Estudio del efecto inhibidor de la oleuropeína sobre la tirosinasa
La tirosinasa (EC. 1.14.18.1) está ampliamente presente en microorganismos, animales, plantas y seres humanos, y es una importante enzima limitante de la velocidad implicada en el proceso de síntesis de la melanina. Su nivel de expresión y su actividad determinan la velocidad y el rendimiento de la síntesis de melanina. La inhibición de la actividad de la tirosinasa puede mejorar el metabolismo de la tirosinasa de las células pigmentarias de la piel, prevenir la formación de pigmentación y desempeñar un papel en la prevención de la formación de pecas, melasma, manchas de la edad y blanqueamiento. Los inhibidores de la tirosinasa utilizados habitualmente, como la quercetina y la hidroquinona, tienen una buena capacidad inhibidora, pero pueden causar efectos secundarios como dermatitis, alergias cutáneas e incluso cáncer de piel. Por lo tanto, la búsqueda de inhibidores de la tirosinasa seguros, eficaces y no tóxicos es actualmente un tema de investigación candente. En la actualidad, las investigaciones han demostrado que los fenoles, los flavonoides y sus derivados, los polisacáridos, los aceites volátiles, los ácidos orgánicos, las cumarinas y otros compuestos de muchos extractos vegetales son buenas fuentes de inhibidores de la tirosinasa.
La oleuropeína es un compuesto glucósido iridoide formado por hidroxitirosol y esqueleto de olivo, distribuido por todo el olivo, con el mayor contenido en las hojas de olivo, seguido del fruto del olivo. En los últimos años, con la continua profundización de la investigación sobre la oleuropeína por parte de estudiosos nacionales y extranjeros, se ha descubierto que tiene diversas actividades biológicas, como antiviral, antitumoral, antibacteriana, antioxidante, hipoglucemiante, hipotensora, antienfermedad de Alzheimer, protección de heridas cutáneas, etc. Sin embargo, existen pocos informes sobre el efecto de la oleuropeína en la actividad de la tirosinasa. El objetivo de este artículo es proporcionar una base teórica para el desarrollo y la utilización de la oleuropeína como ingrediente blanqueador mediante el estudio de su efecto sobre la actividad de la tirosinasa y su mecanismo de acción.

En las reacciones enzimáticas, la velocidad de reacción enzimática se expresa midiendo el incremento de productos por unidad de tiempo. La velocidad inicial se refiere a la velocidad dentro de un cierto período de tiempo al comienzo de la reacción enzimática, en el que la pendiente permanece casi inalterada. A una determinada concentración de sustrato, se obtiene a partir de la pendiente de la tangente de paso por cero de la curva de relación producto-tiempo. El método de medición de la velocidad inicial de la reacción enzimática se utiliza generalmente para determinar la actividad enzimática, con menos factores de interferencia. En este experimento, la curva de tiempo A475nm mostró una relación aproximadamente lineal de 0 a 5,3 minutos de reacción. A medida que aumentaba el tiempo, la curva se aplanaba gradualmente, la pendiente disminuía y la velocidad de reacción también disminuía. En ese momento, la actividad enzimática medida no podía representar la verdadera actividad enzimática, por lo que la velocidad de reacción a los 5,3 minutos de reacción se tomó como velocidad inicial.
El experimento de inhibición de la actividad de la tirosinasa in vitro se divide en experimentos celulares y experimentos bioquímicos. Chan et al. creen que las células pueden simular entornos fisiológicos reales, y medir la actividad de la tirosinasa mediante experimentos celulares es más fiable que medir directamente la actividad de la tirosinasa, y puede reflejar mejor su actividad inhibidora. En este estudio, se observaron diferencias en la actividad inhibidora de la oleuropeína sobre la tirosinasa de células B16 y la tirosinasa de hongos. A nivel celular, la oleuropeína inhibió la actividad de la tirosinasa mejor que el control positivo quercetina. Esto concuerda con los resultados de la investigación de Li et al.
Cuando la piel humana se expone a la radiación ultravioleta, produce una gran cantidad de especies reactivas del oxígeno (ERO) y radicales libres, que aceleran el envejecimiento cutáneo, la pigmentación y la profundización de las arrugas. Las investigaciones han demostrado que las ERO elevadas activan la tirosinasa mediante la movilización de la hormona alfa estimulante de los melanocitos en la epidermis, estimulando en última instancia a los melanocitos para que produzcan melanina. Los antioxidantes promueven el metabolismo normal del organismo eliminando las especies reactivas del oxígeno y los radicales libres, mejorando el estado de la piel, disipando gradualmente los pigmentos y desempeñando así una función blanqueadora. Wang et al. descubrieron que antioxidantes como el ácido glicirrícico, el resveratrol, el resveratrol oxidado y el fenetil resorcinol tienen un efecto sinérgico entre la actividad antioxidante y la inhibición de la tirosinasa cuando se utiliza L-dopa como sustrato, inhibiendo en gran medida la actividad de la tirosinasa. El glucósido amargo del olivo tiene una fuerte actividad antioxidante. Merece estudiarse más a fondo si su inhibición de la actividad de la tirosinasa está relacionada con la actividad antioxidante y si existe un efecto sinérgico entre el glucósido amargo del olivo y los antioxidantes.
La tirosinasa es una enzima clave en la síntesis de melanina. Al inhibir la actividad de la tirosinasa, se puede suprimir la producción de melanina, con lo que se consigue el efecto de blanqueamiento. Los resultados de este estudio indican que la oleuropeína tiene un efecto inhibidor significativo sobre la tirosinasa de las células B16 y la tirosinasa del hongo, mostrando una buena relación dosis-dependiente. A través del análisis cinético, el tipo de efecto inhibidor de la oleuropeína sobre la tirosinasa del hongo es la inhibición reversible no competitiva, es decir, la unión de la oleuropeína a la tirosinasa se produce en un grupo esencial fuera del sitio de unión del sustrato. La oleuropeína no reduce la afinidad de la tirosinasa por el sustrato (L-dopa), sino que inhibe la actividad enzimática bloqueando la acción catalítica de la enzima, reduciendo el Vm. El glucósido amargo del olivo tiene una amplia gama de fuentes, alta seguridad y buena actividad antioxidante. Como materia prima potencial para productos blanqueadores, tiene amplias perspectivas de aplicación.