A miricetin hatása a ciklofoszfamid indukálta immunszupprimált egerek immunfunkciójára
Az immunrendszer képes megvédeni a szervezeteket a kórokozók által okozott fertőzésektől az egyensúly és az általános egészség fenntartása érdekében. Az immunszuppresszió az immunrendszer hosszú távú vagy átmeneti működési zavara. Az immunrendszer károsodása miatt a szervezetek érzékenyebbé válnak a kórokozókkal szemben, és csökken az ellenálló képességük. Még az általában nem komolyan vett kisebb kórokozók is könnyen okozhatnak fertőzéseket. Jelenleg számos, a klinikai gyakorlatban alkalmazott immunmodulátornak van bizonyos mellékhatása, mint például a levamisol és a Bacillus subtilis. Ezért továbbra is szükséges új immunmodulátorok kutatása és fejlesztése, hogy segítséget nyújtsanak az immunszuppresszióval összefüggő betegségek kezelésében.

A 18. század végén a Myriaceae családba tartozó Yangmei kéregből egy világossárga kristályt, a myricetint (MYR) vonták ki (lásd az 1. ábrát). A MYR egy flavonoid vegyület, amely gyümölcsökben, zöldségekben, teában és borban található, és számos élelmiszer fontos hatóanyaga és adalékanyaga. A modern farmakológiai kutatások azt mutatják, hogy a MYR terápiás hatással van számos betegségre, többek között a rák különböző típusaira, gyulladásos betegségekre, érelmeszesedésre, Alzheimer-kórra és patogén mikrobiális fertőzésekre. Ezeknek a flavonoidoknak a funkciója azonban még mindig nem teljesen ismert, különösen az immunrendszer szabályozásában.

A ciklofoszfamid (CTX) egy immunszuppresszív induktor, amelyet széles körben használtak kemoterápiaként és betegségmódosítóként bizonyos szolid tumorok, limfómák és egyes autoimmun betegségek leküzdésére. A CTX károsíthatja a normál sejtek DNS-ét, ami az egyik oka annak, hogy immunszupressziót tud végezni. Jelenleg klinikai körülmények között immunszuppresszánsként is alkalmazzák. A MYR szintén általánosan használt modellező gyógyszer a különböző laboratóriumok számára az immunhiány ideális állatmodelljeinek megalkotásához.

Ezért CTX-et használtunk az egerek hasüregbe történő befecskendezéséhez, hogy csökkentsük immunitásukat, és immunszuppresszív modellt hozzunk létre. A modell egereket MYR-rel kezeltük, és értékeltük a lép és a tímusz indexeit, a lép limfocita proliferációs képességét, a szérum hemolízin szintjét, az antitestképző sejtek képességét, valamint a szérum citokin interleukin-2 (IL-2), interferon - γ (IFN - γ), interleukin-4 (IL-4), interleukin-6 (IL-6) szekréciós szintjét, hogy a MYR-t mint új immunmoduláló szert fejlesszük.

 

