer funkcionális tulajdonságaihoz kapcsolódnak. A hagyományos kínai gyógyászat biztonságosságát és hatékonyságát tükrözheti, és felhasználható a hagyományos kínai gyógyászat modern, átfogó, szisztematikus és kvantitatív minőségértékelési rendszerének kialakítására. A Q-Marker alapján, az ujjlenyomat-spektrumok és a kemometriai módszerek integrálásával felfedezhetők a gyógynövények vagy receptúrák közös jellemzőit tükröző összetevők, és létrehozható egy többdimenziós minőségértékelési rendszer, amely megfelel a hagyományos kínai orvoslás jellemzőinek. Ez jobb megoldást jelenthet a hagyományos kínai orvoslás tudományos felügyeletére.
A krizantémokkal kapcsolatos korábbi kutatások alapján ez a tanulmány a krizantémok különböző fajtáinak HPLC jellegzetes kromatogramjait állította össze, kemometriai módszerekkel kombinálva a krizantémok közös anyagbázisának mint jellegzetes markereknek a szűrésére. Ugyanakkor a különböző krizantémfajták közötti jelentős különbségeket vizsgálták a jellemző markerek tekintetében, tudományos alapot szolgáltatva a krizantémok általános minőségértékeléséhez, fajtaazonosításához és az egyes fajták jellemzőinek értékeléséhez.

 

A kivonási módszerek kiválasztása. Ebben a kísérletben a különböző oldószerek (70% metanol, 50% metanol, 80% metanol), extrakciós módszerek (ultrahangos extrakció és fűtési reflux extrakció) és extrakciós idők (30, 35, 40 perc) kromatogramokra gyakorolt hatását vizsgáltuk, és megállapítottuk, hogy a 70% metanol 40 perces ultrahangos extrakcióját használjuk extrakciós módszerként.
A kromatográfiás feltételek optimalizálása. Ebben a kísérletben különböző kromatográfiás oszlopokat (Agilent XDB-C18 oszlop Phenomenex Luna C18)、 detektálási hullámhosszokat (220, 254, 330, 348nm) és mobilfázis rendszereket (acetonitril -0,1% foszforsavas víz, acetonitril -0,1% hangyasavas víz, acetonitril -0,2% ecetsavas víz) vizsgáltunk, és a kromatográfiás csúcs alakját, a csúcsok számát és a felbontást használtuk értékelési indikátorokként. Végül egy Agilent XDB-C18 kromatográfiás oszlopot (4,6 mm × 250 mm, 5 µm) választottunk 348 nm-es detektálási hullámhosszal és acetonitril -0,2% ecetsav vizes oldattal mint mobilfázis rendszerrel.
A kísérletben megállapított öt különböző krizantémfajtának különböző közös csúcsok és azonosított jellegzetes csúcsok vannak. A Boju, Chuju, Gongju, Hangju és Huaiju megállapított kontrolltérképeken 21, 20, 25, 22 és 22 közös csúcsot azonosítottak, és 14, 14, 12, 13 és 13 fő jellemző csúcsot azonosítottak a kontrollmintával való összehasonlítással; Az 50 tétel krizantémmintából generált krizantém kontrollspektrumban 17 közös csúcsot azonosítottak, beleértve a neoklorogénsavat, a klorogénsavat és a kriptoklorogénsavat, luteolin-7-O - β - D-glükozid, izoklorogénsav B, 3,5-O-dikáffeoilkininsav, apigenin 7-O - β - D-glükozid, izoklorogénsav C, vanillolignin 7-O - β - D-glükozid, vanillogenin, apigenin és luteolin. Mivel Gongju, Hangju és Huaiju esetében nem azonosították a kávésavat, Gongju esetében pedig az acacetint, a krizantém kontrollspektrumában a kávésavat és az acacetint nem használták közös csúcsként. A csúcsterületek összehasonlításával megállapították, hogy a luteolin-7-O - β - D-glükozidnak, az apigeninnek, az apigenin-7-O - β - D-glükozidnak és az izoklorogénsav C-nek megfelelő csúcsterületek között jelentős különbségek voltak az öt krizantém kontrollspektrumban. A Gongju és Hangju kontrollspektrumokban a luteolin-7-O - β - D-glükozid és a C izoklórglükogénsav csúcsterülete nagyobb volt, míg a másik három krizantém kontrollspektrumban a csúcsterületek kisebbek voltak; A Boju, Chuju és Huaiju kontrollspektrumában az apigenin csúcsterülete viszonylag nagy, míg a Gongju és Hangju kontrollspektrumában a csúcsterülete nagyon kicsi; Az apigenin-7-O - β - D-glükozid csúcsterülete nagyobb a Hangzhou krizantém kontrollspektrumában, míg a másik négy krizantém kontrollspektrumában kisebb. Így az öt krizantémfajta jellemző csúcsértékei közötti különbségek összehasonlításával előzetesen tükrözhetjük a különböző krizantémfajták közötti különbségeket, ami arra utal, hogy a különböző krizantémfajták kémiai összetevőinek típusaiban és tartalmában bizonyos különbségek vannak.
