HPLC ujjlenyomat spektrumok és négy alkaloid tartalom meghatározása a Fu Mao vasrúd kalapács különböző régióiban
Aconitum flavum Hand. - Mazz. a Ranunculaceae család Aconitum nemzetségébe tartozik. Duanchongcao, Wuyao és Yizhihao néven is ismert, hagyományos kínai gyógynövény és népi gyógynövény. Gyökereit és csemetéit gyógyszerként használják, szárított gyökereit pedig "vasrúd kalapács" néven ismerik. A Shaanxi kínai gyógynövénygyógyászat feljegyzi, hogy a Fumao vasrúdkalapácsnak a vérkeringést elősegítő, a vér pangását megszüntető, a fájdalmat enyhítő, a szelet és a nedvességet elűző, a duzzanatot és a méreganyagokat csökkentő, a vérzést elállító, az esés okozta sérülések, a reumás ízületi gyulladás, valamint a hát- és lábfájás kezelésére szolgáló hatása van.

A szakirodalmi jelentések szerint az Aconitum carmichaelii kínai gyógynövény fő hatóanyagai az alkaloidok, és az akonitin a fő kémiai összetevő, viszonylag magas tartalommal. A Fumao Vaskalapács és a Vaskalapács közötti tartalmi különbség fő összetevői a 12 epiaconitin és az aconitin. A Fumao Iron Hammer 12 epiaconitin és aconitin tartalma magasabb, mint az Iron Hammeré. A modern farmakológiai kísérleti vizsgálatok kimutatták, hogy az aconitin, a 12 epiaconitin, a sophocarpine és a 3-acetilakonitin fájdalomcsillapító, gyulladáscsökkentő és rákellenes hatású.

Jelenleg kevés jelentés létezik a Fumao vaskalapács minőségi szabványairól. A hagyományos kínai gyógyászat ujjlenyomat-spektrumát széles körben használják a minőségértékeléshez, amely átfogóan tükrözi a hagyományos kínai gyógyászatban található kémiai összetevők típusait és mennyiségét. Ezért ez a tanulmány HPLC-ujjlenyomat-kromatogramokat készített a Fumao Tiebang Hammer gyógyászati anyagok 15 különböző eredetű tételeiről, és meghatározta négy alkaloida, köztük 12 epiaconitin, Song Guoling, aconitin és 3-acetilakonitin tartalmát; Másodszor, a kínai gyógyszer kromatográfiás ujjlenyomat hasonlóságértékelő rendszerét (2012A verzió) használták a hasonlóság értékelésére, és az SPSS szoftvert használták a klaszterelemzéshez és a főkomponens-elemzéshez, annak érdekében, hogy tudományos alapot biztosítsanak az indikátor komponensek szűréséhez és a Fumao Tiebang Hammer kínai gyógyszer minőségének átfogó ellenőrzéséhez.

 

 

A kromatográfiás feltételek meghatározása. A 12 akonitin és a Song Guoling maximális abszorpciós hullámhossza 210 nm, az akonitin és a 3-acetilakonitin maximális abszorpciós hullámhossza pedig 235 nm. A 210, 215, 220 és 230 nm-es értékeket vizsgáltuk a négy csúcs kiegyensúlyozása és a legmagasabb válaszérték elérése érdekében. Végül a 215 nm-t választották ki detektálási hullámhossznak. Vizsgáltuk az Agilent Eclipse Plus C18 (50mm × 4,6mm, 5 μ m), Unitary C18 (250mm × 4,6mm, 5 μ m), JADE-PAK ODS (250mm × 4,6mm, 5 μ m) és ACE Excel C18PFP (250mm × 4,6mm, 5 μ m) anyagokat. A szimmetriatényező, a felbontás és a csúcs alakjának összehasonlításával végül az ACE Excel C18 PFP kromatográfiás oszlopot választottuk. Vizsgáltuk 2,0, 2,5 és 3,0 mL trietilamin hozzáadását a vizes fázishoz, és azt találtuk, hogy a 2,5 mL trietilamin hozzáadása jobb kromatográfiás csúcsformákat és gradiens elúciós hatásokat eredményezett. Ezért 2,5 mL trietilamint adtunk a vizes fázishoz. A gyógyszerkönyvnek és az irodalomnak megfelelően olyan mobil fázisokat vizsgáltunk, mint az acetonitril: 0,1% ammónium-acetát, acetonitril: 0,2% jégecetsav (trietilaminnal pH=6,2-re beállítva), acetonitril és víz, valamint acetonitril: 0,1% foszforsav. Végül az acetonitril: 0,1% foszforsav vizes oldat gradiens elúcióját választották, amely sima alapvonalat, egyenletes csúcseloszlást és jó elválasztó hatást eredményezett.