Az immunszuppresszió az emberi szervezetben az immunrendszer működési zavarainak megnyilvánulása. Egy vagy több tényező együttes hatására az immunrendszer károsodása az emberi szervezetet fogékonyabbá teheti a fertőzésekre, és immunrendszerrel összefüggő elváltozásokat eredményezhet. A MYR egy számos élelmiszerben megtalálható flavonoid anyag, amelynek olyan hatásai vannak, mint a májvédelem, daganatellenes, gyulladáscsökkentő, antitrombotikus, antioxidáns stb. Számos jelentés született a preklinikai immunszabályozásáról is. A MYR javíthatja a kalcitriol által kiváltott bőrkárosodási tüneteket atópiás dermatitiszes egerekben, szabályozhatja a helyi Th1/Th2 egyensúlyt, és helyreállíthatja a sérült bőrgátakat. In vitro kísérletekben Hou és munkatársai megállapították, hogy a MYR gátló hatással van a tumor nekrózis faktor - α (TNF - α)/IFN - γ által indukált gyulladásos faktorokra humán immortalizált keratinocitákban, és képes blokkolni a STAT1 és NF - κ B jelátviteli utakat. A MYR jelentősen növelte a Treg-sejtek arányát és elősegítette az immunegyensúly helyreállítását vastagbélgyulladásos egerekben.
A CTX egyfajta alkiláló szer, amely széles körű daganatellenes tulajdonságokkal rendelkezik. Először "látens" széles spektrumú rákellenes gyógyszerként emlegették, amely szelektivitással rendelkezik a T-sejtek felé, és in vivo képes DNS-károsodást és -javítást indukálni. Az autoimmun betegségek kezelésére és a túlzott immunitás szabályozására való képessége, valamint a modellezés nagyfokú kényelme és egyszerű anyagigénye miatt a CTX jelenleg a laboratóriumokban az immunhiányos állatmodellekben gyakran használt induktor. Ez a kísérlet CTX-modellezést használ a MYR immunszintjének értékelésére. A normál kontrollcsoporttal összehasonlítva az immunválaszhoz kapcsolódó mutatók, mint például a lép, a tímusz index és a citokin szekréció szintje jelentősen csökkent a Mod kezelési csoportban, ami az immunhiányos egérmodell sikeres létrehozását jelzi. A szervezet immunfunkciója szorosan összefügg és kölcsönösen befolyásolja az immunszervek, például a lép és a tímusz funkcionális állapota. Ha a szervezet immunképessége elnyomott, a lép és a tímusz zsugorodik. Ebben a vizsgálatban a MYR enyhítette a lép és a timusz immunszervek MYR által okozott sorvadását egerekben, ami az immunszervek súlyának és indexének növekedéséhez vezetett. Ez azt jelzi, hogy a MYR bizonyos mértékig növelheti az egerek immunszintjét. A Mod csoport adataihoz képest a MYR-kezelés mindhárom csoportja jelentősen növelte a lép és a thymus indexét, és a növekedés mértéke ebben a tendenciában a kezelés hatékonyságának bizonyos mértékű függését jelzi a gyógyszeradagolással. Érdemes megjegyezni, hogy a MYR nagy dózisainak alkalmazása után mindkét érték közel volt a kontrollcsoport szintjéhez. Az eredmények azt jelzik, hogy a MYR képes enyhíteni a CTX által okozott immunszervi károsodást, és immunerősítő hatással van az immunszervekre.
Az adaptív immunrendszer, beleértve a sejtes és humorális immunválaszokat, képes megvédeni a szervezetet a specifikus kórokozók inváziójától. A limfociták proliferációja döntő szerepet játszik az adaptív immunitás aktiválásában, és gyakran használják az állatok immunválasz-képességének értékelésére. A ConA és az LPS serkentheti a T- és B-limfociták proliferációját. A MYR immunhatásának további megerősítése érdekében kimutattuk a limfociták szekréciós szintjét ConA és LPS hatására. A kísérleti eredmények azt mutatják, hogy a MYR alkalmazása jelentősen enyhítheti a CTX limfocitákra gyakorolt gátlását, és a MYR különböző koncentrációinak alkalmazásából megfigyelt változások némileg függnek a gyógyszer dózisától. A kutatások kimutatták, hogy a CD4+T limfociták és a CD8+T limfociták arányának kiegyensúlyozatlansága hatással van az immunfunkcióra. Áramlási citometriás elemzéssel megállapították, hogy a CTX-szel kezelt egerek CD4+és CD8+ alcsoportjai jelentősen csökkentek, és a CD4+/CD8+ alcsoportok aránya csökkent (P<0,05 vagy P<0,01), ami arra utal, hogy az egerek immunszuppresszív állapotban voltak. A Mod modellcsoporttal összehasonlítva a MYR minden dóziscsoportja növelni tudja a CD4+és CD8+T-sejt-alcsoportok számát, valamint a CD4+/CD8+-alcsoport arányát (P<0,05 vagy P<0,01), a nagy dózisú csoport szignifikáns dózisfüggő hatást mutatott. A MYR részt vehet a CD4+és CD8+sejtek szintjének befolyásolásában, immunrendszerük egyensúlyhiányának szabályozásában és a normál szint helyreállításában. Ez tehát azt jelzi, hogy a MYR mind a celluláris, mind a humorális immunitást fokozhatja, ami összhangban van a lép és a tímusz indexeire gyakorolt hatásából levont következtetéssel.