A hasonlósági értékelés eredményei magas fajon belüli hasonlóságot mutatnak, ami azt jelzi, hogy a különböző tételekből származó azonos fajtájú krizantémok közötti különbségek viszonylag kicsik; Az alacsony fajok közötti hasonlóság 0,391-0,690, ami jelentős különbségeket jelez a különböző krizantémfajták kémiai összetételében. A CA, a PCA és az OPLS-DA öt különböző krizantémfajtát képes pontosan öt kategóriába sorolni. Bár az öt krizantémfajta különbözik egymástól, vannak hasonlóságaik is. A PCA és az OPLS-DA két kategóriára osztja az öt sajátos régiót: balra és jobbra. Közülük a Boju, a Chuju és a Huaiju egy kategóriába (gyógyászati célokra), míg a Gongju és a Hangju egy kategóriába (gyógyászati célokra) sorolható. A kemometriai elemzés azt mutatja, hogy a kumarin-7-O - β - D-glükozid, az izoklorogénsav C és az apigenin a két kategória fő differenciáló komponensei, amelyek jellegzetes markerként használhatók a kétféle krizantém közötti különbségek megkülönböztetésére. Az OPLS-DA 7 fő marker-komponenst szűrte ki, és 4 komponenst, köztük az apigenint, az apigenin-7-O - β - D-glükozidot, a luteolin-7-O - β - D-glükozidot és az izoklórogénsavat azonosította vegyes referencia-standardokkal való összehasonlítással. Ezek a komponensek jellegzetes markerként használhatók a különböző krizantémfajták közötti különbségek megkülönböztetésére, amit a csúcsterületek összehasonlítása is alátámaszt. Közülük a 24., 11. és 20. csúcsot nem azonosították, és szerepük a krizantém minőségének értékelésében további kutatásokat igényel; tíz, 1-nél kisebb VIP-értékkel rendelkező komponens, köztük a B izoklór-, 3,5-O-dikáffeoilkininsav, vanillin, kriptoklór-, klorogén-, neoklór-, luteolin és vanillin 7-O - β - D-glükozid, a krizantém egészének jellemző markereiként használható.
Összefoglalva, ez a kísérlet öt krizantémfajta HPLC jellegzetes spektrumát hozta létre és elemezte, összehasonlította a jellegzetes csúcsokat és a hozzájuk tartozó csúcsterületeket, és hasonlósági értékelést végzett, előzetesen bemutatva a különböző krizantémfajták közötti különbségeket; A krizantémfajták hatékonyságát képviselő és a különböző krizantémfajták közötti különbségeket tükröző jellegzetes markerek, a krizantémfajták közötti különbségek elemzéséhez és szűréséhez használt kemometriai módszerek alkalmazásával tudományos alapot biztosítunk a krizantémfajták azonosításához és minőségértékeléséhez.