Ujjlenyomat-spektrum és tartalom meghatározásának elemzése. Különbségek vannak a kromatográfiás csúcsok számában, a retenciós időben és az azonos retenciós időn belüli csúcsterületben a Fu Mao vasrúd kalapács különböző eredetű mintáinak ujjlenyomat-spektrumában; a 15 tétel gyógyászati anyag ujjlenyomat-spektrumának hasonlósági értékelési eredményei 0,769 és 0,952 között mozogtak; a klaszterelemzés az S1 és S2 mintákat az I. osztályba sorolta; az S3~S5 minták a II. osztályba; az S6~S13 minták a III. osztályba; az S14 és S15 minták a IV. osztályba. Összhangban a főkomponens-elemzés eredményeivel. A főkomponens-elemzést a közös jellemző komponensek kiszűrésére, a meghatározó tényezők azonosítására és a Fumao Iron Rod Hammer gyógyászati anyagok minőségértékelésének referenciájaként használták. A főkomponens-elemzés 1,2-nél nagyobb sajátértékeket használ kivonási kritériumként, és amikor a kumulatív variancia-hozzájárulás mértéke nagyobb, mint 80%, öt főkomponenst kapunk, amelyek a Fu Mao vasrúd-kalapács ujjlenyomat-spektrumában lévő közös csúcsok információinak nagy részét reprezentálni tudják. A tartalom meghatározási eredmények szerint látható, hogy a 12 epiaconitin, a Song Guoling és az aconitin tartalma viszonylag magas, és a korábbi irodalmi áttekintések szerint mind gyulladáscsökkentő és fájdalomcsillapító hatásúak. A 3-acetilakonitin-tartalom azonban általában alacsony a különböző mintákban, és nem használják a Fuzhong Vaskalapács minőségellenőrzési mutatójaként. Ezért a tartalom meghatározásának és a főkomponens-elemzés eredményei alapján ez a kísérlet egyidejűleg hat jellemző komponenst használt, nevezetesen a 2, 3, 4 (12 epiaconitin), 5 (Song Guoling), 6 és 15 (aconitin), amelyek jelentősen hozzájárulnak az öt főkomponenshez és nagy csúcsterületekkel rendelkeznek. Közülük a 2., 3. és 6. csúcsok ismeretlenek, és tömegspektrometriával tovább erősíthetők annak tanulmányozására, hogy felhasználhatók-e minőségellenőrzési indikátorként a Fu Mao Vaskalapács későbbi szakaszában.

A tartalom meghatározásának eredményei azt mutatják, hogy a Qinghai termőterületén található Yushu (S3), Jiuzhi (S4) és Maqin (S5) alkaloidtartalma magasabb; Wang Rong és társai a Fumao vaskalapács alkaloidtartalmát a Ningxiában található Guoluóban, Yushuban, Haidongban és Guyuanban határozták meg. Az eredmények azt mutatták, hogy az alkaloidtartalom a Guoluo Banma és Yushu területén a legmagasabb a Fumao vaskalapácsban, ami összhangban van e tanulmány eredményeivel. A négy komponens közül az akonitin teljes mennyisége a legmagasabb, míg a 3-acetilakonitin teljes mennyisége a legalacsonyabb, ami összhangban van Zhao Meiyu kutatási eredményeivel. A 12 aconitin, Song Guoling, aconitin és 3-acetilakonitin legmagasabb tartalmú termőterületek a Jiangxi Forest Farm Yushuban, Qinghaiban, a Maqin repülőtér Qinghaiban, Aba Sichuanban és Guinan Qinghaiban; a négy alkaloid teljes mennyisége a Jiangxi Forest Farmból és a Maqin repülőtérről származó mintákban szintén a legmagasabb volt. A különböző régiókban a gyógyászati anyagok, mint például a Fu Mao Tie Ban Hammer minősége között különbségek vannak, ami olyan tényezőknek tudható be, mint a növekedési környezet, az éghajlat, a talaj, a gyűjtési idő és a gyógyászati anyagok növekedési évei, amelyek befolyásolják a másodlagos metabolitok felhalmozódását a gyógyászati anyagokban, ami a gyógyászati anyagok hasonlóságában és tartalmában különbségekhez vezet.

A Kínai Gyógyszerkönyv nem terjed ki a Fu Mao Tie Ban Zhong gyógynövény HPLC minőségellenőrzésére. Ezért ebben a tanulmányban a Fu Mao Tie Ban Zhong ujjlenyomat-spektrumának megállapítására HPLC-DAD módszert alkalmaztak, és meghatározták a négy alkaloid-komponens tartalmát. Ugyanakkor a különböző eredetű Fu Mao Tie Ban Zhong minőségének átfogó értékelésére hasonlósági értékelést, klaszterelemzést és főkomponens-elemzést alkalmaztak. A három módszert kölcsönösen ellenőrizték és kiegészítették, elkerülve a gyógynövények minőségének egyetlen komponens tartalma alapján történő értékelésének hátrányát, és referenciát biztosítva a Fu Mao Tie Ban Zhong gyógynövények minőségének értékeléséhez.