A szérum hemolizin változásai molekuláris szinten tükrözhetik a szervezetben termelt antitestek mennyiségét, és a szérum hemolizin emelkedése fokozhatja a specifikus antitestválaszt a tímusz-függő sejtek antigénjeire. A kontrollkísérlet adatainak eredményei alapján azt találtuk, hogy a vak csoporthoz képest a CTX indukálta immunszuppresszív egércsoportban csökkent a hemoliszin-tartalom, és csökkent az antitesttermelő sejtek száma. A MYR különböző dózisai jelentősen növelték a CTX indukálta immunszuppresszív egerek szérum hemolizin képződését, és bizonyos fokozó hatást gyakoroltak a specifikus antitesteket termelő sejtek számára is, ami azt jelzi, hogy a MYR képes fokozni az egerek sejtes immunfunkcióját. Annak érdekében, hogy megvizsgáljuk az e fokozással kapcsolatos mechanizmusokat, mélyrehatóbb in vivo vizsgálatot végeztünk a MYR limfocitákra és gyulladásos faktorokra gyakorolt hatásairól.
A citokinek, mint az immunrendszer egyik eleme, az immunválaszban a sejtek közötti hidakként és összekötő kapocsként szolgálnak, és döntő szerepet játszanak az immun- és gyulladásos válaszok koordinálásában. Például az IL-4 gyulladáscsökkentő citokin szekréciójának növelése a TH2 sejtalcsoportok által szabályozhatja a gyulladást és javíthatja az allergiás rhinitis tüneteit. Az IFN - γ fontos szerepet játszik az immunválaszok szabályozásában, indukálja a T-sejtek termelődését, aktiválja a makrofágokat, és keresztszabályozza a TH1 és TH2 sejteket. Az IL-2 szabályozhatja a Treg-et, hogy immunszuppresszív vagy immunstimuláló hatást fejtsen ki, és döntő szerepet játszik az immunhomeosztázis során. Az IL-4-nek többféle immunmoduláló hatása van, mind serkentő, mind gátló, és serkentheti a B-sejtek proliferációját. Fontos tényező a vérképzősejtek fejlődésének és differenciálódásának, valamint az IgG és IgE immunglobulin képződésének elősegítésében. Az IL-6 sejtspecifikus expressziója különböző biológiai reakciókhoz vezethet, fontos közvetítő szerepet játszik az akut gyulladásos válaszokban, és az IFN - γ termelésének csökkentésével gátolhatja az effektor CD8+T sejtválaszokat. A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az IL-2 és IL-4, IL-6 és IFN - γ citokinek expressziós szintje a CTX-et beadott egerekben szignifikánsan csökkenő tendenciát mutatott a kontrollcsoporthoz képest, és a másik három csoport adataiban az IL-4 kivételével rendkívül jelentős különbségek voltak. A MYR képes megfordítani ezt a jelenséget azáltal, hogy dózisfüggően közelíti az IL-2 és IL-4, IL-6 és IFN - γ citokinek szekréciós szintjét a kontrollcsoport normál tartományához, és jó szabályozó hatással van a CTX által kiváltott immunhiányos egereknél. Ezek közül a nagy dózisú gyógyszercsoportban az IL-6 és a TNF - γ koncentrációja visszaállt a kontrollcsoport szintjére. Ez az eredmény azt jelzi, hogy a MYR helyreállítja a szervezet immunrendszerének egyensúlyát és javítja az immunhiány tüneteit az immunsejtek és a citokinek közötti kölcsönhatások szabályozásával. Összességében a MYR nagyobb hatással van a Th1 sejtalcsoportok által szekretált IFN - γ citokin termelésére, mint a Th2 sejtalcsoportok által szekretált IL-4 és IL-6 citokinekre, ami azt jelzi, hogy a MYR elsősorban a sejtes immunfunkció erősítésével javítja az immunhiányos modell egerek immunfunkcióját.
Összefoglalva, a MYR hatása az immunrendszerre összetett, mivel változásokat idézhet elő a különböző limfociták és gyulladásos faktorok expressziójában, és szabályozhatja e faktorok közötti kölcsönhatásokat. E tanulmány eredményei alapján arra a következtetésre jutottunk, hogy a MYR pozitív szerepet játszik az immunrendszer működésében, különösen nagy dózisú körülmények között. Kimutattuk, hogy a MYR képes visszafordítani a CTX által kiváltott immunszupressziót. Kísérleti eredményeink tehát bizonyítékot szolgáltatnak a MYR immunerősítő hatására, és tudományos alapot nyújtanak további fejlesztéséhez és lehetséges klinikai alkalmazásához. A jövőbeli kutatásokban reméljük, hogy folytathatjuk a MYR hatásának feltárását az alacsony immunitás vagy immunrendszeri rendellenességek által okozott egyes betegségekre.